人硒蛋白1(SEP1)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法：
1)目測(cè)定性法：加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后，肉眼觀(guān)察陽(yáng)性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照；與陰性對(duì)照的顏色接近者，判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2～3SD，作為陽(yáng)性結(jié)果的閾值。
3)以P／N值(陽(yáng)性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽(yáng)性；P／N值小于2．1，但大于1．5為可疑；P／N小于1．5為陰性。
4)定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
我們將在人硒蛋白1(SEP1)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問(wèn)題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給客戶(hù)帶來(lái)一些啟發(fā)，提高試驗(yàn)質(zhì)量。

65930 Anti-URGCP/URG4/FITC  熒光素標(biāo)記乙型肝炎病毒X蛋白(HBxAg)抗體IgG  0.2ml
65931 Anti-URGCP/URG4/FITC  熒光素標(biāo)記乙型肝炎病毒X蛋白(HBxAg)抗體C端IgG  0.2ml
65932 Anti-USF-1/FITC  熒光素標(biāo)記上游刺激因子1抗體IgG  0.2ml
65933 Anti-VAMP-1/FITC  熒光素標(biāo)記囊泡相關(guān)膜蛋白1抗體IgG  0.2ml
65934 Anti-VAMP-2/FITC  熒光素標(biāo)記囊泡相關(guān)膜蛋白2抗體IgG  0.2ml
65935 Anti-VAMP-3/FITC  熒光素標(biāo)記囊泡相關(guān)膜蛋白3抗體IgG  0.2ml
65936 Anti-VAP1/FITC  熒光素標(biāo)記血管粘附蛋白1抗體IgG  0.2ml
65937 anti-VASH1/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗血管抑制蛋白1抗體IgG  0.2ml
65938 Anti-VAT/FITC  熒光素標(biāo)記囊泡乙酰*通道抗體IgG  0.2ml
65939 Anti-USP1/FITC  熒光素標(biāo)記泛素特異性蛋白酶1抗體IgG  0.2ml
65940 Anti-VASP/FITC  熒光素標(biāo)記血管擴(kuò)張刺激磷蛋白抗體IgG  0.2ml
65941 Anti-VCAM-1/FITC(CD106)  熒光素標(biāo)記血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子抗體IgG  0.2ml
65942 Anti-VCAM-1/CD106 /FITC  熒光素標(biāo)記血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子抗體IgG  0.2ml
65943 Anti-Vcan/FITC  熒光素標(biāo)記蛋白聚糖Versican抗體IgG  0.2ml
65944 Anti-V.cholera Ogawa/FITC  熒光素標(biāo)記01群稻葉型霍亂弧菌抗體IgG  0.2ml
65945 ANti-V5 tag/FITC  熒光素標(biāo)記V5 tag標(biāo)簽抗體IgG  0.2ml
65946 Anti-V5 tag/HRP  辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記V5 tag標(biāo)簽抗體IgG  0.2ml
65947 Anti-V.cholera Ogawa/FITC  熒光素標(biāo)記01群小川型霍亂弧菌抗體IgG  0.2ml
65948 Anti-VCP/p97 /FITC  熒光素標(biāo)記抗含纈酪肽蛋白抗體IgG  0.2ml
65949 Anti-V.cholera Ogawa/Biotin  *化01群稻葉型霍亂弧菌抗體IgG  0.2ml
65950 Anti-V.cholera Ogawa/Biotin  *化01群小川型霍亂弧菌抗體IgG  0.2ml
65951 Anti-Influenza A Virus H1/HRP  辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記羊抗季節(jié)性A型流感病毒H1抗體IgG  0.2ml
65952 Anti-Influenza A Virus H3/HRP  辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記羊抗季節(jié)性流感病毒H3抗體IgG  0.2ml
65953 Anti-H1N1-A/HRP(Influenza A virus)California  辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記兔抗季節(jié)性A型人流感病毒H1N1抗體IgG(美國(guó)加州型)  0.2ml
65954 Anti-CD4/Biotin  *化CD4抗體IgG  0.2ml
65955 Anti-Integrin AlphaV Beta1/Biotin  *化兔抗人、大、小鼠整合素αVβ1抗體IgG  0.2ml
65956 Anti-Integrin alpha V/CD51 /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠等整合素αV抗體IgG  0.2ml
65957 Anti-VDAC/FITC  熒光素標(biāo)記電壓依賴(lài)性陰離子通道抗體IgG  0.2ml
65958 Anti-CD14/Biotin  *化CD14抗體IgG  0.2ml
65959 human Rabies virus IgG/Biotin  人狂犬病免疫球蛋白抗體  0.2ml
65960 Anti-VDCC-L alpha/FITC  熒光素標(biāo)記L-型電壓依賴(lài)型鈣通道α抗體IgG  0.2ml
65961 Anti-VDCC-L Beta/FITC  熒光素標(biāo)記L-型電壓依賴(lài)型鈣通道β抗體IgG  0.2ml
65962 Anti-VEGF/FITC  熒光素標(biāo)記VEGF抗體IgG  0.2ml
65963 Anti-VEGF(Rabbit)/FITC  熒光素標(biāo)記血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子抗體IgG  0.2ml
65964 Anti-VEGF-A/FITC  熒光素標(biāo)記血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A抗體IgG  0.2ml
65965 Anti-VEGF-B/FITC  熒光素標(biāo)記血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子B抗體IgG  0.2ml
65966 Anti-VEGF-C/FITC  熒光素標(biāo)記血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子C型抗體IgG  0.2ml
65967 Anti-VEGF-D/FIGF/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子D型VEGFD抗體IgG  0.2ml
65968 Anti-VEGF/RBITC  羅丹明標(biāo)記VEGF抗體IgG  0.2ml
65969 Mouse Anti-human VEGF/FITC  熒光素標(biāo)記小鼠抗人VEGF單克隆抗體IgG  0.2ml
65970 Anti-YAP1/FITC  熒光素標(biāo)記原癌基因Yes相關(guān)蛋白1抗體IgG  0.2ml
65971 Anti-VEGFR1/VEGF-R1/Flt-1 /FITC  熒光素標(biāo)記血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體1抗體IgG  0.2ml
