人單純皰疹病毒Ⅰ型抗體(HSVⅠAb)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法：
1)目測(cè)定性法：加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后，肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照；與陰性對(duì)照的顏色接近者，判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2～3SD，作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P／N值(陽性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽性；P／N值小于2．1，但大于1．5為可疑；P／N小于1．5為陰性。
4)定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
我們將在人單純皰疹病毒Ⅰ型抗體(HSVⅠAb)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給客戶帶來一些啟發(fā)，提高試驗(yàn)質(zhì)量。

65264 Anti-PDGF-BB/FITC  熒光素標(biāo)記血小板源性生長(zhǎng)因子-BB抗體IgG  0.2ml
65265 Anti-PDGF-R-A/FITC  熒光素標(biāo)記血小板源性生長(zhǎng)因子受體-A抗體IgG  0.2ml
65266 Anti-Phospho-PDGF Receptor alpha (Tyr1018)/FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化血小板源性生長(zhǎng)因子受體-α抗體IgG  0.2ml
65267 Anti-Phospho-PDGF Receptor alpha (Tyr754) /FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化血小板源性生長(zhǎng)因子受體-α抗體IgG  0.2ml
65268 Anti-Phospho-PDGF Receptor alpha(Tyr849)/PDGF Receptor beta (Tyr857)/FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化血小板源性生長(zhǎng)因子受體α/β抗體IgG  0.2ml
65269 Anti-PDGF-R-B/FITC  熒光素標(biāo)記血小板源性生長(zhǎng)因子受體-B抗體IgG  0.2ml
65270 Anti-Phospho-PDGF Receptor beta (Tyr771)/FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化血小板源性生長(zhǎng)因子受體-B抗體IgG  0.2ml
65271 Anti-Phospho-PDGF Receptor beta (Tyr1009) /FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化血小板源性生長(zhǎng)因子受體-B抗體IgG  0.2ml
65272 Anti-Phospho-PDGF Receptor beta (Tyr1021)/FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化血小板源性生長(zhǎng)因子受體-B抗體IgG  0.2ml
65273 Anti-Phospho-PDGF Receptor beta (Tyr740) /FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化血小板源性生長(zhǎng)因子受體-B抗體IgG  0.2ml
65274 Anti-Phospho-PDGF Receptor beta (Tyr751)/FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化血小板源性生長(zhǎng)因子受體-B抗體IgG  0.2ml
65275 Anti-Paxillin/FITC  熒光素標(biāo)記樁蛋白Paxillin抗體IgG  0.2ml
65276 Anti-Phospho-Paxillin (Tyr118)/FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化樁蛋白Paxillin抗體IgG  0.2ml
65277 anti-PDI/FITC  熒光素標(biāo)記蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶抗體IgG  0.2ml
65278 Anti-PDK1/PDPK1/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠3磷酸肌醇依賴性蛋白激酶1抗體IgG  0.2ml
65279 Anti-PDK1(phospho Y373 + Y376) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化3磷酸肌醇依賴性蛋白激酶1抗體IgG  0.2ml
65280 Anti-Phospho-PDK1 (Ser241) /FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化3磷酸肌醇依賴性蛋白激酶1抗體IgG  0.2ml
65281 Anti-Pdk4/FITC  熒光素標(biāo)記丙酮酸脫氫酶激酶4抗體IgG  0.2ml
65282 Anti-Pdx1/FITC  熒光素標(biāo)記胰十二指腸同源異型盒基因抗體IgG  0.2ml
65283 Anti-PEA3/FITC  熒光素標(biāo)記多瘤促活化因子抗體IgG  0.2ml
65284 Anti-PEA15/FITC  熒光素標(biāo)記星形膠質(zhì)細(xì)胞PEA15抗體IgG  0.2ml
65285 Anti-Phospho-PEA15 (Ser104)/FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化星形膠質(zhì)細(xì)胞PEA15抗體IgG  0.2ml
65286 Anti-Phospho-PEA15 (Ser116) /FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化星形膠質(zhì)細(xì)胞PEA15抗體IgG  0.2ml
65287 Anti-PEDF /FITC  熒光素標(biāo)記色素上皮源性因子抗體IgG  0.2ml
65288 Anti-pEGFR(pTyr1068)/FITC  熒光素標(biāo)記抗磷酸化表皮生長(zhǎng)因子受體抗體IgG  0.2ml
65289 Anti-PEG3/FITC  熒光素標(biāo)記PEG3蛋白抗體IgG  0.2ml
65290 Anti-PEG10 /FITC  熒光素標(biāo)記肝癌高表達(dá)基因抗體IgG  0.2ml
65291 Anti-PENK/Enkephalin A/FITC  熒光素標(biāo)記腦啡肽抗體IgG  0.2ml
65292 Anti-Peptide YY/PYY/FITC  熒光素標(biāo)記酪酪肽抗體IgG  0.2ml
65293 Anti-PEPT1/FITC  熒光素標(biāo)記腸道肽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1/小肽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1抗體IgG  0.2ml
65294 Anti-PEPT2 /FITC  熒光素標(biāo)記腸道肽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2/小肽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2抗體IgG  0.2ml
65295 Anti-PERK/FITC  熒光素標(biāo)記蛋白激酶R樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶抗體IgG  0.2ml
65296 Anti-Phospho-PERK (Thr980)/FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化蛋白激酶樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶抗體IgG  0.2ml
65297 Anti-peripherin/FITC  熒光素標(biāo)記外周蛋白抗體IgG  0.2ml
65298 Anti-HSP-27/HRP  辣根過氧化物酶標(biāo)記熱休克蛋白27抗體IgG  0.2ml
