人大內(nèi)皮素(Big ET)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法：
1)目測(cè)定性法：加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后，肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照；與陰性對(duì)照的顏色接近者，判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2～3SD，作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P／N值(陽性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽性；P／N值小于2．1，但大于1．5為可疑；P／N小于1．5為陰性。
4)定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
我們將在人大內(nèi)皮素(Big ET)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給客戶帶來一些啟發(fā)，提高試驗(yàn)質(zhì)量。

64476 Anti-IGSF8/CD3/FITC  熒光素標(biāo)記免疫球蛋超家族成員8抗體IgG  0.2ml
64477 Anti-IKB Alpha/FITC  熒光素標(biāo)記KB抑制蛋白α抗體IgG  0.2ml
64478 Anti-IKB alpha(phospho S32 + S36)/FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化KB抑制蛋白α抗體IgG  0.2ml
64479 Anti-IKB Beta/FITC  熒光素標(biāo)記KB抑制蛋白β抗體IgG  0.2ml
64480 Anti-phospho-IkB beta (Ser23)/FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化KB抑制蛋白β抗體IgG  0.2ml
64481 Anti-IL-1 Alpha /FITC  熒光素標(biāo)記白介素1α抗體IgG  0.2ml
64482 Anti-IL-1 Beta/FITC  熒光素標(biāo)記白介素1β抗體IgG  0.2ml
64483 Anti-IL-1ra/FITC  熒光素標(biāo)記白介素-1受體拮抗劑抗體IgG  0.2ml
64484 Anti-IL-1RA (Interleukin-1 receptor antagonist) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠、豬、牛、羊、犬白介素-1受體拮抗劑抗體IgG  0.2ml
64485 Anti-IL-1R I /FITC  熒光素標(biāo)記白介素1受體Ⅰ抗體IgG  0.2ml
64486 Anti-IL-1R II /FITC  熒光素標(biāo)記白介素1受體Ⅱ抗體IgG  0.2ml
64487 Anti-IL1RAPL1 /FITC  熒光素標(biāo)記白介素受體相關(guān)蛋白樣1前體蛋白抗體IgG  0.2ml
64488 Anti-IL-2/FITC  熒光素標(biāo)記白介素2抗體IgG  0.2ml
64489 Anti-IL-2/FITC  熒光素標(biāo)記白介素2抗體(人) IgG  0.2ml
64490 Anti-ITK/PSCTK2/FITC   熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠IL-2誘導(dǎo)型T細(xì)胞激酶抗體IgG  0.2ml
64491 Anti-IL-2R Gamma/FITC  熒光素標(biāo)記白介素2受體γ鏈抗體IgG  0.2ml
64492 Anti-CD122/IL-2RB/FITC  熒光素標(biāo)記CD122/白介素2受體β鏈抗體IgG  0.2ml
64493 Anti-IL-3/FITC (mouse, rat)  熒光素標(biāo)記白介素3抗體IgG  0.2ml
64494 Anti-IL-3R Alpha/CD123/FITC  熒光素標(biāo)記白介素3受體a鏈抗體IgG  0.2ml
64495 Anti-IKI3 family protein/FITC  熒光素標(biāo)記擬南芥IKI3抗體IgG  0.2ml
64496 Anti-IKK gamma/FITC  熒光素標(biāo)記核因子κB激酶gamma抑制劑抗體IgG  0.2ml
64497 Anti-IKK alpha/FITC  熒光素標(biāo)記核因子κB激酶alpha抑制劑抗體IgG  0.2ml
64498 Anti-IKK beta /FITC  熒光素標(biāo)記核因子κB激酶beta抑制劑抗體IgG  0.2ml
64499 Anti-phospho-IKK gamma (Ser85) /FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化核因子κB激酶gamma抑制劑抗體IgG  0.2ml
64500 Anti-phospho-IKK gamma (Ser31) /FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化核因子κB激酶gamma抑制劑抗體IgG  0.2ml
64501 Anti-phospho-IKK alpha (Thr23) /FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化核因子κB激酶alpha抑制劑抗體IgG  0.2ml
64502 Anti-phospho-IKK gamma (Ser376)/FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化核因子κB激酶gamma抑制劑抗體IgG  0.2ml
64503 Anti-phospho-IKK alpha (Tyr463) /FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化核因子κB激酶alpha抑制劑抗體IgG  0.2ml
64504 Anti-phospho-IKK alpha (Ser176 + Ser180) /FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化核因子κB激酶alpha抑制劑抗體IgG  0.2ml
64505 Anti-Phospho-IKK alpha/IKK beta (Ser180/Ser181) /FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化核因子κB激酶alpha/beta抑制劑抗體IgG  0.2ml
64506 Anti-Phospho-IKK alpha/beta (Ser176/Ser180) /FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化核因子κB激酶alpha/beta抑制劑抗體IgG  0.2ml
64507 Anti-phospho-IKK beta (Tyr466) /FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化核因子κB激酶beta抑制劑抗體IgG  0.2ml
64508 Anti-phospho-IKK beta (Tyr199) /FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化核因子κB激酶beta抑制劑抗體IgG  0.2ml
64509 Anti-phospho-IKK beta (Tyr188) /FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化核因子κB激酶beta抑制劑抗體IgG  0.2ml
64510 Anti-IL-4/FITC   熒光素標(biāo)記白介素4抗體IgG  0.2ml
