人游離三碘甲狀腺原氨酸(Free-T3)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法：
1)目測(cè)定性法：加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后，肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照；與陰性對(duì)照的顏色接近者，判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2～3SD，作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P／N值(陽性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽性；P／N值小于2．1，但大于1．5為可疑；P／N小于1．5為陰性。
4)定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
我們將在人游離三碘甲狀腺原氨酸(Free-T3)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給客戶帶來一些啟發(fā)，提高試驗(yàn)質(zhì)量。

64588 Anti-Integrin alpha 1/CD49a/FITC  熒光素標(biāo)記整合素α1抗體IgG  0.2ml
64589 Anti-Integrin Alpha2/CD49b/FITC  熒光素標(biāo)記整合素α2抗體IgG  0.2ml
64590 Anti-Integrin Alpha2b/CD41/FITC  熒光素標(biāo)記血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa抗體IgG  0.2ml
64591 Anti-Integrin Alpha3/FITC  熒光素標(biāo)記整合素α3抗體IgG  0.2ml
64592 Anti-Integrin Alpha3 Beta1/FITC  熒光素標(biāo)記整合素α3β1抗體IgG  0.2ml
64593 Anti-Integrin a7/FITC  熒光素標(biāo)記整合素α7抗體IgG  0.2ml
64594 Anti-Integrin AlphaE2/CD103 /FITC  熒光素標(biāo)記整合素αE2抗體IgG  0.2ml
64595 anti-Integrin alpha E2 /FITC  熒光素標(biāo)記整合素alpha E2 抗體IgG  0.2ml
64596 Anti-Integrin AlphaM/CD11b /FITC  熒光素標(biāo)記巨噬細(xì)胞表面分子/整合素-α2抗體IgG  0.2ml
64597 Anti-Integrin avb3/FITC  熒光素標(biāo)記整合素avb3抗體IgG  0.2ml
64598 Anti-Integrin AlphaV Beta5/FITC  熒光素標(biāo)記整合素αVβ5抗體IgG  0.2ml
64599 Anti-Integrin Beta5/FITC  熒光素標(biāo)記整合素β5抗體IgG  0.2ml
64600 Anti-IQGAP1/FITC  熒光素標(biāo)記支架蛋白抗體IgG  0.2ml
64601 Anti-Phospho-IRAK1 (Ser376) /FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化白介素-1受體相關(guān)激酶1抗體IgG  0.2ml
64602 Anti-Phospho-IRAK1 (Thr209) /FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化白介素-1受體相關(guān)激酶1抗體IgG  0.2ml
64603 Anti-Phospho-IRAK1 (Thr387) /FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化白介素-1受體相關(guān)激酶1抗體IgG  0.2ml
64604 Anti-IRAK 2/FITC  熒光素標(biāo)記白介素-1受體相關(guān)激酶2抗體IgG  0.2ml
64605 Anti-IRAK4/FITC  熒光素標(biāo)記白介素-1受體相關(guān)激酶4抗體IgG  0.2ml
64606 Anti-IRF-1/FITC  熒光素標(biāo)記干擾素調(diào)節(jié)因子抗體IgG  0.2ml
64607 Anti-IRF3 /FITC  熒光素標(biāo)記干擾素調(diào)節(jié)因子3抗體IgG  0.2ml
64608 Anti-Phospho-IRF3 (Ser396)/FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化干擾素調(diào)節(jié)因子3抗體IgG  0.2ml
64609 Anti-IRF-4/FITC  熒光素標(biāo)記干擾素調(diào)節(jié)因子4抗體IgG  0.2ml
64610 Anti-IRF7 /FITC  熒光素標(biāo)記干擾素調(diào)節(jié)因子7抗體IgG  0.2ml
64611 Anti-Phospho-IRF7 (Ser471/472) /FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化干擾素調(diào)節(jié)因子7抗體IgG  0.2ml
64612 Anti-IRS-1/FITC   熒光素標(biāo)記胰島素受體底物-1抗體IgG  0.2ml
64613 Anti-phospho-IRS1(Tyr895)/FITC   熒光素標(biāo)記磷酸化胰島素受體底物-1抗體IgG  0.2ml
64614 Anti-phospho-IRS1(Tyr1222)/FITC   熒光素標(biāo)記磷酸化胰島素受體底物-1抗體IgG  0.2ml
64615 Anti-phospho-IRS1(Ser1101)/FITC   熒光素標(biāo)記磷酸化胰島素受體底物-1抗體IgG  0.2ml
64616 Anti-phospho-IRS1(Ser302) /FITC   熒光素標(biāo)記磷酸化胰島素受體底物-1抗體IgG  0.2ml
64617 Anti-phospho-IRS1(Ser332/336)/FITC   熒光素標(biāo)記磷酸化胰島素受體底物-1抗體IgG  0.2ml
64618 Anti-phospho-IRS1(Ser612)/FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化胰島素受體底物-1抗體IgG  0.2ml
64619 Anti-phospho-IRS1(Ser636/639) /FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化胰島素受體底物-1抗體IgG  0.2ml
64620 Anti-phospho-IRS1(Ser789)/FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化胰島素受體底物-1抗體IgG  0.2ml
64621 Anti-IRS-2/FITC   熒光素標(biāo)記胰島素受體底物-2抗體IgG  0.2ml
64622 Anti-IRS-3/FITC   熒光素標(biāo)記胰島素受體底物-3抗體IgG  0.2ml
64623 Anti-IRS-4/FITC   熒光素標(biāo)記胰島素受體底物-4抗體IgG  0.2ml
64624 Anti-IRS P53 /FITC  熒光素標(biāo)記胰島素受體底物p53蛋白抗體IgG  0.2ml
64625 Anti-ISR/FITC  熒光素標(biāo)記胰島素受體抗體IgG  0.2ml
64626 Anti-ISR- Alpha /FITC(Insulin Receptor- Alpha)  熒光素標(biāo)記胰島素受體抗體  0.2ml
