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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時(shí)間:2017-01-06 16:26:50瀏覽次數(shù):288次
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人抗利尿激素/血管加壓素/*加壓素(ADH/VP/AVP)ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人抗利尿激素/血管加壓素/*加壓素(ADH/VP/AVP)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測(cè)定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽(yáng)性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照;與陰性對(duì)照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2~3SD,作為陽(yáng)性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽(yáng)性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽(yáng)性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
我們將在人抗利尿激素/血管加壓素/*加壓素(ADH/VP/AVP)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問(wèn)題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶(hù)帶來(lái)一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
63634 Anti-CK3/FITC 熒光素標(biāo)記細(xì)胞角蛋白3抗體IgG 0.2ml
63635 Anti-CK4/FITC 熒光素標(biāo)記細(xì)胞角蛋白4抗體IgG 0.2ml
63636 Anti-CK5/FITC 熒光素標(biāo)記細(xì)胞角蛋白5抗體IgG 0.2ml
63637 Anti-PCNA(phosphos Dyr211)/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、小鼠、大鼠、牛、兔、羊、雞磷酸化增殖細(xì)胞核抗原抗體IgG 0.2ml
63638 Anti-CK5/6 /FITC 熒光素標(biāo)記細(xì)胞角蛋白5/6抗體IgG 0.2ml
63639 Anti-CK7/FITC 熒光素標(biāo)記細(xì)胞角蛋白7抗體IgG 0.2ml
63640 Anti-CK7/FITC 熒光素標(biāo)記抗細(xì)胞角蛋白7抗體(大、小鼠)IgG 0.2ml
63641 Anti-CK10/FITC 熒光素標(biāo)記細(xì)胞角蛋白10抗體IgG 0.2ml
63642 Anti-CK10/RBITC 紅色熒光素羅丹明標(biāo)記細(xì)胞角蛋白10抗體IgG 0.2ml
63643 Anti-CK14/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗細(xì)胞角蛋白14抗體IgG 0.2ml
63644 Anti-CK15/FITC 熒光素標(biāo)記細(xì)胞角蛋白15抗體IgG 0.2ml
63645 Anti-CK16/FITC 熒光素標(biāo)記細(xì)胞角蛋白16抗體IgG 0.2ml
63646 Anti-CK17/FITC 熒光素標(biāo)記細(xì)胞角蛋白17抗體IgG 0.2ml
63647 Anti-Phospho-Cytokeratin 17 (Ser44) /FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化細(xì)胞角蛋白17抗體IgG 0.2ml
63648 Anti-CK18/FITC 熒光素標(biāo)記細(xì)胞角蛋白18抗體IgG 0.2ml
63649 Anti-CK18(C-term) /FITC 熒光素標(biāo)記細(xì)胞角蛋白18抗體(C端)IgG 0.2ml
63650 Anti-CK18/FITC 熒光素標(biāo)記細(xì)胞角蛋白18抗體IgG 0.2ml
63651 Anti-CK19/FITC 熒光素標(biāo)記細(xì)胞角蛋白19抗體IgG 0.2ml
63652 Anti-CK19/Gold 膠體金離子標(biāo)記細(xì)胞角蛋白19抗體IgG 0.2ml
63653 Anti-CK19/FITC 熒光素標(biāo)記細(xì)胞角蛋白19抗體IgG 0.2ml
63654 Anti-CK19/RBITC 紅色熒光素羅丹明標(biāo)記細(xì)胞角蛋白19抗體IgG 0.2ml
63655 Anti-CK20/FITC 熒光素標(biāo)記細(xì)胞角蛋白20抗體IgG 0.2ml
63656 Anti-CK34 BetaE12/FITC 熒光素標(biāo)記高分子量角蛋白CK34βE12抗體IgG 0.2ml
63657 Anti-CK-HMW/FITC 熒光素標(biāo)記高分子量細(xì)胞角蛋白抗體IgG 0.2ml
63658 Anti-CKMT2/FITC 熒光素標(biāo)記肌酸磷酸激酶2抗體IgG 0.2ml
63659 Anti-CKIP-1/FITC 熒光素標(biāo)記酪蛋白激酶2相互作用蛋白1抗體IgG 0.2ml
63660 Anti-CKLFSF2(human)/FITC 熒光素標(biāo)記人類(lèi)新細(xì)胞因子/趨化素樣因子超家族成員2抗體IgG 0.2ml
63661 Anti-CLCA4/FITC 熒光素標(biāo)記鈣激活氯離子通道4抗體IgG 0.2ml
63662 Anti-CLDN1/FITC 熒光素標(biāo)記緊密連接蛋白1抗體(C端)IgG 0.2ml
63663 Anti-CLDN1/FITC 熒光素標(biāo)記緊密連接蛋白1抗體IgG 0.2ml
63664 Anti-ocludin-5/FITC 熒光素標(biāo)記緊密連接蛋白-5抗體IgG 0.2ml
63665 Anti-CLDN3/Claudin 3/FITC 熒光素標(biāo)記緊密連接蛋白3抗體IgG 0.2ml
