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上海紀寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時間:2017-01-16 00:23:01瀏覽次數(shù):219次
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人剛地弓形蟲(T.gondii)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯(lián)免疫實驗得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人剛地弓形蟲(T.gondii)ELISA試劑盒實驗ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人剛地弓形蟲(T.gondii)ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗質(zhì)量。
61771 Anti-Phospho-Myt1 (Ser83) 磷酸化髓鞘轉(zhuǎn)錄因子1抗體 0.1ml
61772 Anti-MIF 巨噬細胞移動抑制因子抗體 0.1ml
61773 Anti-MIP-1 Alpha 巨噬細胞炎癥因子1α抗體 0.1ml
61774 Anti-MIP-1 Beta 巨噬細胞炎癥因子1β 抗體 0.1ml
61775 Anti-MIP4/CCL18 巨噬細胞炎癥蛋白18抗體 0.2ml
61776 Anti-MITF 小眼相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子抗體 0.2ml
61777 Anti-MMP-1 基質(zhì)金屬蛋白酶-1抗體 0.1ml
61778 Anti-MMP-1 基質(zhì)金屬蛋白酶-1抗體 0.1ml
61779 Anti-MMP-2 基質(zhì)金屬蛋白酶-2抗體 0.1ml
61780 Anti-MMP-3 基質(zhì)金屬蛋白酶-3抗體 0.1ml
61781 Anti-MMP-7 基質(zhì)金屬蛋白酶-7抗體 0.1ml
61782 Anti-MMP-8 基質(zhì)金屬蛋白酶-8抗體 0.1ml
61783 Anti-MMP-9 基質(zhì)金屬蛋白酶-9抗體 0.1ml
61784 Anti-MMP-9 基質(zhì)金屬蛋白酶-9抗體 0.1ml
61785 Anti-MMP-13 基質(zhì)金屬蛋白酶13抗體 0.1ml
61786 Anti-MMP-14 基質(zhì)金屬蛋白酶-14抗體 0.1ml
61787 Anti-MMP-15 基質(zhì)金屬蛋白酶-15抗體 0.1ml
61788 Anti-MMP-16 基質(zhì)金屬蛋白酶-16抗體 0.1ml
61789 Anti-MMP-20 基質(zhì)金屬蛋白酶20抗體 0.1ml
61790 Anti-MMP-17 基質(zhì)金屬蛋白酶-17抗體 0.2ml
61791 Anti-MMP-24 基質(zhì)金屬蛋白酶-24抗體 0.2ml
61792 Anti-MMP-26 基質(zhì)金屬蛋白酶-26抗體 0.2ml
61793 Anti-MMP-10 基質(zhì)金屬蛋白酶-10抗體 0.2ml
61794 Anti-MMP-11 基質(zhì)金屬蛋白酶-11抗體 0.2ml
61795 Anti-MMP-12 基質(zhì)金屬蛋白酶-12抗體 0.1ml
61796 Anti-Beta-2-MG β2微球蛋白抗體(單抗) 0.1ml
61797 Anti-MOG 髓鞘少樹突膠質(zhì)細胞糖蛋白抗體 0.2ml
61798 Anti-Moesin 膜突蛋白抗體 0.2ml
61799 Anti-Mouse IgA IgA抗體 0.2ml
61800 Anti-MRAS/Mras 原癌基因M-ras抗體 0.1ml
61801 Anti-Mre11/HNGS1 DNA損傷關(guān)鍵蛋白Mre11抗體 0.2ml
61802 Anti-Phospho-Mre11 (Ser676) 磷酸化DNA損傷關(guān)鍵蛋白Mre11抗體 0.1ml
61803 Anti-MPO 髓過氧化物酶抗體 0.2ml
61804 Anti-MR(Mineralocorticoid receptor) 鹽皮質(zhì)激素受體抗體 0.2ml
61805 Anti-MRP1 多藥耐藥相關(guān)蛋白1抗體 0.1ml
61806 Anti-MRP2 多藥耐藥相關(guān)蛋白2抗體 0.1ml
61807 Anti-MRP3 多藥耐藥相關(guān)蛋白3抗體 0.1ml
61808 Anti-MRP4/ABCC4 多藥耐藥相關(guān)蛋白4抗體 0.1ml
61809 Anti-MRP5/ABCC5 多藥耐藥相關(guān)蛋白5抗體 0.1ml
61810 Anti-MrpL28 線粒體核糖體蛋白L28抗體 0.1ml
61811 Anti-Alpha-MSH/POMC 促黑細胞激素α抗體 0.1ml
61812 Anti-MSH-2 錯配修復(fù)蛋白2抗體 0.1ml
61813 Anti-MSK1 有絲分裂原和應(yīng)激活化型蛋白激酶1抗體 0.2ml
61814 Anti-Phospho-MSK1 (Ser360) 磷酸化有絲分裂原和應(yīng)激活化型蛋白激酶1抗體 0.1ml
61815 Anti-Phospho-MSK1 (Ser212) 磷酸化有絲分裂原和應(yīng)激活化型蛋白激酶1抗體 0.1ml
61816 Anti-Phospho-MSK1 (Ser376) 磷酸化有絲分裂原和應(yīng)激活化型蛋白激酶1抗體 0.1ml
61817 Anti-Phospho-MSK1 (Thr581) 磷酸化有絲分裂原和應(yīng)激活化型蛋白激酶1抗體 0.1ml
61818 Anti-MST1 蛋白激酶MST抗體 0.2ml
61819 Anti-Phospho-Mst1 (Thr183)/Mst2 (Thr180) 磷酸化蛋白激酶MST抗體 0.1ml
61820 Anti-MLH1/hMLH 1 錯配修復(fù)蛋白1抗體 0.1ml
61821 Anti-Mesothelin 人剛地弓形蟲(T.gondii)ELISA試劑盒間皮素抗體 0.1ml
61822 Anti-MUC5AC/Mucin 5AC 胃粘液素抗體 0.1ml
61823 Anti-MTF-1 金屬反應(yīng)轉(zhuǎn)錄因子-1抗體 0.2ml
61824 Anti-MTHFR 亞甲基四氫*還原酶MTHFR抗體 0.2ml
61825 Anti-MTNR1A/MTR-1A 褪黑素受體1A/松果體素受體1A抗體 0.2ml
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人剛地弓形蟲(T.gondii)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴謹?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標本,才能保證檢測質(zhì)量?,F(xiàn)在國內(nèi)已有相當數(shù)量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現(xiàn)ELISA標準化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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