人鈣結(jié)合蛋白(CR)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法：
1)目測(cè)定性法：加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后，肉眼觀察陽(yáng)性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照；與陰性對(duì)照的顏色接近者，判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2～3SD，作為陽(yáng)性結(jié)果的閾值。
3)以P／N值(陽(yáng)性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽(yáng)性；P／N值小于2．1，但大于1．5為可疑；P／N小于1．5為陰性。
4)定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
我們將在人鈣結(jié)合蛋白(CR)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問(wèn)題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給客戶帶來(lái)一些啟發(fā)，提高試驗(yàn)質(zhì)量。

67402 Polycystin 2(polycystic kidney disease 2)  多囊腎蛋白2抗體  0.5mg
67403 phospho-AKT1/PKB1/2/3(pThr473)peptide  磷酸化蛋白激酶B抗原（*磷酸化位點(diǎn)：473）  0.5mg
67404 RKIP(Raf kinase inhibitor protein)  Raf激酶抑制蛋白抗原  0.5mg
67405 pre-X protein[Hepatitis B virus]N-Terminus  乙肝病毒pre-X蛋白抗原（N端）  0.5mg
67406 pre-X protein(CT)[Hepatitis B virus C-Terminus]  乙肝病毒pre-X蛋白抗原（C端）  0.5mg
67407 PHD3 (Egln3; HIF-prolyl hydroxylase 3)  *羥化酶(多肽)  0.5mg
67408 ADAMTS-7(a disintegrin-like and metalloprotease-7 )  新型金屬基質(zhì)蛋白酶(抗原)  0.5mg
67409 Adiponectin  脂聯(lián)素（多肽片斷抗原）  0.5mg
67410 Adipo R1(adiponectin receptor 1)  脂聯(lián)素受體-1(抗原)  0.5mg
67411 Adipo R2(adiponectin receptor 2)  脂聯(lián)素受體-2(抗原)  0.5mg
67412 PSAP/PAP peptide  前列腺酸性磷酸酶抗原  0.5mg
67413 PSAP/PAP peptide (human)  前列腺酸性磷酸酶抗原(人)  0.5mg
67414 P-selectin  P選擇素抗原  0.5mg
67415 CD63/MLA1  溶酶體膜糖蛋白抗原  0.5mg
67416 PTEN/MMAC1(CT)human, mo, rat, pig, dog, bovine, horse, chicken  一種腫瘤抑制基因抗原（C端）  0.5mg
67417 Parvalbumin  微白蛋白/細(xì)小清蛋白抗原  0.5mg
67418 Peptide YY  酪酪肽多肽（1-36）  0.5mg
67419 Rad51  Rad51抗原  0.5mg
67420 RAP1A (RAS-related protein-1a precursor)  Rap1A抗原  0.2ml
67421 RAR- Beta(Retinoic acid -R- Beta)  維甲酸受體-β抗原  0.5mg
67422 RASSF1A(Ras association domain family 1A)  Ras相關(guān)區(qū)域家族1A抗原  0.5mg
67423 Resistin  抵抗素抗原  0.5mg
67424 RGS2 peptide  G蛋白信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)節(jié)因子2抗原  0.5mg
67425 RhoA (RhoA protein)  RhoA抗原  0.5mg
67426 Rho C(Ras homolog gene family member C)  RhoC抗原  0.5mg
67427 RNF148(Ring finger protein 148)  環(huán)指蛋白148抗原  0.5mg
67428 ROCK1 (Rho-associated coiled-coil containing protein kinase 1)  Rho相關(guān)蛋白激酶1抗原  0.5mg
67429 ROCK2 (Rho-associated coiled-coil containing protein kinase 2)  Rho相關(guān)蛋白激酶2抗原  0.5mg
67430 RXR Alpha(retinoid-X receptor alpha)  核受體RXRα抗原  0.5mg
67431 S6PDH(NADP sorbitol-6-phosphate dehydrogenase)  6-磷酸*脫氫酶抗原  0.5mg
67432 S100B  S100B蛋白抗原  0.5ml
67433 S100B(S100 calcium binding protein B)(human, mouse, rat, bovine, Rabbit, chicken)  S100B蛋白多肽  0.5mg
67434 S-100A1 (S100 calcium-binding protein A1)  鈣結(jié)合蛋白S100A1抗原  0.5mg
67435 SATB1(special AT-rich sequence binding protein)  核基質(zhì)結(jié)合區(qū)結(jié)合蛋白1抗原  0.5mg
67436 SCF (Stem Cell Factor)  干細(xì)胞生長(zhǎng)因子抗原  0.5mg
67437 SCN9A/NAV1.7(Sodium channel protein type 9 subunit alpha)  電壓開(kāi)啟的鈉離子通道SCN9A抗原  0.5mg
67438 CXCL14(CXC-chemokine ligand 16)  CXC趨化因子14抗原  0.5mg
67439 CXCL16 peptide  CXC趨化因子16抗原  0.5mg
67440 Sema3A (semaphorin 3A)  臂板蛋白3A(多肽)  0.5mg
67441 Sema3F (semaphorin 3F)  臂板蛋白3F抗原  0.5mg
67442 SFRP1(Secreted frizzled related protein 1)  分泌型卷曲相關(guān)蛋白1抗原  0.5mg
67443 SGLT1(sodium-glucose cotransporter1)  鈉-葡萄糖共轉(zhuǎn)運(yùn)載體1抗原  0.5mg
67444 Shadow/SPRN(Shadow of prion protein precursor)  新朊蛋白/朊蛋白相關(guān)蛋白/沙杜（Shadoo）蛋白抗原  0.5mg
67445 Shiga-like toxin IIe variant subunit A 0139[Escherichia coli 0139]  大腸桿菌志賀樣毒素Ⅱ型突變體（O139菌型）  0.5mg
