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上海紀寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時間:2017-01-11 12:06:08瀏覽次數(shù):153次
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人腺相關病毒(AAV)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯(lián)免疫實驗得到了廣泛的應用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。
人腺相關病毒(AAV)ELISA試劑盒實驗ELISA結果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結果根據(jù)標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人腺相關病毒(AAV)ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗質量。
61136 Anti-KCNH1/EAG1 鉀離子通道蛋白EAG1抗體 0.2ml
61137 Anti-HERG/KCNH2/ERG 特異性鉀離子通道蛋白抗體 0.2ml
61138 Anti-HAVCR1/TIM1 甲型肝炎病毒細胞受體1 0.2ml
61139 Anti-HA tag HA tag標簽抗體 0.1ml
61140 Anti-HA tag HA tag標簽抗體 0.1ml
61141 Anti-HA tag HA tag標簽單克隆抗體 0.1ml
61142 Anti-HAI-1 肝細胞生長因子激活物抑制劑抗體 0.2ml
61143 Anti-HBsAg 人乙肝表面抗原抗體(包被) 0.1ml
61144 Anti-HBA1/Alpha globin 血紅蛋白α1抗體 0.2ml
61145 Anti-hHb 人血紅蛋白單克隆抗體 0.2ml
61146 Anti-HBsAg 人乙肝表面抗原抗體 0.1ml
61147 Anti-HBsAg 人乙型肝炎表面抗原單克隆抗體(檢測) 0.1ml
61148 Anti-HBcAg 人乙型肝炎核心抗原單克隆抗體 0.1ml
61149 Anti-HBeAg(1) 人乙肝e抗原抗體(1) 0.1ml
61150 Anti-HBeAg(2) 人乙型肝炎e抗原單克隆抗體(2) 0.1ml
61151 Anti-VWCE VWCE抗體 0.2ml
61152 Anti-VWCE VWCE抗體 0.2ml
61153 Anti-HB-EGF/DTSF 肝素結合性表皮生長因子抗體 0.1ml
61154 Anti-URG4 上調(diào)基因4抗體(N端) 0.2ml
61155 Anti-URG4 (C terminal) 上調(diào)基因4抗體(C端) 0.2ml
61156 Anti-HBV pre S1/S2 protein 人乙肝病毒pre S1/S2抗體 0.1ml
61157 Anti-HCG Beta 人絨毛膜*β亞基單抗 0.1ml
61158 Anti-BRI3BP/HCCR-1 宮頸癌基因/bri3結合蛋白抗體 0.2ml
61159 Anti-HCG alpha 人絨毛膜*α 亞基單抗 0.1ml
61160 Anti-Beta-HCG 人β亞基人絨毛膜*抗體 0.1ml
61161 Anti-HCG Alpha 人絨毛膜*α亞基抗體 0.1ml
61162 Anti-Hck 造血細胞激酶抗體 0.2ml
61163 Anti-HCFHrp/BTA 膀胱腫瘤抗原抗體 0.2ml
61164 Anti-HCN4 環(huán)化核苷酸調(diào)控陽離子通道蛋白亞型4 0.2ml
61165 Anti-HCV-Core 丙型肝炎病毒-C區(qū)抗體 0.1ml
61166 Anti-ACY 3/HCV-HCBP1 丙型肝炎病毒核結合蛋白-1抗體 0.2ml
61167 Anti-HCV-NS1 丙型肝炎病毒-NS1抗體 0.1ml
61168 Anti-HCV-NS3 丙型肝炎病毒-NS3抗體 0.1ml
61169 Anti-HCV-NS4a 丙型肝炎病毒-NS4a抗體 0.1ml
61170 Anti-CD36L1/SRB1 高密度脂蛋白受體/清道夫受體抗體 0.2ml
61171 Anti-Heamachrome 血紅素抗體 0.2ml
61172 Anti-HER2/c-erbB2 HER2受體抗體 0.2ml
61173 Anti-HER2 receptor HER2受體抗體 0.2ml
61174 Anti-HER2 receptor(NT) HER2受體抗體 0.2ml
61175 Anti-HER2 receptor(NT) HER2受體抗體(N端) 0.2ml
61176 Anti-Phospho-HER2(Tyr1221/1222) 磷酸化HER2受體抗體 0.1ml
61177 Anti-Phospho-HER2(Tyr1112) 磷酸化HER2受體抗體 0.1ml
61178 Anti-Phospho-HER2(Tyr1248) 磷酸化HER2受體抗體 0.1ml
61179 Anti-Phospho-HER2 (Tyr877) 磷酸化HER2受體抗體 0.1ml
61180 Anti-HER3/ErbB3 HER3受體抗體 0.2ml
61181 Anti-Phospho-HER3 (Tyr1197) 磷酸化HER3受體抗體 0.1ml
61182 Anti-Phospho-HER3 (Tyr1222) 磷酸化HER3受體抗體 0.1ml
61183 Anti-Phospho-HER3 (Tyr1289) 磷酸化HER3受體抗體 0.1ml
61184 Anti-Hepatitis E Virus ORF3 戊型肝炎病毒抗體 0.1ml
61185 Anti-HGF 肝細胞生長因子抗體 0.1ml
61186 Anti-Polyprotein (Hepatitis G Virus) 庚型肝炎病毒多聚蛋白抗體 0.1ml
61187 Anti-ZEBRA 人腺相關病毒(AAV)ELISA試劑盒人類皰疹病毒4抗體 0.2ml
61188 Anti-membrane glycoprotein E(VZV) 人水痘帶狀皰疹病毒gE蛋白抗體 0.2ml
61189 Anti-HHV8/ORF K2 類皰疹病毒8抗體 0.2ml
61190 Anti-HHV8/ORF50 人類皰疹病毒8抗體 0.2ml
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質量優(yōu)良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人腺相關病毒(AAV)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質量。
在實際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內(nèi)質控、室間質評,以嚴謹?shù)墓ぷ髯黠L檢測每一份標本,才能保證檢測質量?,F(xiàn)在國內(nèi)已有相當數(shù)量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現(xiàn)ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
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