人脫氧膠原吡啶交聯(lián)(DPD)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法：
1)目測(cè)定性法：加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后，肉眼觀察陽(yáng)性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照；與陰性對(duì)照的顏色接近者，判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2～3SD，作為陽(yáng)性結(jié)果的閾值。
3)以P／N值(陽(yáng)性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽(yáng)性；P／N值小于2．1，但大于1．5為可疑；P／N小于1．5為陰性。
4)定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
我們將在人脫氧膠原吡啶交聯(lián)(DPD)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問(wèn)題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給客戶帶來(lái)一些啟發(fā)，提高試驗(yàn)質(zhì)量。

66723 NGF- Beta  神經(jīng)生長(zhǎng)因子-β(多肽片斷抗原)  0.5mg
66724 Ang I/AT1(Angiotensin I)  血管緊張素I抗原  0.5mg
66725 NGF-R(p75NTR)  神經(jīng)生長(zhǎng)因子受體（抗原）  0.5mg
66726 AT1R(Angiotensin II Type 1 Receptor)  血管緊張素Ⅱ-1型受體抗原  0.5mg
66727 AT1R/AGTR1(Angiotensin II Type 1 Receptor)  血管緊張素Ⅱ-1型受體抗原  0.5mg
66728 NIK，NF-kappaB-Inducing Kinase  NFkB誘導(dǎo)的激酶（抗原）  0.5mg
66729 ATF1 (Activating Transcription Factor1)  活化復(fù)制因子1  0.5mg
66730 NKB (Neurokinins B)  神經(jīng)激肽B（抗原）  0.5mg
66731 ATF2 (Activating Transcription Factor2)  活化復(fù)制因子2（多肽）  0.5mg
66732 phospho-ATF2(pSer490/pSer498)  磷酸化活化復(fù)制因子2抗原  0.5mg
66733 NKR ； Neurokin B receptor (Neuromedin K receptor; NK-4 receptor)  神經(jīng)激肽-B受體（抗原）  0.5mg
66734 ATF3 (Activating Transcription Factor3)  活化轉(zhuǎn)錄因子3抗原  0.5mg
66735 ATM(ataxia angiectasia mutated)  毛細(xì)血管擴(kuò)張性共濟(jì)失調(diào)癥突變蛋白抗原  0.5mg
66736 ATF6(activating transcription factor 6)  活化轉(zhuǎn)錄因子6抗原  0.5mg
66737 ATP1b2/Na+K+ ATPase(ATPase, Na+/K+ transporting, beta 2 polypeptide)  鈉鉀ATP酶通道蛋白抗原  0.5mg
66738 Kir6.2 peptide  ATP敏感性鉀通道亞基kir6.2抗原  0.5mg
66739 AVPR2(arginine vasopressin receptor 2)  *加壓素受體2抗原  0.5mg
66740 Aurora B  極光激酶B抗原  0.5mg
66741 Nociceptin  孤菲肽（痛敏肽）（抗原）  
66742 B7-H1/PDL1/CD274(programmed death ligand 1)  程序性死亡配體1（多肽）  0.5mg
66743 Nociceptin receptor  孤菲肽受體（痛敏肽受體）（抗原）  0.5mg
66744 Nogo-A  軸索過(guò)度生長(zhǎng)抑制因子-A（抗原）  0.5mg
66745 Nogo-66 1-40 peptide  Nogo-66 (1-40)多肽  0.5mg
66746 Nogo R  軸索過(guò)度生長(zhǎng)抑制因子受體（多肽抗原）  0.5mg
66747 Bad (BCL-xL/BCL-2-associated death promoter)  相關(guān)死亡促進(jìn)因子Bad抗原  0.5mg
66748 Bad (BCL-xL/BCL-2-associated death promoter)  相關(guān)死亡促進(jìn)因子Bad抗原  0.5mg
66749 phospho-BAD(pSer128)  磷酸化相關(guān)死亡促進(jìn)因子抗體  0.5mg
66750 Bak(BCL2 homologous antagonist/killer)  Bcl-2同源拮抗劑Bak（多肽）  0.2mg
66751 NOS-1(bNOS:neuronal NOS:nNOS:Nitric Oxide synthase-1)  一氧化氮合成酶-1（抗原）  0.5mg
66752 NOS-2 (iNOS) Nitric Oxide Synthase,Inducible  一氧化氮合成酶-2（抗原）  0.5mg
66753 Batroxobin  蛇***毒***巴***曲***酶***抗***原  0.5mg
66754 NOS-3 (eNOS) endotheli cell NOS  一氧化氮合成酶-3（抗原）  0.5mg
66755 NPY ( Neuropeptide Y)  神經(jīng)肽 Y（抗原）  0.5mg
66756 NR2B (Glutamate receptor)  *受體（抗原）  0.5mg
66757 NT-3  神經(jīng)生長(zhǎng)因子-3（抗原）  0.5mg
66758 NT-4,NT-5  神經(jīng)生長(zhǎng)因子4/5（抗原）  0.5mg
66759 NTN (Neurturin)  神經(jīng)生長(zhǎng)因子（抗原）  0.5mg
66760 Bcl-xL(human, mo, rat, bovine, dog, pig, sheep, horse)  Bcl-xL蛋白抗原  0.5mg
66761 phospha-Bcl-xL (pSer62) peptide (human, mo, rat, bovine, dog, pig, sheep, horse)  磷酸化(Ser62)Bcl-xL蛋白抗原  0.5mg
66762 BCHE(butyrylcholinesterase)NT  丁酰*脂酶抗原(N端)  0.5mg
66763 BCHE(butyrylcholinesterase)CT  丁酰*脂酶抗原(C端)  0.5mg
66764 Nurr1  核受體相關(guān)因子-1（抗原）  0.5mg
66765 CD73 (5′-nucleotidase cytosolic II )  胞漿-5′-核苷酸酶-Ⅱ 抗原  0.5mg
66766 BECN1(Beclin1)  一種抑癌基因（多肽）  0.5mg
