人脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白(aFABP)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法：
1)目測(cè)定性法：加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后，肉眼觀察陽(yáng)性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照；與陰性對(duì)照的顏色接近者，判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2～3SD，作為陽(yáng)性結(jié)果的閾值。
3)以P／N值(陽(yáng)性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽(yáng)性；P／N值小于2．1，但大于1．5為可疑；P／N小于1．5為陰性。
4)定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
我們將在人脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白(aFABP)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問(wèn)題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給客戶帶來(lái)一些啟發(fā)，提高試驗(yàn)質(zhì)量。

66210 Rabbit Anti-MK IgM/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗猴IgM  0.3ml
66211 Rabbit Anti-pig IgG/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗豬IgG  0.3ml
66212 Rabbit Anti-Pig IgM/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗豬IgM  0.3ml
66213 Rabbit Anti-Dog IgG/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗狗IgG  0.3ml
66214 Rabbit Anti-Rat IgG/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗大鼠IgG  0.3ml
66215 Rabbit Anti-rat IgM/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗大鼠IgM  0.3ml
66216 Rabbit Anti- guinea pig IgG/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗豚鼠IgG  0.3ml
66217 Rabbit Anti- guinea pig IgM/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗豚鼠IgM  0.3ml
66218 Rabbit Anti-bov IgG/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗牛IgG  0.3ml
66219 Rabbit Anti-bov IgM/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗牛IgM  0.3ml
66220 Rabbit Anti-chi IgG/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗雞IgG  0.3ml
66221 Rabbit Anti-chi IgM/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗雞IgM  0.3ml
66222 Rabbit Anti-Goat IgG/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗羊IgG  0.3ml
66223 Rabbit Anti-Goat IgM/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗羊IgM  0.3ml
66224 Rabbit Anti-mouse IgG/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗小鼠IgG  0.3ml
66225 Rabbit Anti-mouse IgM/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗小鼠IgM  0.3ml
66226 Goat Anti-human Fibrinogen/FITC  熒光素標(biāo)記羊抗*  0.3ml
66227 Rabbit Anti-horse IgG/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗馬IgG  0.3ml
66228 Rabbit Anti-human IgG/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人IgG  0.3ml
66229 Rabbit Anti-Meiiones Unguiculataus Milme-Edwauds/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗長(zhǎng)爪沙鼠IgG  0.3ml
66230 Avidin/FITC  熒光素標(biāo)記親合素  0.1ml
66231 Streptavidin/FITC   熒光素標(biāo)記鏈霉親和素  0.3ml
66232 Donkey Anti-human IgG/FITC  熒光素標(biāo)記驢抗人IgG  0.3ml
66233 Donkey Anti-rabbit/FITC  熒光素標(biāo)記驢抗兔IgG  0.3ml
66234 Donkey Anti-Goat IgG/FITC  熒光素標(biāo)記驢抗羊IgG  0.3ml
66235 Donkey Anti-Guinea IgG/FITC  熒光素標(biāo)記驢抗豚鼠IgG  0.3ml
66236 rec Protein G/FITC  熒光素標(biāo)記重組純化蛋白G  0.3ml
66237 rec Protein A/FITC  熒光素標(biāo)記重組純化蛋白A  0.3ml
66238 Goat Anti-bovine IgG/Gold  金標(biāo)記羊抗牛IgG(10/15nm)  0.5ml
66239 Goat Anti-Bovine IgM/Gold  金標(biāo)記羊抗牛IgM(10nm/15nm)  2ml
66240 Goat Anti-human serum albumin/Gold  金標(biāo)記羊抗人白蛋白(10/15nm)  2ml
66241 Goat Anti-human C3/Gold  金標(biāo)記羊抗人IgC3(10nm/15nm)  2ml
66242 Goat Anti-human Fibrinogen/Gold  金標(biāo)記羊抗*(10nm/15nm)  2ml
66243 Goat Anti-human IgA/Gold  金標(biāo)記羊抗人IgA(10nm/15nm)  0.5ml
66244 Goat Anti-human IgG/Gold  金標(biāo)記羊抗人IgG(10nm/15nm)  0.5ml
66245 Goat Anti-human IgM/Gold  金標(biāo)記羊抗人IgM (10nm/15nm)  0.5ml
66246 Goat Anti-mouse IgG/Gold  金標(biāo)記羊抗小鼠IgG(10nm/15nm)  0.5ml
66247 Goat Anti-mouse IgM/Gold  金標(biāo)記羊抗小鼠IgM(10nm/15nm)  0.5ml
66248 Goat Anti-rat IgG/Gold  金標(biāo)記羊抗大鼠IgG(10nm/15nm)  0.5ml
66249 Goat Anti-Guinea pig IgG/Gold  金標(biāo)記羊抗豚鼠IgG (10nm/15nm)  0.5ml
66250 Goat Anti-rabbit IgG/Glod  金標(biāo)記羊抗兔IgG(10nm/15nm)  0.5ml
66251 Mouse Anti-Goat IgG/Gold  金標(biāo)記鼠抗羊IgG(10nm/15nm)  2ml
66252 Mouse Anti-Goat IgM/Gold  金標(biāo)記鼠抗羊IgM (10nm/15nm)  2ml
