人總前列腺特異抗原(tPSA)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法：
1)目測(cè)定性法：加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后，肉眼觀(guān)察陽(yáng)性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照；與陰性對(duì)照的顏色接近者，判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2～3SD，作為陽(yáng)性結(jié)果的閾值。
3)以P／N值(陽(yáng)性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽(yáng)性；P／N值小于2．1，但大于1．5為可疑；P／N小于1．5為陰性。
4)定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
我們將在人總前列腺特異抗原(tPSA)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問(wèn)題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給客戶(hù)帶來(lái)一些啟發(fā)，提高試驗(yàn)質(zhì)量。

64982 Anti-Phospho-Myt1 (Ser83) /FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化髓鞘轉(zhuǎn)錄因子1抗體IgG  0.2ml
64983 Anti-MyoD1/Myf3/FITC  熒光素標(biāo)記肌原調(diào)節(jié)蛋白抗體IgG  0.2ml
64984 Anti-MYOG/Myogenin/FITC  熒光素標(biāo)記肌紅蛋白抗體(肌細(xì)胞生成素)IgG  0.2ml
64985 Anti-RIP3/FITC  熒光素標(biāo)記受體結(jié)合**激酶3抗體IgG  0.2ml
64986 Anti-MYOZ/MYOZ1 /FITC  熒光素標(biāo)記MYOZ抗體IgG  0.2ml
64987 Anti-MYSM1/FITC  熒光素標(biāo)記MYSM1抗體IgG  0.2ml
64988 Anti-CHRNA4/FITC  熒光素標(biāo)記煙堿型乙酰*受體α4抗體IgG  0.2ml
64989 Anti-CHRNA7/FITC  熒光素標(biāo)記煙堿型乙酰*受體α7抗體IgG  0.2ml
64990 Anti-NADPH/FITC  熒光素標(biāo)記抗NADPH氧化酶抗體IgG  0.2ml
64991 Anti-Nanog/FITC  熒光素標(biāo)記胚胎干細(xì)胞關(guān)鍵蛋白抗體IgG  0.2ml
64992 Anti-NAIF1 protein/FITC  熒光素標(biāo)記核凋亡誘導(dǎo)因子蛋白1抗體IgG  0.2ml
64993 Anti-NAP1 /FITC  熒光素標(biāo)記核小體組裝蛋白1抗體IgG  0.2ml
64994 Anti-PNAT/NAT2/FITC  熒光素標(biāo)記N-乙酰基轉(zhuǎn)移酶2抗體IgG  0.2ml
64995 Anti-Natrexone/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗納曲酮抗體IgG  0.2ml
64996 Anti-NB3/CNTN6/FITC  熒光素標(biāo)記抗神經(jīng)細(xì)胞NB3特定蛋白抗體IgG  0.2ml
64997 Anti-Contactin-6/mNB-3/FITC  熒光素標(biāo)記NB-3神經(jīng)粘附蛋白抗體IgG  0.2ml
64998 Anti-NBS1/FITC  熒光素標(biāo)記DNA修復(fù)蛋白NBS1抗體IgG  0.2ml
64999 Anti-Phospho-p95/NBS1 (Ser343) /FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化DNA修復(fù)蛋白NBS1抗體IgG  0.2ml
65000 Anti-N-cadherin /FITC  熒光素標(biāo)記N-鈣粘附分子抗體IgG  0.2ml
65001 Anti-CD171/NCAM-L1/FITC  熒光素標(biāo)記神經(jīng)細(xì)胞粘附分子配體1抗體IgG  0.2ml
65002 Anti-CD172a/SIRP Alpha/FITC  熒光素標(biāo)記信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白α抗體IgG  0.2ml
65003 Anti-NCF/NCF4/p40phox/FITC  熒光素標(biāo)記嗜中性粒細(xì)胞胞漿因子4抗體IgG  0.2ml
65004 Anti-nck2/FITC  熒光素標(biāo)記NCK銜接因子蛋白2抗體IgG  0.2ml
65005 Anti-NCOA2/KAT13C /FITC  熒光素標(biāo)記核受體輔助激活蛋白2抗體IgG  0.2ml
65006 Anti-NCoR1 /FITC  熒光素標(biāo)記核受體輔助抑制因子1抗體IgG  0.2ml
65007 Anti-NCoR2/FITC  熒光素標(biāo)記核受體輔助抑制因子2抗體IgG  0.2ml
65008 Anti-NCX1/FITC  熒光素標(biāo)記鈉鈣交換蛋白1抗體IgG  0.2ml
65009 Anti-NCX2/SLC8A2/FITC  熒光素標(biāo)記鈉鈣交換蛋白2抗體IgG  0.2ml
65010 Anti-NCX3/FITC  熒光素標(biāo)記鈉鈣交換蛋白3抗體IgG  0.2ml
65011 Anti-Phospho-NDRG1 (Ser330)/FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化分化相關(guān)基因NDRG1抗體IgG  0.2ml
65012 Anti-Phospho-NDRG1 (Thr346)/FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化分化相關(guān)基因NDRG1抗體IgG  0.2ml
65013 Anti-NDRG2/FITC  熒光素標(biāo)記抑癌基因NDRG2抗體IgG  0.2ml
65014 Anti-NDRG4/FITC  熒光素標(biāo)記抑癌基因NDRG4抗體IgG  0.2ml
65015 Anti-Nebulin/FITC  熒光素標(biāo)記伴肌動(dòng)蛋白抗體IgG  0.2ml
65016 Anti-NEP/FITC  熒光素標(biāo)記腦啡肽酶抗體IgG  0.2ml
65017 Anti-Nephrin Protein/FITC  熒光素標(biāo)記*抗體IgG  0.2ml
65018 Anti-Ephrin B/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠Ephrin B抗體IgG  0.2ml
65019 Anti-Ephrin B (phospho Tyr331) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化Ephrin B抗體IgG  0.2ml
65020 Anti-Ephrin B (phospho Tyr298) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化Ephrin B抗體IgG  0.2ml
65021 Anti-Ephrin B (phospho Tyr324/329) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化Ephrin B抗體IgG  0.2ml
65022 Anti-Ephrin B (phospho Tyr317) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化Ephrin B抗體IgG  0.2ml