63666 Anti-CLDN4/Claudin 4/FITC 熒光素標(biāo)記緊密連接蛋白4抗體IgG 0.2ml
63667 Anti-CLDN5/FITC 熒光素標(biāo)記緊密連接蛋白5抗體IgG 0.2ml
63668 Anti-CLEC-1/CLEC1A/FITC 熒光素標(biāo)記C型凝集素結(jié)構(gòu)域家族1成員A抗體IgG 0.2ml
63669 Anti-CLEC-2/CLEC1B/FITC 熒光素標(biāo)記C型凝集素結(jié)構(gòu)域家族1成員B抗體IgG 0.2ml
63670 Anti-CLEC2D/OCIL/FITC 熒光素標(biāo)記CLEC2D蛋白抗體IgG 0.2ml
63671 Anti-CLEC5A/MDL1/FITC 熒光素標(biāo)記C型凝集素結(jié)構(gòu)域家族5成員A抗體IgG 0.2ml
63672 Anti-CLEC13D/MMR1/CD206/FITC 熒光素標(biāo)記巨噬細(xì)胞甘露糖受體抗體IgG 0.2ml
63673 Anti-Clostridium perfringens type D/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗D型產(chǎn)氣莢膜梭菌抗體IgG 0.2ml
63674 Anti-cofilin/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠絲切蛋白抗體IgG 0.2ml
63675 Anti-Phospho-Cofilin (Ser3) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化絲切蛋白抗體IgG 0.2ml
63676 Anti-Cortactin/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠皮層肌動(dòng)蛋白抗體IgG 0.2ml
63677 Anti-Cortactin (phospho Tyr466) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化皮層肌動(dòng)蛋白抗體IgG 0.2ml
63678 Anti-COLEC12/CL-P1/FITC 熒光素標(biāo)記凝集胎盤(pán)蛋白1抗體IgG 0.2ml
63679 Anti-Glycodelin A/PP14/FITC 熒光素標(biāo)記胎盤(pán)蛋白14抗體IgG 0.2ml
63680 Anti-Clusterin- Alpha/ Beta /FITC 熒光素標(biāo)記凝聚素α/β抗體IgG 0.2ml
63681 Anti-C-Myc/HRP (MYC/MTLC) 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記致癌基因C-Myc抗體IgG 0.2ml
63682 Anti-C-Mer/MERTK /FITC 熒光素標(biāo)記c-mer原癌基因*激酶抗體IgG 0.2ml
63683 Anti-C-Met/HGFR /FITC 熒光素標(biāo)記肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體(原癌基因蛋白)抗體IgG 0.2ml
63684 Anti-C-Met/HGFR/HRP/*加壓素(ADH/VP/AVP)ELISA試劑盒 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體(原癌基因蛋白)抗體IgG 0.2ml
63685 Anti-SMMHC/MYH11/FITC 熒光素標(biāo)記平滑肌肌球蛋白重鏈抗體IgG 0.2ml
63686 Anti-SM-MHC/FITC 熒光素標(biāo)記心肌肌凝蛋白抗體IgG 0.2ml
63687 Anti-CMKLR1/CHEMR23/FITC 熒光素標(biāo)記趨化樣因子受體1抗體IgG 0.2ml
63688 Anti-C-Myc/MYC/MTLC /FITC 熒光素標(biāo)記C-Myc致癌基因抗體IgG 0.2ml
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑,嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測(cè),可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時(shí),請(qǐng)分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng),導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周?chē)y以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿(mǎn)各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無(wú)或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5/*加壓素(ADH/VP/AVP)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或使用過(guò)期顯色劑;
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過(guò)期顯色劑,肉眼可見(jiàn)淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽(yáng)性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過(guò)程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化,有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng),以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本,才能保證檢測(cè)質(zhì)量。現(xiàn)在國(guó)內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀,這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。
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