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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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人髓過氧化物酶特異性抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體IgG(MPO-ANCA IgG)ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對試驗(yàn)的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人髓過氧化物酶特異性抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體IgG(MPO-ANCA IgG)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測物的含量。
我們將在人髓過氧化物酶特異性抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體IgG(MPO-ANCA IgG)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
59794 Anti-GAPDH(3E12) 3-磷酸甘油醛脫氫酶單克隆抗體(內(nèi)參抗體) 0.1ml
59795 Anti-GAPDH 兔抗3-磷酸甘油醛脫氫酶單克隆抗體(內(nèi)參抗體) 0.1ml
59796 Anti-Beta-Actin β-肌動蛋白抗體(內(nèi)參抗體) 0.1ml
59797 anti-14-3-3 14-3-3蛋白抗體 0.1ml
59798 Anti-phospho-14-3-3 (Ser58) 磷酸化14-3-3 α/β/ζ抗體 0.1ml
59799 Anti-14-3-3 family protein 蘋果14-3-3蛋白抗體(植物) 1ml
59800 Anti-2,4-D 2,4-二氯苯氧乙酸(除草劑)抗體 0.2ml
59801 Anti-2,4-D 2,4-二氯苯氧乙酸(除草劑)單克隆抗體 0.1ml
59802 Anti-4EBP1 eIF4E結(jié)合蛋白抗體 0.2ml
59803 Anti-phospho-4EBP1(Ser64) 磷酸化4E結(jié)合蛋白1抗體 0.1ml
59804 Anti-phospho-4EBP1(Thr37/46) 磷酸化4E結(jié)合蛋白1抗體 0.1ml
59805 Anti-phospho-4EBP1 (Ser65/Thr70) 磷酸化eIF4E結(jié)合蛋白抗體 0.1ml
59806 Anti-5-HT 5-羥色胺抗體 0.1ml
59807 Anti-5-HTR1A 5-羥色胺受體1A抗體 0.2ml
59808 Anti-5-HTR1B 5-羥色胺受體1B抗體 0.2ml
59809 Anti-5-HTR2B 5-羥色胺受體2B抗體 0.2ml
59810 Anti-5-HTR2A 5-羥色胺受體2A抗體 0.2ml
59811 Anti-5-HTT 5-羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗體 0.2ml
59812 Anti-5-HTR3 5-羥色胺受體3抗體 0.2ml
59813 Anti-5-HTR4 5-羥色胺受體4抗體 0.2ml
59814 Anti-5-LOX 5-脂氧合酶抗體 0.2ml
59815 Anti-Phospho-5-Lipoxygenase (Ser271) 磷酸化5-脂氧合酶抗體 0.1ml
59816 Anti-Phospho-5-Lipoxygenase (Ser663) 磷酸化5-脂氧合酶抗體 0.1ml
59817 Anti-8-OHdG 8-羥基脫氧鳥苷抗體 0.2ml
59818 Anti-A2AR 腺苷A2A受體抗體 0.2ml
59819 Anti-AACT-Alpha1 α-1抗胰*抗體 0.1ml
59820 Anti-AAK1 AP2關(guān)聯(lián)激酶1抗體 0.2ml
59821 Anti-AARS2 丙氨酰tRNA合成酶2抗體 0.2ml
59822 Anti-AAT α-1抗*抗體 0.1ml
59823 Anti-AATK AATK細(xì)胞凋亡關(guān)聯(lián)*激酶抗體 0.2ml
59824 Anti-AATF 拮抗凋亡轉(zhuǎn)錄因子抗體 0.2ml
59825 Anti-ABCA1 腺苷三磷酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1抗體 0.1ml
59826 Anti-ABCD1/CCL22 嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白22抗體 0.2ml
59827 Anti-ABCB5 ATP結(jié)合蛋白家族5抗體 0.2ml
59828 Anti-ABCB6 ATP結(jié)合蛋白家族6抗體 0.2ml
59829 Anti-ABCF1 ATP結(jié)合盒蛋白家族GCN20F家族1抗體 0.2ml
59830 Anti-ABCG1 三磷酸腺苷結(jié)合盒亞家族G1抗體 0.2ml
59831 Anti-ABCG2 三磷酸腺苷結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白G超家族成員2抗體 0.1ml
59832 Anti-ABCG4 ABC膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗體 0.2ml
59833 Anti-c-Abl 非受體*激酶c-Abl抗體 0.1ml
59834 Anti-phospho-c-Abl(Tyr412) 磷酸化非受體*激酶c-Abl抗體 0.1ml
59835 Anti-phospho-c-Abl(Tyr245) 磷酸化非受體*激酶c-Abl抗體 0.1ml
59836 Anti-phospho-c-Abl(Tyr204) 磷酸化非受體*激酶c-Abl抗體 0.1ml
59837 Anti-phospho-c-Abl(Thr735) 磷酸化非受體*激酶c-Abl抗體 0.1ml
59838 Anti-phospho-c-Abl(Tyr89) 磷酸化非受體*激酶c-Abl抗體 0.1ml
59839 Anti-ABL2 ABL2蛋白抗體 0.2ml
59840 Anti-ABI1 ABI1/SSH3BP1蛋白抗體 0.2ml
59841 Anti-ABP 雄激素結(jié)合蛋白抗體 0.2ml
59842 Anti-Adenylyl cyclase/AC 腺苷酸環(huán)化酶抗體 0.1ml
59843 Anti-ACE1 血管緊張素轉(zhuǎn)換酶ACE1抗體 0.1ml
59844 Anti-ACA11 人髓過氧化物酶特異性抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體IgG(MPO-ANCA IgG)ELISA試劑盒 擬南芥ACA11抗體 1ml
59845 Anti-AHA3 AHA3抗體(擬南芥) 1ml
59846 Anti-ACE2 ACE2抗體 0.1ml
59847 Anti-ACEI 血管緊張素1轉(zhuǎn)換酶抑制劑抗體 0.1ml
59848 Anti-Acetyl CoA Carboxylase 乙酰*羧化酶抗體 0.2ml
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時(shí),請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時(shí)間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機(jī)。
5人髓過氧化物酶特異性抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體IgG(MPO-ANCA IgG)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本,才能保證檢測質(zhì)量?,F(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標(biāo)儀,這對于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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