人雌激素誘導(dǎo)蛋白PS2 ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法：
1)目測(cè)定性法：加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后，肉眼觀察陽(yáng)性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照；與陰性對(duì)照的顏色接近者，判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2～3SD，作為陽(yáng)性結(jié)果的閾值。
3)以P／N值(陽(yáng)性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽(yáng)性；P／N值小于2．1，但大于1．5為可疑；P／N小于1．5為陰性。
4)定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
我們將在人雌激素誘導(dǎo)蛋白PS2 ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給客戶帶來(lái)一些啟發(fā)，提高試驗(yàn)質(zhì)量。

65320 Anti-phospho-CaMK2a (pThr286)/FITC  熒光素標(biāo)記抗磷酸化鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶2α抗體IgG  0.2ml
65321 Anti-phospho-CaMK2a(pTyr231) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠等磷酸化鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶2α抗體IgG  0.2ml
65322 Anti-phospho-ATF2(pSer490/pSer498)/FITC  熒光素標(biāo)記抗磷酸化活化復(fù)制因子2抗體IgG  0.2ml
65323 Anti-phospho APP(pThr668)/FITC  熒光素標(biāo)記抗磷酸化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體IgG  0.2ml
65324 Anti-phospho-P53(pSer392)/FITC  熒光素標(biāo)記抗磷酸化腫瘤抑制基因P53抗體IgG  0.2ml
65325 Anti-phosphor-PAK1+PAK2+PAK3 (pSer141)/FITC  熒光素標(biāo)記抗磷酸化p21激活激酶1/2/3抗體IgG  0.2ml
65326 Anti-phospho-PAK1/2/3(pThr423)/FITC  熒光素標(biāo)記抗磷酸化p21激活激酶1/2/3抗體IgG  0.2ml
65327 Anti-phospho-PAK1(pSer144)/FITC  熒光素標(biāo)記抗磷酸化p21激活激酶1抗體IgG  0.2ml
65328 Anti-phospho-PAK2(pSer141)/FITC  熒光素標(biāo)記抗磷酸化p21激活激酶2抗體IgG  0.2ml
65329 Anti-JNK1/2/3/FITC  熒光素標(biāo)記抗氨基末端激酶1/2/3抗體 IgG  0.2ml
65330 Anti-phospho-PAK3(pSer139)/FITC  熒光素標(biāo)記抗磷酸化p21激活激酶3抗體IgG  0.2ml
65331 Anti-Stanniocalcin 1/FITC  熒光素標(biāo)記斯鈣素抗體IgG  0.2ml
65332 Anti-PAK1/FITC  熒光素標(biāo)記p21激活激酶1抗體IgG  0.2ml
65333 Anti-Phospho-PAK1 (Ser199/204)/PAK2 (Ser192/197) /FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化p21激活激酶1/2抗體IgG  0.2ml
65334 Anti-Phospho-PAK1 (Thr423)/PAK2 (Thr402) /FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化p21激活激酶1/2抗體IgG  0.2ml
65335 Anti-PAK2 /FITC  熒光素標(biāo)記p21激活激酶2抗體IgG  0.2ml
65336 Anti-Phospho-PAK2 (Ser20) /FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化p21激活激酶2抗體IgG  0.2ml
65337 Anti-PAK4/FITC  熒光素標(biāo)記p21激活激酶4抗體IgG  0.2ml
65338 Phospho-PAK4 (Ser474)/PAK5 (Ser602)/PAK6 (Ser560) /FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化p21激活激酶4、5、6抗體IgG  0.2ml
65339 Anti-PAK7/PAK5/MBT/FITC  熒光素標(biāo)記抗激活激酶PAK7/PAK5抗體IgG  0.2ml
65340 Anti--phospho-P70 S6 Kinase beta (Thr228) /FITC  熒光素標(biāo)記抗磷酸化核糖體S6蛋白激酶抗體IgG  0.2ml
65341 Anti-Phospho-p70 S6 Kinase Beta (Thr421/Ser424) /FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化核糖體S6蛋白激酶β2抗體IgG  0.2ml
65342 Anti-phospho-P70 S6 Kinase beta (Ser371)/FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化核糖體S6蛋白激酶抗體IgG  0.2ml
65343 Anti-phospho-STAT1(pThr701)/FITC  熒光素標(biāo)記抗磷酸化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子1抗體IgG  0.2ml
65344 Anti-phospho-STAT3(pThr705)/FITC  熒光素標(biāo)記抗磷酸化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3抗體IgG  0.2ml
65345 Anti-JNK2/FITC  熒光素標(biāo)記氨基末端激酶2抗體IgG  0.2ml
65346 Anti-phospho-STAT5a(pThr694)/FITC  熒光素標(biāo)記抗磷酸化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子5a抗體IgG  0.2ml
65347 Anti-JNK3/MAPK10/FITC  熒光素標(biāo)記氨基末端激酶3抗體IgG  0.2ml
65348 Anti-phospho-STAT6(pThr641)/FITC  熒光素標(biāo)記抗磷酸化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子6抗體IgG  0.2ml
65349 Anti-phospho-Src(pTyr529)/FITC  熒光素標(biāo)記抗磷酸化Src原癌基因抗體IgG  0.2ml
65350 Anti-phospho c-Raf/RAF1(pSer338/pTyr340)/FITC  熒光素標(biāo)記抗磷酸化原癌基因c-raf抗體IgG  0.2ml
65351 Anti-phospho-c-Raf (Ser289) /FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化原癌基因c-Raf抗體IgG  0.2ml
65352 Anti-phospho-c-Raf (Ser259)/FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化原癌基因c-Raf抗體IgG  0.2ml
65353 Anti-phospho-c-Raf (Ser296) /FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化原癌基因c-Raf抗體IgG  0.2ml
65354 Anti-phospho-c-Raf (Ser338) /FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化原癌基因c-Raf抗體IgG  0.2ml
65355 Anti-phospho C-Myc(pThr58/pSer62)/FITC  熒光素標(biāo)記抗磷酸化致癌基因C-Myc抗體IgG  0.2ml
65356 Anti-phospho C-Met/pHGFR(pTyr1365)/FITC  熒光素標(biāo)記抗磷酸化原癌基因c-Met抗體IgG  0.2ml
