人鳥(niǎo)苷酸結(jié)合蛋白4(Gbp4)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法：
1)目測(cè)定性法：加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后，肉眼觀察陽(yáng)性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照；與陰性對(duì)照的顏色接近者，判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2～3SD，作為陽(yáng)性結(jié)果的閾值。
3)以P／N值(陽(yáng)性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽(yáng)性；P／N值小于2．1，但大于1．5為可疑；P／N小于1．5為陰性。
4)定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
我們將在人鳥(niǎo)苷酸結(jié)合蛋白4(Gbp4)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問(wèn)題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給客戶(hù)帶來(lái)一些啟發(fā)，提高試驗(yàn)質(zhì)量。

66042 Anti-Zfp91/FITC  熒光素標(biāo)記白血病相關(guān)新基因抗體IgG  0.2ml
66043 Anti-ZNF217/FITC  熒光素標(biāo)記鋅指脂蛋白217抗體IgG  0.2ml
66044 Anti-ZNF268(1a)/FITC  熒光素標(biāo)記鋅指脂蛋白-1a抗體IgG  0.2ml
66045 Anti-ZNF268(1b)/FITC  熒光素標(biāo)記鋅指脂蛋白-1b抗體IgG  0.2ml
66046 Anti-ZNF268(1c)/FITC  熒光素標(biāo)記鋅指脂蛋白-1c抗體IgG  0.2ml
66047 Anti-ZNF300 /FITC  熒光素標(biāo)記鋅指蛋白300抗體IgG  0.2ml
66048 Anti-ZNF307/FITC  熒光素標(biāo)記鋅指蛋白307抗體IgG  0.2ml
66049 Anti-ZNF474/FITC  熒光素標(biāo)記鋅指蛋白474抗體IgG  0.2ml
66050 Anti-ZO-1/FITC  熒光素標(biāo)記胞質(zhì)緊密粘連蛋白1抗體IgG  0.2ml
66051 Anti-ZW10 peptide/FITC  熒光素標(biāo)記著絲粒蛋白抗體IgG  0.2ml
66052 Anti-Zyxin/FITC  熒光素標(biāo)記斑聯(lián)蛋白抗體IgG  0.2ml
66053 Anti-Phospho-Zyxin (Ser142/Ser143)/FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化斑聯(lián)蛋白抗體IgG  0.2ml
66054 Anti-TORC1/CRTC1/FITC   熒光素標(biāo)記環(huán)腺苷酸應(yīng)答元件結(jié)合蛋白轉(zhuǎn)錄共激活因子TORC1抗體IgG  0.2ml
66055 Anti-Torc2/Crtc2/FITC   熒光素標(biāo)記CREB轉(zhuǎn)錄共激活因子TORC2抗體IgG  0.2ml
66056 Anti-Phospho-Torc2/Crtc2 (Ser171)/FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化CREB轉(zhuǎn)錄共激活因子TORC2抗體IgG  0.2ml
66057 Anti-Gentamicin Monoclonal Antibody /Gold   膠體金離子標(biāo)記小鼠抗*單克隆抗體IgG  0.5ml（35nm-40nm）
66058 Anti-Gentamicin/Gold   膠體金離子標(biāo)記兔*抗體IgG  0.5ml（35nm-40nm）
66059 Anti-HBcAg/FITC  熒光素標(biāo)記小鼠抗人乙肝核心抗原抗體IgG  0.2ml
66060 Anti-HBeAg/FITC  熒光素標(biāo)記小鼠抗人乙肝e抗原抗體（1）IgG  0.2ml
66061 Anti-HBeAg/FITC  熒光素標(biāo)記小鼠抗人乙肝e抗原抗體（2）IgG  0.2ml
66062 Anti-HBsAg/FITC  熒光素標(biāo)記小鼠抗人乙肝表面抗原抗體IgG  0.2ml
66063 Anti-HBsAg/FITC  熒光素標(biāo)記山羊抗人乙肝表面抗原抗體 IgG  0.2ml
66064 Anti-HAS/FITC  熒光素標(biāo)記鼠抗人血清白蛋白單克隆抗體IgG  0.2ml
66065 Anti-SPECA/a-fodrin/FITC  熒光素標(biāo)記a-包襯蛋白抗體IgG  0.2ml
66066 Anti- Alpha-AF/ Alpha-Afa/FITC  熒光素標(biāo)記α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶抗體IgG  0.2ml
66067 Anti-AFP/FITC  熒光標(biāo)記鼠抗人甲胎蛋白單克隆抗體IgG  0.2ml
66068 Anti-AFP/HRP  辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記鼠抗人甲胎蛋白單克隆抗體（包被）IgG  0.2ml
66069 Anti-AFP/Biotin  *化鼠抗人甲胎蛋白單克隆抗體（包被）IgG  0.2ml
66070 Anti-AFP/HRP  辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記鼠抗人甲胎蛋白單克隆抗體(檢測(cè))IgG  0.2ml
66071 Anti-AFP/Biotin  *化鼠抗人甲胎蛋白單克隆抗體(檢測(cè))IgG  0.2ml
66072 Anti-CEA/Gold  膠體金離子標(biāo)記鼠抗人癌胚抗原單克隆抗體（包被）IgG  0.2ml
66073 Anti-CEA/HRP  辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記鼠抗人癌胚抗原單克隆抗體（包被）IgG  0.2ml
66074 Anti-CEA/Gold  膠體金離子標(biāo)記鼠抗人癌胚抗原單克隆抗體（檢測(cè)）IgG  0.2ml
66075 Anti-CEA/HRP  辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記鼠抗人癌胚抗原單克隆抗體（檢測(cè)）IgG  0.2ml
66076 Anti-CEA/Biotin  *化鼠抗人癌胚抗原單克隆抗體（檢測(cè)）IgG  0.2ml
66077 Anti-GST-Tag/Biotin  *標(biāo)記兔抗重組*轉(zhuǎn)移酶GST標(biāo)簽蛋白抗體IgG  0.2ml
66078 Anti-CD167a(DDR1)/HRP  辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記CD167a抗體IgG  0.2ml
66079 Anti- Alpha -HCG/Gold  膠體金離子α 亞基人絨毛膜*單抗 IgG  0.2ml
66080 Anti- Beta-HCG/Gold  膠體金離子標(biāo)記小鼠抗人β亞基人絨毛膜*單抗IgG  0.2ml
66081 Anti-PSA /Gold  膠體金離子標(biāo)記抗鼠抗人前列腺特異性抗原單克隆抗體(檢測(cè))IgG  0.2ml
66082 Anti-TRF/Gold  金離子標(biāo)記抗轉(zhuǎn)鐵蛋白抗體IgG  0.5ml(15nm)
66083 Anti-CD8/PE  熒光素藻紅蛋白標(biāo)記兔抗人、大、小鼠CD8抗體IgG  0.2ml
66084 Anti-VWF/PE  熒光素PE標(biāo)記血管性血友病因子抗體IgG  0.2ml
