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上海紀寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時間:2017-02-09 21:04:00瀏覽次數(shù):261次
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人GTP酶活化蛋白(GAP)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯(lián)免疫實驗得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人GTP酶活化蛋白(GAP)ELISA試劑盒實驗ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人GTP酶活化蛋白(GAP)ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗質(zhì)量。
66441 Streptavidin,SA 鏈霉親和素 1mg
66442 Recomb Protein G/FITC 熒光素(FITC)標記重組蛋白-G 0.5ml
66443 Recomb Protein A 重組蛋白A 1mg
66444 Recomb Protein G 重組蛋白G 1mg
66445 GST-Tag protein 重組*S-轉(zhuǎn)移酶 0.5mg
66446 Cholesterol * 100g
66447 Have the biological activity Peptide products 有生物學(xué)活性的多肽產(chǎn)品
66448 Beta-Amyloid(1-16) β淀粉樣肽1-16(多肽蛋白) 0.5mg
66449 Beta-Amyloid (31-35) β淀粉樣肽31-35(多肽蛋白) 0.1mg
66450 Beta-Amyloid(1-28) β淀粉樣肽1-28(多肽蛋白) 0.5mg
66451 Beta-Amyloid(1-40) β淀粉樣肽(1-40)(多肽蛋白) 0.1mg
66452 A Beta1-40 (mutation type, MT) peptide 突變型β淀粉樣肽1-40 0.1mg
66453 A Beta1-40 (H-3-me6;H-3-me13;H-3-me14; Beta-Amyloid 1-40) β淀粉樣肽1-40(結(jié)構(gòu)改造) 0.1mg
66454 A Beta29-40( Beta-Amyloid 29-40) β淀粉樣肽29-40(野生型) 0.1mg
66455 A Beta29-42( Beta-Amyloid 29-42) β淀粉樣肽29-42(野生型) 0.1mg
66456 Beta-Amyloid (1-42) β淀粉樣肽(1-42)(多肽蛋白) 0.1mg
66457 Amyloid Beta 25-35( Beta-Amyloid 25-35) β淀粉樣肽25-35(多肽) 1mg
66458 Beta-Amyloid 1-42 CT β淀粉樣肽 1-42 (C端多肽) 0.1mg
66459 Amylin 糖尿病相關(guān)肽(胰島淀粉樣肽) 0.5mg
66460 APP695-770/APP17肽 (Amyloid protein precursor) 淀粉樣肽前體蛋白(17肽抗原) 0.5mg
66461 Neuroprotective peptide/Gly-HN(Nuclear-encoded Humanin [HN(N)] Gly14) 神經(jīng)保護肽 0.5mg
66462 Amylin(1-37)Diabetes Associated Peptide (DAP), amide, human 糖尿病相關(guān)肽(胰島淀粉樣肽) 0.5mg
66463 CCP peptide (cyclic citrullinated peptide,CCP) 瓜氨酸環(huán)肽 0.5mg
66464 CCP peptide (cyclic citrullinated peptide,CCP) 瓜氨酸環(huán)肽 0.5mg
66465 GLP-1(Glucagon-like peptide-1)(7-36)peptide 胰高血糖素樣肽-1(多肽) 0.1mg
66466 ADM (Adrenomedullin)ProAM-N20 Rat, human, mo, pig, dog, bov 腎上腺髓質(zhì)素蛋白(N端20肽) 0.5mg
66467 GRGDS peptide 粘附多肽GRGDS 1mg
66468 PACAP(1-38 Peptide) 腺苷酸環(huán)化酶激活肽 1-38(全蛋白) 0.5mg
66469 MBP(Myelin Basic Protein, MBP)peptide 髓鞘堿性蛋白(多肽抗原) 0.5mg
66470 Bursin 囊素三肽/三肽囊素/雞法氏囊三肽 100mg
66471 NPY ( Neuropeptide Y)1-36 神經(jīng)肽 Y(1-36多肽) 0.5mg
66472 Leupeptin 亮抑酶肽 1mg
66473 GRP( Gastrin Releasing Peptide ) 促胃泌素釋放肽(抗原) 0.5mg
66474 BSA(標準) 牛血清白蛋白(標準) 1mg
66475 MBP (Myelin Basic Protein, Rat)peptide 髓鞘堿性蛋白(多肽)大鼠 0.5mg
66476 MOG35-55 (myelin oligo-dendrocyte glycoprotein-MOG) 髓鞘少樹突膠質(zhì)細胞糖蛋白(抗原) 1mg
66477 IGF-I( Insulin-like Growth Factor-I ) 胰島素樣生長因子-I(抗原) 0.5mg
66478 VIP (Vasoactive Intestinal peptide) 血管活性腸肽 0.5mg
66479 IGF-II( Insulin-like Growth Factor-II ) 胰島素樣生長因子-II(抗原) 0.5mg
66480 TP-5(Thymopentin) * 0.5mg
66481 Galanin 神經(jīng)節(jié)肽(抗原) 0.5mg
66482 GLP-2(Glucagon-like peptide-2) 胰高血糖素樣肽-2蛋白 0.5mg
66483 ADNP (NAP) (Activity-dependent Neuroprotective protein ) 活性依賴的神經(jīng)保護肽(抗原) 0.5mg
66484 AACT(Alpha-1-Anti-chymotrypsin) α-1抗胰* 10mg
66485 AACT protein(Alpha chymotrypsin protein) 胰* 5mg
66486 ACTH (Adrenorticotrophin hormons)(1-39) 促腎上腺皮質(zhì)激素(1-39)(抗原) 0.1mg
66487 ADM 1-52/AM 1-52 (Adrenomedullin 1-52) 腎上腺髓質(zhì)素(1-52) 0.1mg
66488 ACTH (Adrenorticotrophin hormons)(18-39) 促腎上腺皮質(zhì)激素(18-39)(抗原) 0.5mg
66489 SP (Substance P) P物質(zhì)(抗原) 0.5mg
66490 Ghrelin 腦腸肽(一種新的生長激素釋放肽)多肽抗原 0.5mg
66491 Gastrin(human)peptide(1-17) 胃泌素/蛙皮素(多肽人源) 0.5mg
66492 myelin P0 prothein( peripheral myelin prothein Zero;MPZ;MPP) 外周髓鞘蛋白0(P0蛋白)多肽抗原人GTP酶活化蛋白(GAP)ELISA試劑盒 0.5mg
66493 Insulin protein (from porcine pancreas) 豬胰島素蛋白 0.5mg
66494 bovine Insulin protein 牛胰島素蛋白 10mg
66495 Tachyplesin I(Tachyplesin-1 precursor ) 抗菌肽 0.5mg
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人GTP酶活化蛋白(GAP)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴謹?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標本,才能保證檢測質(zhì)量?,F(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現(xiàn)ELISA標準化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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