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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時(shí)間:2017-02-22 18:12:28瀏覽次數(shù):110次
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人抗單鏈DNA抗體/變性DNA抗體(ssDNA)ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人抗單鏈DNA抗體/變性DNA抗體(ssDNA)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測(cè)定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽(yáng)性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照;與陰性對(duì)照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2~3SD,作為陽(yáng)性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽(yáng)性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽(yáng)性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
我們將在人抗單鏈DNA抗體/變性DNA抗體(ssDNA)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問(wèn)題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶(hù)帶來(lái)一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
59960 Anti-Annexin VI 膜粘連蛋白 VI抗體 0.2ml
59961 Anti-Annexin V 重組膜粘連蛋白-5(人)抗體 0.1ml
59962 Anti-Anthrax 炭疽桿菌抗體 0.2ml
59963 Anti-Anthrax 炭疽菌抗體(采用活疫苗制備) 0.2ml
59964 Anti-alpha Adaptin 銜接蛋白α抗體 0.2ml
59965 Anti-beta Adaptin/AP2 銜接蛋白β抗體 0.2ml
59966 Anti-Gamma-Adaptin 銜接蛋白γ抗體 0.2ml
59967 Anti-Apaf-1(CT) 凋亡蛋白活性因子-1抗體(C端) 0.1ml
59968 Anti-Apaf-1(NT) 凋亡蛋白活性因子-1抗體(N端) 0.1ml
59969 Anti-Activated protein C 活化蛋白C抗體 0.1ml
59970 Anti-Apelin 脂肪炎癥因子Apelin抗體 0.2ml
59971 Anti-Apelin receptor Apelin receptor抗體 0.2ml
59972 Anti-APC/Adenomatous Polyposis Coli 腺瘤樣息肉抗體 0.1ml
59973 Anti-APEX1 多功能DNA修復(fù)酶抗體 0.1ml
59974 Anti-ATH III *Ⅲ抗體 0.2ml
59975 Anti-APG4B/AUTL1 細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白4B抗體 0.2ml
59976 Anti-APNG/MPG N-甲基嘌呤DNA糖基化酶 0.2ml
59977 Anti-APOD 載脂蛋白D抗體 0.2ml
59978 Anti-APOH 載脂蛋白H抗體 0.2ml
59979 Anti-APOE 載脂蛋白E抗體 0.2ml
59980 Anti-APOJ 載脂蛋白J抗體 0.2ml
59981 Anti-Apollon/BIRC6 Apollon凋亡抑制蛋白抗體 0.2ml
59982 Anti-APP/ABPP 淀粉樣肽前體蛋白抗體 0.1ml
59983 Anti-APP/ABPP APP/ABPP淀粉樣肽前體蛋白抗體 0.1ml
59984 Anti-phospho-APP/ABPP(Tyr757) 磷酸化APP(Tyr757)淀粉樣肽前體蛋白抗體 0.1ml
59985 Anti-phospho-APP/ABPP(Thr668) 磷酸化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體 0.1ml
59986 Anti-APPL1 APPL1抗體 0.2ml
59987 anti-AQP1 水通道蛋白1抗體 0.1ml
59988 Anti-AQP2 水通道蛋白-2抗體 0.1ml
59989 Anti-AQP3 水通道蛋白-3抗體 0.1ml
59990 Anti-AQP4 水通道蛋白-4抗體 0.1ml
59991 Anti-AQP5 水通道蛋白-5抗體 0.1ml
59992 Anti-AQP7 水通道蛋白-7抗體 0.2ml
59993 Anti-AQP9 水通道蛋白-9抗體 0.2ml
59994 Anti-AR 雄激素受體抗體 0.1ml
59995 Anti-phospho-Androgen Receptor (Ser580) 磷酸化雄激素受體抗體 0.1ml
59996 Anti-phospho-Androgen Receptor (Ser595) 磷酸化雄激素受體抗體 0.1ml
59997 Anti-ARHI ARHI蛋白抗體 0.2ml
59998 Anti-AKR1B1 醛糖還原酶抗體 0.2ml
59999 Anti-ARC ARC抗體 0.2ml
60000 Anti-ARF6 ADP核糖基化因子6抗體 0.2ml
60001 Anti-Arfaptin 1 ADP核糖基化因子結(jié)合蛋白1抗體 0.2ml
60002 Anti-Arfaptin 2 ADP核糖基化因子結(jié)合蛋白2抗體 0.2ml
60003 Anti-phospho-arfaptin 2(Ser260) 磷酸化ADP核糖基化因子結(jié)合蛋白2抗體 0.1ml
60004 Anti-phospho-Arhgef2(Ser810) 磷酸化Rho鳥(niǎo)苷酸交換因子2抗體 0.1ml
60005 Anti-Aromatase 芳香化酶抗體 0.1ml
60006 Anti-Aromatase 芳香化酶/細(xì)胞色素P450/雌激素合成酶抗體 0.1ml
60007 Anti-COX-2 *氧化酶抗體 0.2ml
60008 Anti-COX7A2 *氧化酶COX7A2抗體 0.2ml
60009 Anti-ARIP2a 人抗單鏈DNA抗體/變性DNA抗體(ssDNA)ELISA試劑盒激活素受體2A抗體 0.2ml
60010 Anti-Beta-arrestin 1 β-抑制蛋白1抗體 0.2ml
60011 Anti-Phospho-beta-Arrestin 1(Ser412) 磷酸化β抑制蛋白1抗體 0.1ml
60012 Anti-Beta-arrestin 2 β-抑制蛋白2抗體 0.2ml
60013 Anti-ARIP2B 激活素受體2B抗體 0.2ml
60014 Anti-Artemin Artemin抗體 0.2ml
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑,嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測(cè),可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時(shí),請(qǐng)分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng),導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周?chē)?,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿(mǎn)各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無(wú)或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5人抗單鏈DNA抗體/變性DNA抗體(ssDNA)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或使用過(guò)期顯色劑;
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過(guò)期顯色劑,肉眼可見(jiàn)淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽(yáng)性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過(guò)程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化,有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng),以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本,才能保證檢測(cè)質(zhì)量。現(xiàn)在國(guó)內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀,這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。
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