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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時間:2017-02-23 10:33:25瀏覽次數(shù):237次
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人抗中性粒細(xì)胞核周抗體(pANCA)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯(lián)免疫實驗得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人抗中性粒細(xì)胞核周抗體(pANCA)ELISA試劑盒實驗ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人抗中性粒細(xì)胞核周抗體(pANCA)ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗質(zhì)量。
59314 黃杞苷 Aesculetin ≥98%
59315 * Fibrauretin ≥98%
59316 黃楊酮堿 Buxtamine ≥98%
59317 茴芹內(nèi)酯 Pimpinellin ≥98%
59318 甲殼素 Chitin ≥98%
59319 假荊芥屬苷 Nepetin-7-glucoside ≥97%
59320 絞股藍(lán)A Fiveleaf Gynostemma Herb ≥98%
59321 京尼平苷 Geniposide ≥98%
59322 酒石酸長春質(zhì)堿 Catharanthine Tartrat ≥98%
59323 桔皮素 Tangeretin ≥98%
59324 開環(huán)異落葉松樹脂酚 Secoisolariciresinol ≥98%
59325 開環(huán)異落葉松樹脂酚二葡萄糖苷 Secoisolariciresinol diglucoside ≥98%
59326 柯諾辛 Corynoxine ≥94%
59327 苦* Picropodophyllotoxin ≥98%
59328 奎寧 Quinine ≥95%
59329 萊鮑迪苷 Rebaudioside-A 98%
59330 櫟櫻酸 Roburic acid ≥98%
59331 連翹脂苷 Forsythiaside ≥95%
59332 連翹脂素 Forsythiaside ≥97%
59333 氯化木蘭花堿 Magnoflorine chloride ≥98%
59334 羅漢果甜苷V Mogroside V ≥98%
59335 羅漢果甜苷VI Mogroside VI ≥98%
59336 羅漢果皂苷IV Mogroside IV ≥98%
59337 洛塞琳 Rosarin ≥95%
59338 洛塞維 Rosavin ≥95%
59339 洛緦 Rosin ≥95%
59340 落新婦苷 Astilbin ≥98%
59341 麻醉椒苦素 Methysticin ≥99%
59342 馬兜鈴內(nèi)酰胺 Aristololactam ≥98%
59343 馬兜鈴酸B Aristolochic acid B ≥98%
59344 麥冬皂苷B Ophiopogonin B ≥97%
59345 麥冬皂苷D Ophiopogonin D ≥97%
59346 芒柄花素-7-O-β-D-葡萄糖苷 Fomononetin-7-O-glucoside ≥95%
59347 芒柄花素-7-O-葡萄糖苷 Formononetin-7-O-β-D-glucoside ≥98%
59348 類葉升麻苷 Verbascoside ≥98%
59349 麥角甾苷 Verbascoside ≥98%
59350 毛蕊異黃酮-7-O-β-D葡萄糖苷 calycosin-7-O-β-D-glucoside 97%
59351 * Mycophenolate mofetil ≥98%
59352 棉籽糖 Raffinose ≥98%
59353 棉子糖 Raffinose ≥98%
59354 莫諾苷 Morroniside 97%
59355 莫諾忍冬苷 Morroniside 97%
59356 擬人參皂苷-RT5 Pseudoginsenoside-RT5 ≥98%
59357 鳥苷 GUANOSINE ≥98%
59358 * Allantoin ≥98%
59359 檸檬酸 Citric acid monohydrate ≥98%
59360 牛蒡子苷元 Arctigenin ≥98%
59361 ?;切廴パ跄懰?Aesculetin ≥98%
59362 牛七堿 Szechenyine ≥98%
59363 派利文堿 Perivine ≥98%
59364 七葉苷 Esculin ≥98%
59365 漆黃素 Fisetin ≥98%
59366 羥基酪醇 Hydroxytyrosol ≥97%
59367 羥基吳茱萸堿 Hydroxyevodiamine ≥98%
59368 茄尼醇 Solanesol 98%
59369 芹菜苷元 Apigenin ≥98%
59370 芹黃素 Apigenin ≥98%
59371 秦艽甲素 Gentiannine ≥95%
59372 秦皮苷 人抗中性粒細(xì)胞核周抗體(pANCA)ELISA試劑盒 Fraxin ≥98%
59373 秦皮乙素 Aesculetin ≥98%
59374 青陽參苷元 Qingyangshengenin ≥98%
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機(jī)洗板時,洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機(jī)。
5人抗中性粒細(xì)胞核周抗體(pANCA)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本,才能保證檢測質(zhì)量。現(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標(biāo)儀,這對于實現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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