66085 Anti-factor VIII/PE  熒光素PE標(biāo)記第八因子相關(guān)抗原抗體IgG  0.2ml
66086 Anti-Annexin V/PE  熒光素PE標(biāo)記兔抗人、大、小鼠、牛Annexin V抗體IgG  0.2ml
66087 Anti-CD184/CXC-R4/PE  熒光素PE標(biāo)記細(xì)胞表面趨化因子受體4抗體IgG  0.2ml
66088 Anti-CD64/PE  熒光素PE標(biāo)記免疫球蛋白G Fc段受體I  0.2ml
66089 Anti-WBSCR14/ChREBP /FITC  熒光素標(biāo)記糖類(lèi)應(yīng)答元件結(jié)合蛋白ChREBP抗體IgG  0.2ml
66090 Biotin/HRP  辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記*  0.1ml
66091 Avidin/HRP  人鳥(niǎo)苷酸結(jié)合蛋白4(Gbp4)ELISA試劑盒辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親合素  0.1ml
66092 Goat Anti-human C3/HRP  辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記羊抗人補(bǔ)體C3  0.1ml
66093 Goat Anti-human IgA/HRP  辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記羊抗人IgA  0.1ml
66094 Goat Anti-human IgG/HRP  辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記羊抗人IgG  0.1ml
66095 Goat Anti-human IgM/HRP  辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記羊抗人IgM  0.1ml
66096 Goat Anti-mouse IgG/HRP  辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記羊抗小鼠IgG  0.1ml

下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因，并給出相應(yīng)的解決辦法：
1 選擇試劑：選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑，嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣：可能原因： 
1）血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣； 
2）手工操作中，加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí))； 3）加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法： 
1） 標(biāo)本為血清：將血液先自然存放1-2小時(shí)后，再用3000rmp離心15分鐘；標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒*混合5-10次，放置一段時(shí)間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測(cè)，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。 
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。 
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。 
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 
5) 標(biāo)本較多時(shí)，請(qǐng)分批操作。
3 孵育：可能原因： 
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗*； 
2) 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng)，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周?chē)?，難以清洗*。解決辦法： 
1) 貼封片或加蓋； 
2) 按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板：可能原因： 
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。 
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí)，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不*；洗板針堵塞，抽吸不*；洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差。 
3) 反應(yīng)板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。 解決辦法： 
1) 保證洗液注滿(mǎn)各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙（選擇干凈、無(wú)或少塵的吸水材料）上輕輕拍干； 
2) 合理安排，或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5人鳥(niǎo)苷酸結(jié)合蛋白4(Gbp4)ELISA試劑盒顯色：可能原因： 
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或使用過(guò)期顯色劑； 
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法： 
1) 顯色劑盡量在臨用前配制，堅(jiān)持不用過(guò)期顯色劑，肉眼可見(jiàn)淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用； 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流； 
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止：可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽(yáng)性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板：如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過(guò)程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化，有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
在實(shí)際操作中，除了選擇優(yōu)良試劑外，必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作，同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng)，以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本，才能保證檢測(cè)質(zhì)量?，F(xiàn)在國(guó)內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀，這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。
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