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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時(shí)間:2017-01-31 21:53:35瀏覽次數(shù):224次
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人毒蕈堿型乙酰*受體(M-AChR)ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人毒蕈堿型乙酰*受體(M-AChR)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測(cè)定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽(yáng)性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照;與陰性對(duì)照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2~3SD,作為陽(yáng)性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽(yáng)性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽(yáng)性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
我們將在人毒蕈堿型乙酰*受體(M-AChR)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
62676 Anti-TFPI/LACI 組織因子途徑抑制劑抗體 0.1ml
62677 Anti-TFPI-2 組織因子途徑抑制劑-2抗體 0.2ml
62678 Anti-TGF-alpha 轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)因子–α抗體 0.1ml
62679 Anti-TGF- Beta 1 轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1抗體 0.1ml
62680 Anti-TGF-Beta 1 轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1抗體 0.1ml
62681 Anti-TIEG1 TGF-β誘導(dǎo)早期應(yīng)答基因1抗體 0.2ml
62682 Anti-TGF-beta 2 轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)因子β2抗體 0.1ml
62683 Anti-TGF beta 3 轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)因子β3抗體 0.1ml
62684 Anti-TGF Beta R1/TGFBR1 轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)因子β受體1抗體 0.1ml
62685 Anti-TGF beta R2/TGFBR2 轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)因子β受體2抗體 0.1ml
62686 Anti-TGF Beta R3 轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)因子β受體3抗體 0.2ml
62687 Anti-TGM3 轉(zhuǎn)谷氨酰酶3抗體 0.2ml
62688 Anti-Thioster-containing protein 1 按蚊硫酯包含蛋白-1抗體 1ml
62689 Anti-ERdj5 ERdj5蛋白抗體 0.2ml
62690 Anti-thrombin II *Ⅱ抗體 0.2ml
62691 Anti-phospho-p38MAPK/MAPK14 (pThr180/pTyr182) 磷酸化p38MAPK抗體 0.1ml
62692 Anti-Tie1 血管生成素受體1抗體 0.2ml
62693 Anti-Thy-1/CD90 CD90抗體 0.1ml
62694 Anti-CD93/C1qrp CD93抗體 0.2ml
62695 Anti-CD94/KLRD1 NK細(xì)胞表面抑制性受體CD94抗體 0.2ml
62696 Anti-CD97 CD97抗體 0.2ml
62697 Anti-CD99/E2 antigen CD99抗體 0.2ml
62698 Anti-Thymosin Alpha-1 *α1抗體 0.1ml
62699 Anti-T4 甲狀腺素T4抗體 0.2ml
62700 Anti-Tie2 血管生成素受體2抗體 0.1ml
62701 Anti-Phospho-Tie2 (Ser1119) 磷酸化血管生成素受體2抗體 0.1ml
62702 Anti-Phospho-Tie2 (Tyr992) 磷酸化血管生成素受體2抗體 0.1ml
62703 anti-RARRES1/TIG1 *受體應(yīng)答蛋白1抗體 0.2ml
62704 anti-Rarres2/TIG2 *受體應(yīng)答蛋白2抗體 0.2ml
62705 Anti-Rarres3/TIG3 *受體應(yīng)答蛋白3抗體 0.2ml
62706 Anti-TIGAR TIGAR蛋白抗體 0.1ml
62707 Anti-TIMP-1 金屬蛋白酶組織抑制因子-1抗體 0.1ml
62708 Anti-TIMP-2 金屬蛋白酶組織抑制因子-2抗體 0.1ml
62709 Anti-TIMP-3 金屬蛋白酶組織抑制因子-3抗體 0.1ml
62710 Anti-TIMP-4 金屬蛋白酶組織抑制因子-4抗體 0.1ml
62711 Anti-TLK1 調(diào)節(jié)染色體組裝激酶1抗體 0.2ml
62712 Anti-Phospho-TLK1 (Ser695) 磷酸化調(diào)節(jié)染色體組裝激酶1抗體 0.1ml
62713 Anti-TLR1 Toll樣受體1抗體 0.2ml
62714 Anti-TLR2/CD282 Toll樣受體2抗體 0.2ml
62715 Anti-TLR3 Toll樣受體3抗體 0.2ml
62716 Anti-TLR4/CD284 Toll樣受體4抗體 0.1ml
62717 Anti-TLR5 Toll樣受體5抗體 0.2ml
62718 Anti-TLR6/CD286 Toll樣受體6抗體 0.2ml
62719 Anti-TLR9/CD289 Toll樣受體9抗體 0.2ml
62720 Anti-TLR11 Toll樣受體11抗體 0.2ml
62721 Anti-Thrombomodulin 血栓調(diào)節(jié)蛋白抗體 0.1ml
62722 Anti-GDNF Receptor alpha 2 膠質(zhì)細(xì)胞系源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子受體alpha 2抗體 0.1ml
62723 Anti-Tenascin C (C terminal) 細(xì)胞粘合素抗體(C端)腱糖蛋白-C(固生蛋白)抗體 0.2ml
62724 Anti-Tenascin C/Tn-C 細(xì)胞粘合素(固生蛋白)抗體 0.1ml
62725 Anti-TNF-alpha 腫瘤壞死因子-α單克隆抗體 0.1ml
62726 Anti-TNF-alpha 腫瘤壞死因子-α抗體 0.1ml
62727 Anti-TNF-alpha 人毒蕈堿型乙酰*受體(M-AChR)ELISA試劑盒腫瘤壞死因子-α抗體 0.1ml
62728 Anti-TNFSF4 腫瘤壞死因子配體超家族成員4抗體 0.1ml
62729 Anti-OX40/CD134/TNFRSF4 CD134抗體 0.2ml
62730 Anti-TNF-beta 腫瘤壞死因子-β抗體 0.1ml
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測(cè),可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時(shí),請(qǐng)分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng),導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5人毒蕈堿型乙酰*受體(M-AChR)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過長(zhǎng)或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽(yáng)性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化,有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng),以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本,才能保證檢測(cè)質(zhì)量?,F(xiàn)在國(guó)內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀,這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。
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