67446 Shiga-like toxin IIe variant subunit A[Escherichia coli 0139]  大腸桿菌志賀樣毒素菌體蛋白（O139菌型）  0.5mg
67447 SHP2 peptide  蛋白*磷酸酶2抗原  0.5mg
67448 SIP1 peptide  運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活蛋白結(jié)合蛋白1抗原  0.5mg
67449 SIRT1(sirtuin 1)  沉默調(diào)節(jié)蛋白1抗原  0.5mg
67450 Skp2 peptide  細(xì)胞S相激酶相關(guān)蛋白抗原  0.5mg
67451 SLC4A4(solute carrier family 4:sodium bicarbonate cotransporter NBC1)  *協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4-A4  0.5mg
67452 Slc4a7/Nbcn1(solute carrier family 4, sodium bicarbonate cotransporter, member 7)  *協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4-A7抗原  人鈣結(jié)合蛋白(CR)ELISA試劑盒0.5mg
67453 Smac/DIABLO(the second mitochondrial activator of caspase)  線粒體促凋亡蛋白抗原  0.5mg
67454 SLC33A1(Acetyl-coenzyme A transportor 1)  乙酰*轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1抗原  0.5mg
67455 SLC34A2/NaPi-2b(Solute carrier family 34 member 2)  磷酸鈉協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗原  0.5mg

下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因，并給出相應(yīng)的解決辦法：
1 選擇試劑：選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑，嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣：可能原因： 
1）血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣； 
2）手工操作中，加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí))； 3）加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法： 
1） 標(biāo)本為血清：將血液先自然存放1-2小時(shí)后，再用3000rmp離心15分鐘；標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒*混合5-10次，放置一段時(shí)間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測(cè)，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。 
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。 
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。 
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 
5) 標(biāo)本較多時(shí)，請(qǐng)分批操作。
3 孵育：可能原因： 
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗*； 
2) 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng)，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗*。解決辦法： 
1) 貼封片或加蓋； 
2) 按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板：可能原因： 
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。 
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí)，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不*；洗板針堵塞，抽吸不*；洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差。 
3) 反應(yīng)板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。 解決辦法： 
1) 保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙（選擇干凈、無(wú)或少塵的吸水材料）上輕輕拍干； 
2) 合理安排，或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5人鈣結(jié)合蛋白(CR)ELISA試劑盒顯色：可能原因： 
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或使用過(guò)期顯色劑； 
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法： 
1) 顯色劑盡量在臨用前配制，堅(jiān)持不用過(guò)期顯色劑，肉眼可見(jiàn)淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用； 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流； 
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止：可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽(yáng)性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板：如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過(guò)程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化，有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
在實(shí)際操作中，除了選擇優(yōu)良試劑外，必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作，同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng)，以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本，才能保證檢測(cè)質(zhì)量?，F(xiàn)在國(guó)內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀，這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。
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