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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時(shí)間:2017-02-14 20:29:56瀏覽次數(shù):219次
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人流行性腮腺炎(EP)ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人流行性腮腺炎(EP)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測(cè)定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照;與陰性對(duì)照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
我們將在人流行性腮腺炎(EP)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
61422 Anti-IL-5 白細(xì)胞介素5抗體 0.2ml
61423 Anti-IL5RA/CD125 白介素-5受體α鏈抗體 0.1ml
61424 Anti-IL-6 白介素6(人) 0.1ml
61425 Anti-IL-6 白介素6抗體(大、小鼠) 0.1ml
61426 Anti-IL-6 白介素6抗體 0.1ml
61427 Anti-IL-7 白介素7抗體 0.1ml
61428 Anti-IL-6R Alpha 白細(xì)胞介素6受體α抗體 0.2ml
61429 Anti-IL-6R Beta/CD130/gp130 白細(xì)胞介素6受體β抗體 0.2ml
61430 Anti-IL-8/CXCL8 白介素8抗體 0.1ml
61431 Anti-IL-8/CXCL8 (mouse, rat) 白介素8抗體 (小鼠,大鼠) 0.1ml
61432 Anti-IL-7Ra/CD127 白細(xì)胞介素-7受體a抗體 0.2ml
61433 Anti-Mitofilin/IMMT 線粒體內(nèi)膜蛋白抗體 0.2ml
61434 Anti-ILK-1 整合素連接激酶-1抗體 0.2ml
61435 Anti-ILTV 雞傳染性喉氣管炎病毒抗體 0.2ml
61436 Anti-ING1/p33 生長抑制因子基因1抗體 0.1ml
61437 Anti-IMP3 胰島素樣生長因子ⅡmRNA結(jié)合蛋白3抗體 0.2ml
61438 Anti-Inhibin Alpha 抑制素α抗體 0.2ml
61439 Anti-Inhibin beta A 抑制素βA抗體 0.2ml
61440 Anti-Inhibin beta B 抑制素βB抗體 0.2ml
61441 Anti-Inhibin Beta C 抑制素βC抗體 0.2ml
61442 Anti-Insulin 胰島素抗體 0.1ml
61443 Anti-Insulin (pig) 胰島素抗體 (豬) 0.1ml
61444 Anti-rInsulin 抗*抗體 0.1ml
61445 Anti-rInsulin monoclonal (pig) 抗胰島素單克隆抗體(豬) 0.1ml
61446 Anti-rInsulin human monoclonal *單克隆抗體 0.1ml
61447 Anti-Insulin Receptor 胰島素受體抗體 0.1ml
61448 Anti-Insulin Receptor alpha 胰島素受體α抗體 0.1ml
61449 Anti-Insulin Receptor Alpha 胰島素受體α抗體 0.1ml
61450 Anti-Insulin Receptor Beta 胰島素受體β抗體 0.2ml
61451 Anti-Phospho-Insulin Receptor Beta(Tyr1345) 磷酸化胰島素受體β抗體 0.1ml
61452 Anti-Phospho-Insulin Receptor Beta (Tyr1361) 磷酸化胰島素受體β抗體 0.1ml
61453 Anti-Insulin 胰島素蛋白抗體 0.1ml
61454 Anti-Integrin alpha 3/CD49c 整合素α3抗體 0.1ml
61455 Anti-Integrin Alpha 3 + Beta 1 整合素α3β1抗體 0.2ml
61456 Anti-Integrin beta 5 整合素β5抗體 0.1ml
61457 Anti-Integrin alpha 1/CD49a 整合素α1抗體 0.1ml
61458 Anti-Integrin beta 7 整合素β7抗體 0.1ml
61459 Anti-Integrin Alpha V + Beta1 整合素αVβ1抗體 0.2ml
61460 Anti-Integrin Alpha V + Beta 3 整合素αVβ3抗體 0.2ml
61461 Anti-Integrin Alpha V + Beta 5 整合素αVβ5抗體 0.2ml
61462 Anti-Integrin alpha E/CD103 整合素αE抗體 0.2ml
61463 Anti-IQGAP1 支架蛋白抗體 0.2ml
61464 Anti-IRF-1 干擾素調(diào)節(jié)因子1抗體 0.2ml
61465 Anti-IRAK 白介素-1受體相關(guān)激酶1/2抗體 0.2ml
61466 Anti-Phospho-IRAK1 (Ser376) 磷酸化白介素-1受體相關(guān)激酶1抗體 0.1ml
61467 Anti-Phospho-IRAK1 (Thr209) 磷酸化白介素-1受體相關(guān)激酶1抗體 0.1ml
61468 Anti-Phospho-IRAK1 (Thr387) 磷酸化白介素-1受體相關(guān)激酶1抗體 0.1ml
61469 Anti-IRF3 干擾素調(diào)節(jié)因子3 0.2ml
61470 Anti-Phospho-IRF3 (Ser396) 磷酸化干擾素調(diào)節(jié)因子3 0.1ml
61471 Anti-IRAK4 白介素-1受體相關(guān)激酶4抗體 0.2ml
61472 Anti-IL-1RA 白介素-1受體拮抗劑抗體 0.2ml
61473 Anti-IL-1R1 白介素1受體1抗體 0.1ml
61474 Anti-IL-1R II 白介素1受體Ⅱ抗體 0.2ml
61475 Anti-IRF4 干擾素調(diào)節(jié)因子4抗體 0.2ml
61476 Anti-ILT2/CD85j 細(xì)胞表面免疫球蛋白樣轉(zhuǎn)錄因子2抗體 0.2ml
61477 Anti-IRF7 干擾素調(diào)節(jié)因子7抗體 0.2ml
61478 Anti-Phospho-IRF7 (Ser471/472) 磷酸化干擾素調(diào)節(jié)因子7抗體 0.1ml
61479 Anti-IRS P53 胰島素受體底物p53蛋白抗體 0.1ml
61480 Anti-IRS1 胰島素受體底物-1抗體人流行性腮腺炎(EP)ELISA試劑盒 0.2ml
61481 Anti-phospho-IRS1(Ser307) 磷酸化胰島素受體底物-1抗體 0.1ml
61482 Anti-phospho-IRS1(Ser1101) 磷酸化胰島素受體底物-1抗體 0.1ml
61483 Anti-phospho-IRS1(Ser302) 磷酸化胰島素受體底物-1抗體 0.1ml
61484 Anti-phospho-IRS1(Ser332/336) 磷酸化胰島素受體底物-1抗體 0.1ml
61485 Anti-phospho-IRS1(Ser612) 磷酸化胰島素受體底物-1抗體 0.1ml
61486 Anti-phospho-IRS1(Ser636/639) 磷酸化胰島素受體底物-1抗體 0.1ml
61487 Anti-phospho-IRS1(Ser789) 磷酸化胰島素受體底物-1抗體 0.1ml
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測(cè),可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時(shí),請(qǐng)分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時(shí)間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5人流行性腮腺炎(EP)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化,有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng),以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本,才能保證檢測(cè)質(zhì)量?,F(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀,這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。
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