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上海紀寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時間:2017-01-14 22:20:41瀏覽次數(shù):135次
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人單純皰疹病毒Ⅱ型抗體(HSVⅡ-Ab)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯(lián)免疫實驗得到了廣泛的應用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。
人單純皰疹病毒Ⅱ型抗體(HSVⅡ-Ab)ELISA試劑盒實驗ELISA結果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結果根據(jù)標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人單純皰疹病毒Ⅱ型抗體(HSVⅡ-Ab)ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗質(zhì)量。
65151 Anti-OAT-3/FITC 熒光素標記陰離子轉(zhuǎn)運蛋白-3抗體IgG 0.2ml
65152 Anti-OAT4L/URAT1 /FITC 熒光素標記尿酸鹽重吸收轉(zhuǎn)運子1抗體IgG 0.2ml
65153 Anti-obestatin/Ghrelin/GHRP /FITC 熒光素標記肥胖抑制素抗體IgG 0.2ml
65154 anti-OCLN(Occluding)/FITC 熒光素標記人咬合蛋白抗體IgG 0.2ml
65155 Anti-ODC/FITC 熒光素標記抗*脫羧酶抗體IgG 0.2ml
65156 Anti-OCT1 /FITC 熒光素標記陽離子轉(zhuǎn)運器1抗體IgG 0.2ml
65157 Anti-OCT2 /FITC 熒光素標記陽離子轉(zhuǎn)運蛋白2抗體IgG 0.2ml
65158 Anti-Oct-4/FITC 熒光素標記胚胎干細胞關鍵蛋白抗體IgG 0.2ml
65159 Anti-Oct-4 /FITC 熒光素標記胚胎干細胞關鍵蛋白抗體IgG 0.2ml
65160 Anti-Omgp /FITC 熒光素標記少突細胞髓磷脂糖蛋白抗體IgG 0.2ml
65161 Anti-ompF/FITC 熒光素標記小腸結腸炎耶爾森氏菌膜通道蛋白抗體IgG 0.2ml
65162 Anti-OPCML /FITC 熒光素標記阿片樣物質(zhì)結合蛋白/細胞粘附分子樣蛋白抗體IgG 0.2ml
65163 Anti-mu Opioid receptor/FITC 熒光素標記µ-型阿片受體抗體IgG 0.2ml
65164 Anti-Phospho-delta Opioid Receptor (Ser363) /FITC 熒光素標記磷酸化D型阿片受體抗體IgG 0.2ml
65165 Anti-Phospho-mu Opioid Receptor (Ser375) /FITC 熒光素標記磷酸化µ-型阿片受體抗體IgG 0.2ml
65166 Anti-OPG /FITC 熒光素標記骨保護蛋白/護骨素抗體IgG 0.2ml
65167 Anti-OPGL/RANKL/CD254 /FITC 熒光素標記骨保護蛋白配體抗體IgG 0.2ml
65168 Anti-RANK/TNFRSF11A/CD265/FITC 熒光素標記核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB受體抗體IgG 0.2ml
65169 Anti-OPN/FITC 熒光素標記骨橋蛋白抗體IgG 0.2ml
65170 Anti-OPN/FITC 熒光素標記骨橋蛋白抗體IgG 0.2ml
65171 Anti-ORX-A/FITC 熒光素標記增食欲素-A/欲激素AIgG 0.2ml
65172 Anti-Osx /FITC 熒光素標記成骨相關轉(zhuǎn)錄因子抗體IgG 0.2ml
65173 Anti-Os05g/0477200 protein /FITC 熒光素標記抗水稻白葉枯病菌Os05g0477200蛋白抗體IgG 0.2ml
65174 Anti-OTR/FITC 熒光素標記*受體抗體IgG 0.2ml
65175 Anti-OVA/FITC 熒光素標記兔抗雞卵白蛋白/卵清蛋白抗體IgG 0.2ml
65176 Anti-ox-LDL/FITC 熒光素標記抗氧化低密度脂蛋白抗體IgG 0.2ml
65177 Anti-OXR /FITC 熒光素標記整合素樣金屬蛋白酶與*1型-7抗體IgG 0.2ml
65178 Anti-Oxytetracycline/FITC 熒光素標記*抗體IgG 0.2ml
