人乳頭狀瘤病毒抗體IgM(HPV-IgM)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法：
1)目測定性法：加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后，肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照；與陰性對照的顏色接近者，判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2～3SD，作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P／N值(陽性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽性；P／N值小于2．1，但大于1．5為可疑；P／N小于1．5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人乳頭狀瘤病毒抗體IgM(HPV-IgM)ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給客戶帶來一些啟發(fā)，提高試驗(yàn)質(zhì)量。

65377 Anti-Phospho-Pin1 (Ser16)/FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化肽基脯氨酞順反異構(gòu)酶Pinl抗體IgG  0.2ml
65378 Anti-PNK1/PNKP/FITC  熒光素標(biāo)記多聚合苷酸激酶3磷酸化酶抗體IgG  0.2ml
65379 Anti-Phospho-PNK1 (Ser114/Thr118) /FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化多聚合苷酸激酶3磷酸化酶抗體IgG  0.2ml
65380 Anti-PIRH2/FITC  熒光素標(biāo)記泛素連接酶抗體IgG  0.2ml
65381 Anti-SIAH1/FITC  熒光素標(biāo)記泛素連接酶Siah1抗體IgG  0.2ml
65382 Anti-SIAH2/FITC  熒光素標(biāo)記泛素連接酶Siah2抗體IgG  0.2ml
65383 Anti-PIWIL1/FITC  熒光素標(biāo)記piwi樣1蛋白抗體IgG  0.2ml
65384 Anti-PKA/FITC  熒光素標(biāo)記蛋白激酶A抗體IgG  0.2ml
65385 Anti-Phospho-PKA C (Thr197)/FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化蛋白激酶C亞性抗體IgG  0.2ml
65386 Anti-phospho-PKC delta (Thr505)/FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化蛋白激酶C亞性D型抗體IgG  0.2ml
65387 Anti-phospho-PKC delta (Tyr52)/FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化蛋白激酶C亞性D型抗體IgG  0.2ml
65388 Anti-phospho-PKC delta (Tyr311)/FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化蛋白激酶C亞性D型抗體IgG  0.2ml
65389 Anti-Phospho-PKC gamma (Thr514)/FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化蛋白激酶C亞型G抗體IgG  0.2ml
65390 Anti-Phospho-PKC gamma (Thr674) /FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化蛋白激酶C亞型G抗體IgG  0.2ml
65391 Anti-PKB/FITC  熒光素標(biāo)記蛋白激酶B抗體IgG  0.2ml
65392 Anti-PKB/AKT-1 /FITC  熒光素標(biāo)記蛋白激酶B抗體IgG  0.2ml
65393 Anti-P-AKT1/PKB1/2/3(pSer473) /FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化蛋白激酶B(pSer473)抗體IgG  0.2ml
65394 Anti-phospho-Akt(Thr450) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化蛋白激酶B抗體（*磷酸化位點(diǎn)：450）IgG  0.2ml
65395 Anti-PRAS40/AKT1 substrate 1/FITC  熒光素標(biāo)記蛋白激酶AKT底物1抗體IgG  0.2ml
65396 Anti-Phospho-PRAS40 (Thr246)/FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化蛋白激酶AKT底物1抗體IgG  0.2ml
65397 Anti-PKC beta1/2/FITC  熒光素標(biāo)記蛋白激酶C beta抗體IgG  0.2ml
65398 Anti-PKC alpha/FITC  熒光素標(biāo)記蛋白激酶C α抗體IgG  0.2ml
65399 Anti-Phospho-PKC alpha/beta II (Thr638/641)/FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化蛋白激酶C α/β2抗體IgG  0.2ml
65400 Anti-p-PKC/FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化蛋白激酶C抗體IgG  0.2ml
65401 Anti-p-PKC beta 1/2/FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化蛋白激酶C β1/β2抗體IgG  0.2ml
65402 Anti-PKC delta/FITC  熒光素標(biāo)記蛋白激酶C亞性D型抗體IgG  0.2ml
65403 Anti-PKC gamma/SCA14/FITC  熒光素標(biāo)記蛋白激酶C亞型G抗體IgG  0.2ml
65404 Anti-PKN2 /FITC  熒光素標(biāo)記蛋白激酶N2抗體IgG  0.2ml
65405 Anti-HSP-70/HRP  辣根過氧化物酶標(biāo)記熱休克蛋白70抗體IgG  0.2ml
65406 Anti-PKR/FITC  熒光素標(biāo)記蛋白激酶R/雙鏈RNA依賴蛋白激酶抗體IgG  0.2ml
65407 Anti-Phospho-PKR (Thr446) /FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化蛋白激酶R抗體IgG  0.2ml
65408 Anti-Phospho-PKR (Thr451) /FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化蛋白激酶R抗體IgG  0.2ml
65409 Anti-Phospho-PKR (Thr446/451) /FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化蛋白激酶R抗體IgG  0.2ml
