人膠原吡啶交聯(lián)(PYD)ELISA試劑盒實驗ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法：
1)目測定性法：加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后，肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照；與陰性對照的顏色接近者，判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2～3SD，作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P／N值(陽性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽性；P／N值小于2．1，但大于1．5為可疑；P／N小于1．5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人膠原吡啶交聯(lián)(PYD)ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給客戶帶來一些啟發(fā)，提高試驗質(zhì)量。

66781 PMP-22(Peripheral Myelin Protein)  外周髓鞘蛋白-22多肽  0.5mg
66782 PI3K  磷脂酰肌醇激酶（抗原）  0.5mg
66783 BMP4(bone morphogenetic protein 4)  骨形態(tài)發(fā)生蛋白4（抗原）  0.5mg
66784 PLGF (Placenta growth factor)  小鼠胎盤生長因子（多肽抗原）  0.5mg
66785 PLGF (Placenta growth factor)  胎盤生長因子（多肽抗原）  0.5mg
66786 PLGF (Placenta growth factor fragment)(human)  人胎盤生長因子（多肽抗原）  0.5mg
66787 PP-1  蛋白磷酸酯酶-1（抗原）  0.5mg
66788 BMPR-1A(Bone Morphogenetic protein Receptor-1A)  骨成型蛋白受體1A抗原  0.5mg
66789 PPAR-delta (peroxisome proliferator-activated receptor)  D型-過氧化酶活化增生受體(多肽）  0.5mg
66790 PP-2A (protein phosphatase 2A)  蛋白質(zhì)磷酸酶-2A（抗原）  0.5mg
66791 BOb-1(B-cell oct-binding protein 1)  B細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子抗原  0.5mg
66792 PP-2B alpha 1   蛋白磷酸酯酶-2B 催化亞單位（抗原）  0.5mg
66793 PR (Progestogerone receptor)  孕激素受體（抗原）  0.5mg
66794 PS-1(NT)，Presennillin-1(S182)  早老素蛋白-1（抗原）  0.5mg
66795 PS-1，Presennillin-1(CT)  早老素蛋白-1（S182）  0.5mg
66796 BRCA1(Breast cancer susceptbility gene 1)(mouse rat)  乳腺癌易感基因1抗原(小鼠 大鼠)  0.5mg
66797 BRCA1(Breast cancer susceptbility gene 1)(human)  乳腺癌易感基因1抗原（人）  0.5mg
66798 PSD-95   突觸后密度蛋白95（抗原）  0.5mg
66799 BRCA2(Breast cancer susceptbility gene 2)  乳腺癌易感基因2抗原  0.5mg
66800 PTP-1B (Protein-tyrosine phosphatase, non-receptor )  蛋白*磷酸酶-1B（抗原）  0.5mg
66801 RAR-Alpha (Retinoic acid -R-Alpha)  維甲酸受體-α 多肽  0.5mg
66802 glycoprotein (E1 glycoprotein) [Rubella virus]  風(fēng)疹病毒糖蛋白多肽片段  0.5mg
66803 SAP-1 (Synapse associated protein-I) peptide  突觸相關(guān)蛋白-1（多肽抗原）  0.5mg
66804 SARS S-protein(抗原)    0.5mg
66805 SARS putative orflab polyprotein (SARS coronavirus CUHK-W1)(抗原)    0.5mg
66806 BSEP peptide  膽汁酸鹽輸出泵蛋白抗原  0.5mg
66807 Secretin  分泌素（抗原）  0.5mg
66808 Secretin receptor  分泌素受體（抗原）  0.5mg
66809 Socs 1 (suppressor of cytokine signaling 1)  細(xì)胞激酶信號-1抑制劑（抗原）  0.5mg
66810 SM-MHC(Cardiac myosin heavy chain)  心肌肌凝蛋白多肽  0.5mg
66811 Alpha-Synuclein  核突觸蛋白（抗原）  0.5mg
66812 Alpha-Synuclein  核突觸蛋白（抗原）  0.5mg
66813 CA15-3 peptide  乳腺癌相關(guān)抗原抗原  0.5mg
66814 Substance P Receptor (Neurokinin receptor1;Tachykinin receptor1)  P物質(zhì)受體（抗原）  0.5mg
66815 p-Caldesmon(phosphor-Ser789)  磷酸化鈣介質(zhì)素抗原  0.5mg
66816 NK-2R peptide  神經(jīng)激肽A受體（多肽抗原）  0.5mg
66817 Calpain 1  鈣蛋白酶（多肽）  0.5mg
66818 Tanis/SELS (Selenoprotein S)又稱SELS  炎癥負(fù)調(diào)控因子蛋白（抗原）  0.5mg
66819 Tau protein  微管相關(guān)蛋白（抗原）  0.5mg
66820 omerase (TE)  端粒酶（催化亞單位）（多肽抗原）  0.5mg
66821 TGF-Alpha (Ttansforming Growth Factor –Alpha)  轉(zhuǎn)移生長因子–α（抗原）  0.5mg
66822 CaMK2a(calcium/calmodulin-dependent protein kinase II alpha)  鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶2α抗原  0.5mg
66823 Camk1g(Calcium/calmodulin dependent protein kinase IG)  鈣/鈣調(diào)蛋白依賴蛋白激酶IG抗原  0.5mg