65357 Anti-phospho-c-Jun/AP-1(pThr91/pThr93)/FITC  熒光素標(biāo)記抗磷酸化原癌基因c-Jun抗體IgG  0.2ml
65358 Anti-phospho-c-Jun (Ser243) /FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化原癌基因c-Jun抗體IgG  0.2ml
65359 Anti-phospho-c-Jun (Thr93) /FITC   熒光素標(biāo)記磷酸化原癌基因c-Jun抗體IgG  0.2ml
65360 Anti-phospho-c-Jun (Ser63) /FITC   熒光素標(biāo)記磷酸化原癌基因c-Jun抗體IgG  0.2ml
65361 Anti-phospho-MEK1/MAPKK1(pSer298)/FITC  熒光素標(biāo)記抗磷酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶1抗體IgG  0.2ml
65362 Anti-phospho Histone H1,4(pSer27)/FITC  熒光素標(biāo)記抗磷酸化組蛋白H1,4樣蛋白抗體IgG  0.2ml
65363 Anti-phospho c-kit/SCFR/CD117(pTyr936)FITC  熒光素標(biāo)記抗磷酸化原癌基因c-kit抗體IgG  0.2ml
65364 Anti-Phospho-c-Kit (Tyr703) /FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化原癌基因c-kit抗體IgG  0.2ml
65365 Anti-Phospho-c-Kit (Tyr719) /FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化原癌基因c-kit抗體IgG  0.2ml
65366 Anti-Phospho-FAK (Tyr397) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化粘著斑激酶抗體IgG  0.2ml
65367 Anti-P-HP1/FITC  熒光素標(biāo)記抗異染色質(zhì)蛋白1磷酸化抗體（果蠅）IgG  0.2ml
65368 Anti-P-HP1/FITC  熒光素標(biāo)記抗異染色質(zhì)蛋白1磷酸化抗體（果蠅）IgG  0.2ml
65369 Anti-Phospho-HP1 gamma (Ser83) /FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化染色質(zhì)相關(guān)蛋白1-γ抗體IgG  0.2ml
65370 Anti-PI3K/P85 alpha/FITC  熒光素標(biāo)記磷脂酰肌醇激酶抗體IgG  0.2ml
65371 Anti-PI3K p85 (Tyr458)/p55 (Tyr199) /FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化磷脂酰肌醇激酶抗體IgG  0.2ml
65372 Anti-PI3 Kinase p110 delta/FITC  熒光素標(biāo)記磷脂酰肌醇激酶催化亞單位D抗體IgG  0.2ml
65373 Anti-PIBF/FITC  熒光素標(biāo)記孕激素誘導(dǎo)阻斷因子抗體IgG  0.2ml
65374 Anti-PIM1/FITC  熒光素標(biāo)記前病毒整合位點(diǎn)蛋白1抗體IgG  0.2ml

下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因，并給出相應(yīng)的解決辦法：
1 選擇試劑：選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑，嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣：可能原因： 
1）血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣； 
2）手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí))； 3）加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法： 
1） 標(biāo)本為血清：將血液先自然存放1-2小時(shí)后，再用3000rmp離心15分鐘；標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒*混合5-10次，放置一段時(shí)間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測(cè)，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。 
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。 
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。 
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 
5) 標(biāo)本較多時(shí)，請(qǐng)分批操作。
3 孵育：可能原因： 
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗*； 
2) 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng)，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗*。解決辦法： 
1) 貼封片或加蓋； 
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板：可能原因： 
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。 
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí)，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不*；洗板針堵塞，抽吸不*；洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差。 
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。 解決辦法： 
1) 保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙（選擇干凈、無(wú)或少塵的吸水材料）上輕輕拍干； 
2) 合理安排，或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5顯色：可能原因： 
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過長(zhǎng)或使用過期顯色劑； 
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法： 
1) 顯色劑盡量在臨用前配制，堅(jiān)持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用； 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流； 
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止：可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽(yáng)性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板：如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化，有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
在實(shí)際操作中，除了選擇優(yōu)良試劑外，必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作，同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng)，以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本，才能保證檢測(cè)質(zhì)量?，F(xiàn)在國(guó)內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀，這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。
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