66767 OGP (Ostegenic Growth Peptide)  成骨生長(zhǎng)肽 (骨生長(zhǎng)激素肽)(蛋白多肽)  0.5mg
66768 OPN  骨橋蛋白（多肽抗原）  0.5mg
66769 BAFF/CD257(B cell activating factor)  TNF家族B細(xì)胞激活因子抗原  0.5mg
66770 P53  腫瘤抑制基因（抗原）  0.5mg
66771 PACAP-27/38  腺苷酸環(huán)化酶激活肽-27/38（抗原）  0.5mg
66772 PACAP-38  腺苷酸環(huán)化酶激活肽-38（抗原）  0.5mg
66773 Bid (BH3 interacting domain death agonist)  BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導(dǎo)蛋白抗原  0.5mg
66774 PACAP/VIP receptor  腺苷酸環(huán)化酶激活肽/血管活性腸肽受體（抗原）  0.5mg
66775 PACAP receptor-I  腺苷酸環(huán)化酶激活肽受體（抗原）  0.5mg
66776 PADI4 (HL-60 PAD)(Protein-arginine deiminase type IV，PADI 4，PAD I4 )  關(guān)節(jié)炎相關(guān)基因  人脫氧膠原吡啶交聯(lián)(DPD)ELISA試劑盒0.5mg
66777 PDGF-A  血小板源性生長(zhǎng)因子-1（抗原）  0.5mg
66778 PDGF-B  血小板源性生長(zhǎng)因子-B（抗原）  0.5mg

下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因，并給出相應(yīng)的解決辦法：
1 選擇試劑：選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑，嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣：可能原因： 
1）血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣； 
2）手工操作中，加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí))； 3）加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法： 
1） 標(biāo)本為血清：將血液先自然存放1-2小時(shí)后，再用3000rmp離心15分鐘；標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒*混合5-10次，放置一段時(shí)間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測(cè)，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。 
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。 
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。 
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 
5) 標(biāo)本較多時(shí)，請(qǐng)分批操作。
3 孵育：可能原因： 
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗*； 
2) 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng)，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周?chē)?，難以清洗*。解決辦法： 
1) 貼封片或加蓋； 
2) 按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板：可能原因： 
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。 
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí)，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不*；洗板針堵塞，抽吸不*；洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差。 
3) 反應(yīng)板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。 解決辦法： 
1) 保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙（選擇干凈、無(wú)或少塵的吸水材料）上輕輕拍干； 
2) 合理安排，或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5人脫氧膠原吡啶交聯(lián)(DPD)ELISA試劑盒顯色：可能原因： 
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或使用過(guò)期顯色劑； 
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法： 
1) 顯色劑盡量在臨用前配制，堅(jiān)持不用過(guò)期顯色劑，肉眼可見(jiàn)淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用； 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流； 
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止：可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽(yáng)性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板：如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過(guò)程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化，有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
在實(shí)際操作中，除了選擇優(yōu)良試劑外，必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作，同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng)，以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本，才能保證檢測(cè)質(zhì)量?，F(xiàn)在國(guó)內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀，這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。
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