64627 Anti-ISR- Alpha protein/FITC  熒光素標(biāo)記胰島素受體-α蛋白抗體IgG  0.2ml
64628 Anti-ISR- Beta /FITC  熒光素標(biāo)記胰島素受體-β抗體IgG  0.2ml
64629 Anti-ISR- Alpha protein/RBITC  羅丹明標(biāo)記胰島素受體-α 抗體IgG  0.2ml
64630 Anti-Integrin- Alpha 4/FITC  熒光素標(biāo)記整合素α4抗體IgG  0.2ml
64631 Anti-Integrin- Alpha V/CD49e /FITC  熒光素標(biāo)記整合素αV抗體IgG  0.2ml
64632 Anti-Integrin AlphaV /FITC  熒光素標(biāo)記巨噬細(xì)胞來源的趨化因子αV抗體IgG  0.2ml
64633 Anti-Integrin- Beta3/ITG- Beta3/CD61/FITC  熒光素標(biāo)記整合素-β3抗體IgG  0.2ml
64634 Anti-Iumbrokinase/FITC  熒光素標(biāo)記抗蚯蚓纖溶酶抗體/抗*抗體IgG  0.2ml
64635 Anti-Integrin Alpha6/CD49f/VLA-6/FITC  熒光素標(biāo)記整合素α6抗體IgG  0.2ml
64636 Anti-Jab1/FITC  熒光素標(biāo)記Jun激活區(qū)域-連接蛋白1抗體IgG  0.2ml
64637 Anti-JAK1/FITC  熒光素標(biāo)記蛋白質(zhì)*激酶JAK-1抗體IgG  0.2ml
64638 Anti-Phospho-Jak1 (Tyr1022/1023) /FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化蛋白質(zhì)*激酶JAK-1抗體IgG  0.2ml
64639 Anti-JAK2/FITC  熒光素標(biāo)記蛋白質(zhì)*激酶JAK-2抗體IgG  0.2ml
64640 Anti-phospho-JAK2(Tyr221) /FITC   熒光素標(biāo)記磷酸化蛋白*激酶JAK-2抗體IgG  0.2ml
64641 Anti-phospho JAK2(Tyr1007+Tyr1008)/FITC 人游離三碘甲狀腺原氨酸(Free-T3)ELISA試劑盒 熒光素標(biāo)記磷酸化蛋白*激酶JAK-2抗體IgG  0.2ml
64642 Anti-Jak3/FITC  熒光素標(biāo)記蛋白*激酶JAK-3抗體IgG  0.2ml
64643 Anti-Phospho-Jak3 (Tyr785)/FITC   熒光素標(biāo)記磷酸化蛋白*激酶JAK-3抗體IgG  0.2ml

下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因，并給出相應(yīng)的解決辦法：
1 選擇試劑：選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑，嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣：可能原因： 
1）血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣； 
2）手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí))； 3）加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法： 
1） 標(biāo)本為血清：將血液先自然存放1-2小時(shí)后，再用3000rmp離心15分鐘；標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒*混合5-10次，放置一段時(shí)間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測(cè)，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。 
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。 
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。 
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 
5) 標(biāo)本較多時(shí)，請(qǐng)分批操作。
3 孵育：可能原因： 
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗*； 
2) 孵育時(shí)間人為延長，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗*。解決辦法： 
1) 貼封片或加蓋； 
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板：可能原因： 
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。 
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí)，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不*；洗板針堵塞，抽吸不*；洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差。 
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長。 解決辦法： 
1) 保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙（選擇干凈、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干； 
2) 合理安排，或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5人游離三碘甲狀腺原氨酸(Free-T3)ELISA試劑盒顯色：可能原因： 
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過長或使用過期顯色劑； 
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法： 
1) 顯色劑盡量在臨用前配制，堅(jiān)持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用； 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流； 
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止：可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板：如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化，有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
在實(shí)際操作中，除了選擇優(yōu)良試劑外，必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作，同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng)，以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本，才能保證檢測(cè)質(zhì)量?，F(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀，這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。
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