65023 Anti-Nestin/FITC  熒光素標(biāo)記巢蛋白/神經(jīng)上皮干細(xì)胞蛋白抗體IgG  0.2ml
65024 Anti-Nesfatin-1/Nucb2/FITC  熒光素標(biāo)記新的飽食分子蛋白抗體IgG  0.2ml
65025 Anti-Nestin/FITC  熒光素標(biāo)記巢蛋白/神經(jīng)上皮干細(xì)胞蛋白抗體IgG  0.2ml
65026 Anti-Nestin/RBITC  紅色熒光素羅丹明(RBITC)標(biāo)記巢蛋白/神經(jīng)上皮干細(xì)胞蛋白抗體IgG  0.2ml
65027 Anti-Nestin/RBITC  紅色熒光素羅丹明(RBITC)標(biāo)記巢蛋白/神經(jīng)上皮干細(xì)胞蛋白抗體IgG  0.2ml
65028 Anti-NeuN/FITC  熒光素標(biāo)記神經(jīng)元核抗原抗體IgG  0.2ml
65029 Anti-Neurobeachin protein /FITC  熒光素標(biāo)記蛋白激酶錨定蛋白/激酶固定蛋白抗體IgG  0.2ml
65030 Anti-Neurocan/FITC  熒光素標(biāo)記神經(jīng)粘蛋白抗體IgG  0.2ml
65031 Anti-Neuro D/FITC  熒光素標(biāo)記抗神經(jīng)源分化因子抗體IgG  0.2ml
65032 Anti-Neurofascin-155/FITC  熒光素標(biāo)記神經(jīng)束蛋白-155抗體IgG  0.2ml
65033 Anti-NF2/merlin /FITC  人總前列腺特異抗原(tPSA)ELISA試劑盒熒光素標(biāo)記2型神經(jīng)纖維瘤抗體IgG  0.2ml
65034 Anti-NF-66/a-Internexin/FITC  熒光素標(biāo)記α-中連蛋白抗體IgG  0.2ml
65035 Anti-NFAM1/CNAIP/FITC  熒光素標(biāo)記NFAM1抗體IgG  0.2ml
65036 Anti-NFATc1/FITC  熒光素標(biāo)記活化T細(xì)胞核因子1蛋白抗體IgG  0.2ml

下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因，并給出相應(yīng)的解決辦法：
1 選擇試劑：選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑，嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣：可能原因： 
1）血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣； 
2）手工操作中，加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí))； 3）加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法： 
1） 標(biāo)本為血清：將血液先自然存放1-2小時(shí)后，再用3000rmp離心15分鐘；標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒*混合5-10次，放置一段時(shí)間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測(cè)，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。 
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。 
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。 
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 
5) 標(biāo)本較多時(shí)，請(qǐng)分批操作。
3 孵育：可能原因： 
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗*； 
2) 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng)，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周?chē)y以清洗*。解決辦法： 
1) 貼封片或加蓋； 
2) 按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板：可能原因： 
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。 
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí)，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不*；洗板針堵塞，抽吸不*；洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差。 
3) 反應(yīng)板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。 解決辦法： 
1) 保證洗液注滿(mǎn)各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙（選擇干凈、無(wú)或少塵的吸水材料）上輕輕拍干； 
2) 合理安排，或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5人總前列腺特異抗原(tPSA)ELISA試劑盒顯色：可能原因： 
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或使用過(guò)期顯色劑； 
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法： 
1) 顯色劑盡量在臨用前配制，堅(jiān)持不用過(guò)期顯色劑，肉眼可見(jiàn)淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用； 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流； 
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止：可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽(yáng)性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板：如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過(guò)程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化，有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
在實(shí)際操作中，除了選擇優(yōu)良試劑外，必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作，同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng)，以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本，才能保證檢測(cè)質(zhì)量。現(xiàn)在國(guó)內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀，這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。
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