65299 Anti-P-fscn1/FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化纖維束蛋白同源物1/肌動(dòng)蛋白集束蛋白/圓線蟲紫癜 抗體IgG  0.2ml
65300 Anti-PG-C/FITC  熒光素標(biāo)記*原C抗體IgG  0.2ml
65301 Anti-PGC-1 Alpha/FITC  熒光素標(biāo)記過氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活子1α抗體IgG  0.2ml
65302 Anti-PGE2/FITC  熒光素標(biāo)記前列腺素E2抗體IgG  0.2ml
65303 Anti-PGRN /FITC  熒光素標(biāo)記顆粒蛋白前體抗體IgG  0.2ml
65304 Anti-PH-4/FITC  熒光素標(biāo)記*水解酶4抗體IgG  0.2ml
65305 Anti-PHB/FITC  熒光素標(biāo)記抑制素/腫瘤抑制因子抗體IgG  0.2ml
65306 Anti-PHD3 /FITC  熒光素標(biāo)記*羥化酶抗體IgG  0.2ml
65307 Anti-phospho-FAK(pTyr577)/FITC  熒光素標(biāo)記抗磷酸化粘著斑激酶抗體IgG  0.2ml
65308 Anti-phospho-JNK1/2(pThr183/pTyr185)/FITC  熒光素標(biāo)記抗磷酸化氨基末端激酶1/2抗體IgG  0.2ml
65309 Anti-phospho GAP-43(pSer41)/FITC  熒光素標(biāo)記抗磷酸化神經(jīng)生長(zhǎng)相關(guān)蛋白43抗體IgG  0.2ml
65310 Anti-phospho-FAK(pSer732)/FITC  熒光素標(biāo)記抗磷酸化粘著斑激酶抗體IgG  0.2ml
65311 Anti-Phospho-FAK (Tyr861) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化粘著斑激酶抗體IgG  0.2ml
65312 Anti-Phospho-FAK (Tyr576/577) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化粘著斑激酶抗體IgG  0.2ml
65313 Anti-Phospho-FAK (Tyr925) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化粘著斑激酶抗體IgG  0.2ml
65314 Anti-Phospho-FAK (Tyr407) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化粘著斑激酶抗體IgG  0.2ml
65315 Anti-ER- Alpha(phospho-Tyr537)/FITC人單純皰疹病毒Ⅰ型抗體(HSVⅠAb)ELISA試劑盒  熒光素標(biāo)記抗大、小鼠磷酸化雌激素受體α抗體IgG  0.2ml
65316 Anti-Phospho-Progesterone Receptor (Ser190)/FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化孕激素受體抗體IgG  0.2ml
65317 Anti-phospho-ERK1(pThr202/pTyr204)/FITC  熒光素標(biāo)記抗磷酸化絲裂原活化蛋白激酶1抗體IgG  0.2ml

下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因，并給出相應(yīng)的解決辦法：
1 選擇試劑：選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑，嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣：可能原因： 
1）血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣； 
2）手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí))； 3）加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法： 
1） 標(biāo)本為血清：將血液先自然存放1-2小時(shí)后，再用3000rmp離心15分鐘；標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒*混合5-10次，放置一段時(shí)間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測(cè)，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。 
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。 
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。 
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 
5) 標(biāo)本較多時(shí)，請(qǐng)分批操作。
3 孵育：可能原因： 
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗*； 
2) 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng)，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗*。解決辦法： 
1) 貼封片或加蓋； 
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板：可能原因： 
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。 
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí)，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不*；洗板針堵塞，抽吸不*；洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差。 
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。 解決辦法： 
1) 保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙（選擇干凈、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干； 
2) 合理安排，或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5人單純皰疹病毒Ⅰ型抗體(HSVⅠAb)ELISA試劑盒顯色：可能原因： 
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過長(zhǎng)或使用過期顯色劑； 
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法： 
1) 顯色劑盡量在臨用前配制，堅(jiān)持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用； 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流； 
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止：可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板：如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化，有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
在實(shí)際操作中，除了選擇優(yōu)良試劑外，必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作，同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng)，以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本，才能保證檢測(cè)質(zhì)量?，F(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀，這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。
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