65410 Anti-Phospho-PRK1 (Thr774)/PRK2 (Thr816) /FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化內(nèi)分泌腺衍生血管內(nèi)皮生長因子抗體IgG  0.2ml
65411 Anti-HSP-90 Alpha/HRP  辣根過氧化物酶標(biāo)記熱休克蛋白90α抗體IgG  0.2ml
65412 Anti-HSP-90 Beta /HRP  辣根過氧化物酶標(biāo)記熱休克蛋白90β抗體IgG  0.2ml
65413 Anti-CD4/HRP  辣根過氧化物酶標(biāo)記CD4抗體IgG  0.2ml
65414 Anti-Insulin/HRP  辣根過氧化物酶標(biāo)記胰島素抗體IgG  0.2ml
65415 Anti-PLAU/uPA/FITC  熒光素標(biāo)記*型纖溶酶原激活因子抗體IgG  0.2ml
65416 Anti-Plectin/FITC  熒光素標(biāo)記網(wǎng)蛋白抗體IgG  0.2ml
65417 Anti-PLAUR/uPAR/FITC  熒光素標(biāo)記*型纖溶酶原激活因子受體抗體IgG  0.2ml
65418 Anti-Plexin A1/Plexin 1/FITC  熒光素標(biāo)記神經(jīng)叢蛋白A1抗體IgG  0.2ml
65419 Anti-Plexin A2/FITC  熒光素標(biāo)記神經(jīng)叢蛋白A2抗體IgG  0.2ml
65420 Anti-Plexin B1/Semaphorin receptor/FITC  熒光素標(biāo)記神經(jīng)叢蛋白B1抗體IgG  0.2ml
65421 Anti-PLASTIN3/T Plastin/FITC  熒光素標(biāo)記絲束蛋白T Plastin抗體IgG  0.2ml
65422 Anti-PLG/FITC  熒光素標(biāo)記纖維蛋白溶酶原抗體IgG  0.2ml
65423 Anti-PLGF/FITC  熒光素標(biāo)記胎盤生長因子抗體IgG  0.2ml
65424 Anti-PLGF /FITC  熒光素標(biāo)記人胎盤生長因子（抗體）IgG  0.2ml
65425 Anti-PLGF/FITC  熒光素標(biāo)記小鼠胎盤生長因子抗體IgG  0.2ml
65426 Anti-PMP2 /FITC  熒光素標(biāo)記周圍神經(jīng)髓鞘蛋白2抗體IgG  0.2ml
65427 Anti-PMP-22/FITC 人乳頭狀瘤病毒抗體IgM(HPV-IgM)ELISA試劑盒 熒光素標(biāo)記外周髓鞘蛋白-22IgG  0.2ml
65428 Anti-PMSA/FOLH1/FITC  熒光素標(biāo)記前列腺特異膜抗原抗體IgG  0.2ml
65429 Anti-PMS2/FITC  熒光素標(biāo)記腫瘤錯配修復(fù)基因PMS2抗體IgG  0.2ml
65430 Anti-PLK1/STPK13/FITC  熒光素標(biāo)記絲/*蛋白激酶Plk1抗體IgG  0.2ml

下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因，并給出相應(yīng)的解決辦法：
1 選擇試劑：選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑，嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣：可能原因： 
1）血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣； 
2）手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時)； 3）加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法： 
1） 標(biāo)本為血清：將血液先自然存放1-2小時后，再用3000rmp離心15分鐘；標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒*混合5-10次，放置一段時間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。 
2) 加樣后及時放入孵箱。 
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。 
4) 如果采用AT或其他全自動加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 
5) 標(biāo)本較多時，請分批操作。
3 孵育：可能原因： 
1) 孵育時未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗*； 
2) 孵育時間人為延長，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗*。解決辦法： 
1) 貼封片或加蓋； 
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間。
4 洗板：可能原因： 
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。 
2) 采用半自動洗板機(jī)洗板時，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不*；洗板針堵塞，抽吸不*；洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差。 
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法： 
1) 保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙（選擇干凈、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干； 
2) 合理安排，或多用幾臺洗板機(jī)。
5人乳頭狀瘤病毒抗體IgM(HPV-IgM)ELISA試劑盒顯色：可能原因： 
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑； 
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法： 
1) 顯色劑盡量在臨用前配制，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用； 2) 加樣時保持顯色劑不外流； 
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止：可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板：如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化，有效提高檢測質(zhì)量。
在實(shí)際操作中，除了選擇優(yōu)良試劑外，必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作，同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評，以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本，才能保證檢測質(zhì)量?，F(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標(biāo)儀，這對于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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