65972 Anti-VEGFR2(VEGF-R2)Flk1/FITC  熒光素標(biāo)記血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2抗體IgG  0.2ml
65973 Anti-SV2A/FITC  熒光素標(biāo)記突觸泡蛋白2A抗體IgG  0.2ml
65974 Anti-sVEGFR2/sFLK-1/FITC  熒光素標(biāo)記可溶性血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2抗體（人）IgG  0.2ml
65975 Anti-p-VEGFR2/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2抗體IgG  0.2ml
65976 Anti-FLT-3/CD135/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠FMS樣*激酶3IgG  0.2ml
65977 Anti-Phospho-FLT3 (Tyr591) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化FMS樣*激酶3IgG  0.2ml
65978 Anti-Phospho-FLT3 (Tyr589/591) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化FMS樣*激酶3抗體IgG  0.2ml
65979 Anti-Phospho-FLT3 (Tyr842) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化FMS樣*激酶3抗體IgG  0.2ml
65980 Anti-Phospho-FLT3 (Tyr969) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化FMS樣*激酶3抗體IgG 人硒蛋白1(SEP1)ELISA試劑盒 0.2ml
65981 Anti-VEGFR-3/FLt-4 /FITC  熒光素標(biāo)記血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體-3IgG  0.2ml
65982 Anti-VEGFR-3/FITC  熒光素標(biāo)記血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體-3抗體IgG  0.2ml
65983 Anti-HSP-70/RBITC  羅丹明標(biāo)記熱休克蛋白-70抗體IgG  0.2ml
65984 Anti-VHL/FITC  熒光素標(biāo)記一種腫瘤抑制因子抗體IgG  0.2ml
65985 Anti-Vimentin/FITC  熒光素標(biāo)記波形蛋白抗體IgG  0.2ml

下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因，并給出相應(yīng)的解決辦法：
1 選擇試劑：選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑，嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣：可能原因： 
1）血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣； 
2）手工操作中，加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí))； 3）加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法： 
1） 標(biāo)本為血清：將血液先自然存放1-2小時(shí)后，再用3000rmp離心15分鐘；標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒*混合5-10次，放置一段時(shí)間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測(cè)，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。 
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。 
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。 
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 
5) 標(biāo)本較多時(shí)，請(qǐng)分批操作。
3 孵育：可能原因： 
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗*； 
2) 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng)，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周?chē)y以清洗*。解決辦法： 
1) 貼封片或加蓋； 
2) 按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板：可能原因： 
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。 
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí)，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不*；洗板針堵塞，抽吸不*；洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差。 
3) 反應(yīng)板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。 解決辦法： 
1) 保證洗液注滿(mǎn)各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙（選擇干凈、無(wú)或少塵的吸水材料）上輕輕拍干； 
2) 合理安排，或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5人硒蛋白1(SEP1)ELISA試劑盒顯色：可能原因： 
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或使用過(guò)期顯色劑； 
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法： 
1) 顯色劑盡量在臨用前配制，堅(jiān)持不用過(guò)期顯色劑，肉眼可見(jiàn)淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用； 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流； 
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止：可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽(yáng)性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板：如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過(guò)程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化，有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
在實(shí)際操作中，除了選擇優(yōu)良試劑外，必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作，同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng)，以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本，才能保證檢測(cè)質(zhì)量。現(xiàn)在國(guó)內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀，這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。
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