66824 TGF- Beta1 (Ttansforming Growth Factor – Beta1)  轉(zhuǎn)移生長因子–β1（抗原）  0.5mg
66825 CaMK2b(calcium/calmodulin-dependent protein kinase II beita)  鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶2b抗原  0.5mg
66826 CAP1/Park7/DJ-1  Park7/DJ-1/CAP1抗原  0.5mg
66827 CAP2(Adenylyl cyclase-associated protein 2)  環(huán)化酶相關(guān)蛋白CAP-2抗原  0.5mg
66828 TGF- Beta2 (Ttansforming Growth Factor – Beta2)  轉(zhuǎn)移生長因子–β2（抗原）  0.5mg
66829 TGF- Beta3 (Ttansforming Growth Factor – Beta3)  轉(zhuǎn)移生長因子–β3（抗原）  0.5mg
66830 TGF- Beta R2 peptide  轉(zhuǎn)移生長因子β受體2（多肽抗原）  0.5mg
66831 Thymosin Alpha-1  * α-1 （*-Thymosin alpha-1）  0.5mg
66832 Caspase-12  半胱胺酸蛋白酶蛋白-12(多肽)  0.5mg
66833 Caspase-12(hunman)  半胱胺酸蛋白酶蛋白-12抗原(人)  0.5mg
66834 TmR2(GDNFR Beta；TRN-R；GFR-alpha-2；NTNR-2)  膠質(zhì)細(xì)胞系源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（多肽）人膠原吡啶交聯(lián)(PYD)ELISA試劑盒  0.5mg
66835 TNF-Alpha(Tumor Necrosis Factor-Alpha)  人腫瘤壞死因子-α（多肽抗原）  0.5mg
66836 TRA16 (Testicular orphan nuclear receptor-4 (TR4)-associated protein)  睪丸激素受體相關(guān)蛋白  0.5mg

下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結(jié)果的原因，并給出相應(yīng)的解決辦法：
1 選擇試劑：選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑，嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣：可能原因： 
1）血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣； 
2）手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時)； 3）加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法： 
1） 標(biāo)本為血清：將血液先自然存放1-2小時后，再用3000rmp離心15分鐘；標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒*混合5-10次，放置一段時間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。 
2) 加樣后及時放入孵箱。 
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。 
4) 如果采用AT或其他全自動加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 
5) 標(biāo)本較多時，請分批操作。
3 孵育：可能原因： 
1) 孵育時未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗*； 
2) 孵育時間人為延長，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗*。解決辦法： 
1) 貼封片或加蓋； 
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間。
4 洗板：可能原因： 
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。 
2) 采用半自動洗板機(jī)洗板時，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不*；洗板針堵塞，抽吸不*；洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差。 
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法： 
1) 保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙（選擇干凈、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干； 
2) 合理安排，或多用幾臺洗板機(jī)。
5人膠原吡啶交聯(lián)(PYD)ELISA試劑盒顯色：可能原因： 
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑； 
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法： 
1) 顯色劑盡量在臨用前配制，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用； 2) 加樣時保持顯色劑不外流； 
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止：可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板：如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化，有效提高檢測質(zhì)量。
在實際操作中，除了選擇優(yōu)良試劑外，必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作，同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評，以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本，才能保證檢測質(zhì)量?，F(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標(biāo)儀，這對于實現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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