64511 Anti-IL-4/FITC  熒光素標(biāo)記抗白介素4抗體(人)IgG  0.2ml
64512 Anti-IL-4R/FITC  熒光素標(biāo)記白細(xì)胞介素4受體抗體IgG  0.2ml
64513 Anti-IL-5/FITC   熒光素標(biāo)記白介素5抗體IgG  0.2ml
64514 Anti-IL-5R Alpha/CD125/FITC  熒光素標(biāo)記白介素-5受體α鏈抗體IgG  0.2ml
64515 Anti-IL-6/FITC   熒光素標(biāo)記白介素6抗體IgG  0.2ml
64516 Anti-IL-6/FITC (mouse、rat)  熒光素標(biāo)記白介素6抗體IgG  0.2ml
64517 Anti-IL-6/FITC  熒光素標(biāo)記白介素6抗體IgG  0.2ml
64518 Anti-gp130/IL-6R /FITC  熒光素標(biāo)記白介素-6受體抗體IgG  0.2ml
64519 Anti-IL-6(Human)/HRP  辣根過氧化物酶標(biāo)記白介素6(人)抗體IgG  0.2ml
64520 Anti-IL-7/FITC   熒光素標(biāo)記白介素7抗體IgG  0.2ml
64521 Anti-Il-7R a/CD127 /FITC  熒光素標(biāo)記白細(xì)胞介素-7受體a抗體IgG  0.2ml
64522 Anti-IL-8/FITC   熒光素標(biāo)記兔抗人、牛、豬、羊、兔白介素8抗體IgG  0.2ml
64523 Anti-IL-9/FITC   熒光素標(biāo)記白介素9抗體IgG  0.2ml
64524 Anti-IL-10/FITC   熒光素標(biāo)記白介素10抗體IgG  0.2ml
64525 Anti-IL-10R/CD210/FITC  熒光素標(biāo)記白細(xì)胞介素-10受體抗體IgG  0.2ml
64526 Anti-IL-10R Beta/IL10RB/CDw210b/FITC  熒光素標(biāo)記白細(xì)胞介素-10受體β抗體IgG  0.2ml
64527 Anti-IL-11/FITC 人大內(nèi)皮素(Big ET)ELISA試劑盒 熒光素標(biāo)記白介素11抗體IgG  0.2ml
64528 Anti-IL-12/FITC   熒光素標(biāo)記白介素12抗體IgG  0.2ml
64529 Anti-IL-12/FITC  熒光素標(biāo)記抗白介素12抗體(人)IgG  0.2ml
64530 Anti-IL-12R Beta1/CD212/FITC  熒光素標(biāo)記白細(xì)胞介素-12受體β1抗體IgG  0.2ml

下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因，并給出相應(yīng)的解決辦法：
1 選擇試劑：選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑，嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣：可能原因： 
1）血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣； 
2）手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí))； 3）加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法： 
1） 標(biāo)本為血清：將血液先自然存放1-2小時(shí)后，再用3000rmp離心15分鐘；標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒*混合5-10次，放置一段時(shí)間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測(cè)，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。 
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。 
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。 
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 
5) 標(biāo)本較多時(shí)，請(qǐng)分批操作。
3 孵育：可能原因： 
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗*； 
2) 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng)，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗*。解決辦法： 
1) 貼封片或加蓋； 
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板：可能原因： 
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。 
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí)，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不*；洗板針堵塞，抽吸不*；洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差。 
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。 解決辦法： 
1) 保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙（選擇干凈、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干； 
2) 合理安排，或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5人大內(nèi)皮素(Big ET)ELISA試劑盒顯色：可能原因： 
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過長(zhǎng)或使用過期顯色劑； 
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法： 
1) 顯色劑盡量在臨用前配制，堅(jiān)持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用； 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流； 
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止：可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板：如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化，有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
在實(shí)際操作中，除了選擇優(yōu)良試劑外，必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作，同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng)，以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本，才能保證檢測(cè)質(zhì)量?，F(xiàn)在國(guó)內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀，這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。
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