65179 Anti-P2P-R/RBBP6 /FITC 熒光素標記增殖潛能相關蛋白抗體IgG 0.2ml
65180 Anti-P2Y1 receptor/FITC 熒光素標記P2Y1受體抗體IgG 0.2ml
65181 Anti-P2Y4 receptor/P2ry4 /FITC 熒光素標記P2Y4受體抗體IgG 0.2ml
65182 Anti-P14ARF/FITC 熒光素標記抑癌基因p14抗體IgG 0.2ml
65183 Anti-P16/FITC 熒光素標記兔抗抑癌基因p16抗體IgG 0.2ml
65184 Anti-P19ARF/FITC 熒光素標記p19ARF抑癌基因抗體IgG 0.2ml
65185 Anti-P21/WAF1/CIP1 /FITC 熒光素標記p21抗體IgG 0.2ml
65186 Anti-P27/kip1 /FITC 熒光素標記P27抗體/周期素依賴激酶抑制劑IgG 0.2ml
65187 Anti-P27/kip1/Cy3 熒光素Cy3標記P27抗體/周期素依賴激酶抑制劑IgG 0.2ml
65188 Anti-P38 MAPK/FITC 熒光素標記絲裂原活化蛋白激酶p38抗體IgG 0.2ml
65189 Anti-P38 MAPK/RBITC 紅色熒光素羅丹明(RBITC)標記絲裂原活化蛋白激酶p38抗體IgG 0.2ml
65190 Anti-P-p38 ERK/MAPK14 /FITC 熒光素標記磷酸化-絲裂原活化蛋白激酶p38抗體IgG 0.2ml
65191 Anti-MAPKAP Kinase 2/FITC 熒光素標記絲裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2抗體IgG 0.2ml
65192 Anti-phospho-p38 ERK/MAPK14 (pThr180/pTyr182) /FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠、兔、馬、犬、豬、牛磷酸化絲裂原活化蛋白激酶p38抗體IgG 0.2ml
65193 Anti-Phospho-MAPKAPK2 (Thr222) /FITC 熒光素標記磷酸化絲裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2抗體IgG 0.2ml
65194 Anti-Phospho-MAPKAPK2 (Thr334)/FITC 熒光素標記磷酸化絲裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2抗體IgG 0.2ml
65195 Anti-P27/kip1/Cy5 熒光素Cy5標記P27抗體/周期素依賴激酶抑制劑IgG 0.2ml
65196 Anti-MAP3K8/TPL2/FITC 熒光素標記絲裂原活化蛋白激酶激酶8抗體IgG 0.2ml
65197 Anti-KEAP1/FITC 熒光素標記胞質(zhì)接頭蛋白Keap1抗體IgG 0.2ml
65198 Anti-p300/KAT3B/FITC 熒光素標記轉(zhuǎn)錄接頭蛋白EP300抗體IgG 0.2ml
65199 Anti-P53/FITC 熒光素標記腫瘤抑制基因抗體(野生型P53)IgG 0.2ml
65200 Anti-Mtp53/FITC 熒光素標記突變型P53抗體IgG 0.2ml
65201 Anti-P53(wt-p53)/FITC 熒光素標記腫瘤抑制基因抗體(野生型P53)IgG 0.2ml
65202 Anti-wtp53/FITC 熒光素標記野生型p53單克隆抗體IgG 0.2ml
65203 Anti-p53BP1/53BP1/FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠p53結合蛋白1抗體IgG 0.2ml
65204 Anti-p53BP1(Ser25/29) /FITC 人單純皰疹病毒Ⅱ型抗體(HSVⅡ-Ab)ELISA試劑盒熒光素標記兔抗人、大、小鼠磷酸化p53結合蛋白1抗體IgG 0.2ml
65205 Anti-phospho-P53 (Ser15) /FITC 熒光素標記磷酸化腫瘤抑制基因P53抗體IgG 0.2ml
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人單純皰疹病毒Ⅱ型抗體(HSVⅡ-Ab)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴謹?shù)墓ぷ髯黠L檢測每一份標本,才能保證檢測質(zhì)量?,F(xiàn)在國內(nèi)已有相當數(shù)量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現(xiàn)ELISA標準化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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