66253 Mouse Anti-human IgG/Gold  金標(biāo)記小鼠抗人IgG (10nm/15nm)  2ml
66254 Mouse Anti-human IgM/Gold  金標(biāo)記小鼠抗人IgM (10nm/15nm)  2ml
66255 Mouse Anti-rabbit IgG/Gold  金標(biāo)記小鼠抗兔IgG (10nm/15nm)  0.5ml
66256 Mouse Anti-rabbit IgM/Gold  金標(biāo)記小鼠抗兔IgM (10nm/15nm)  2ml
66257 Mose Anti-rat IgG/Gold  金標(biāo)記小鼠抗大鼠IgG (10nm/15nm)  2ml
66258 Mose Anti-rat IgM/Gold  金標(biāo)記小鼠抗大鼠IgM(10nm/15nm)  2ml
66259 Rabbit Anti-Avidin/Gold  金標(biāo)記兔抗親和素 (10nm/15nm)  2ml
66260 Rabbit Anti-human IgG/Gold  金標(biāo)記兔抗人IgG(10nm/15nm)  0.5ml
66261 Rabbit Anti-human IgM/Gold  金標(biāo)記兔抗人IgM (10nm/15nm)  0.5ml
66262 Rabbit Anti-human IgA/Gold  金標(biāo)記兔抗人IgA(10nm/15nm)  0.5ml
66263 Rabbit Anti-bovine IgG/Gold  金標(biāo)記兔抗牛IgG(10或15nm)  0.5ml
66264 Rabbit Anti-Bovine IgM/Gold  金標(biāo)記兔抗牛IgM (10或15nm)  2ml
66265 Rabbit Anti-Bovine TG/Gold  金標(biāo)記兔抗牛甲狀腺球蛋白 (10或15nm)  2ml
66266 Rabbit Anti-chicken IgG/Gold  金標(biāo)記兔抗雞IgG(10nm/15nm)  0.5ml
66267 Rabbit Anti-chicken IgM/Gold  金標(biāo)記兔抗雞IgM (10nm/15nm)  2ml
66268 Rabbit Anti-dog IgG/Gold  人脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白(aFABP)ELISA試劑盒金標(biāo)記兔抗狗IgG (10nm/15nm)  2ml
66269 Rabbit Anti-dog IgM/Gold  金標(biāo)記兔抗狗IgM (10nm/15nm)  2ml
66270 Rabbit Anti-FITC/Gold  金標(biāo)記兔抗熒光素 (10nm/15nm)  2ml
66271 Rabbit Anti-Goat IgG/Gold  金標(biāo)記兔抗羊IgG (10nm/15nm)  0.5ml

下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因，并給出相應(yīng)的解決辦法：
1 選擇試劑：選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑，嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣：可能原因： 
1）血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣； 
2）手工操作中，加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí))； 3）加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法： 
1） 標(biāo)本為血清：將血液先自然存放1-2小時(shí)后，再用3000rmp離心15分鐘；標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒*混合5-10次，放置一段時(shí)間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測(cè)，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。 
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。 
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。 
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 
5) 標(biāo)本較多時(shí)，請(qǐng)分批操作。
3 孵育：可能原因： 
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗*； 
2) 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng)，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周?chē)?，難以清洗*。解決辦法： 
1) 貼封片或加蓋； 
2) 按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板：可能原因： 
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。 
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí)，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不*；洗板針堵塞，抽吸不*；洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差。 
3) 反應(yīng)板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。 解決辦法： 
1) 保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙（選擇干凈、無(wú)或少塵的吸水材料）上輕輕拍干； 
2) 合理安排，或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5人脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白(aFABP)ELISA試劑盒顯色：可能原因： 
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或使用過(guò)期顯色劑； 
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法： 
1) 顯色劑盡量在臨用前配制，堅(jiān)持不用過(guò)期顯色劑，肉眼可見(jiàn)淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用； 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流； 
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止：可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽(yáng)性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板：如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過(guò)程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化，有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
在實(shí)際操作中，除了選擇優(yōu)良試劑外，必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作，同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng)，以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本，才能保證檢測(cè)質(zhì)量?，F(xiàn)在國(guó)內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀，這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。
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