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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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人抗IgE受體抗體ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對試驗(yàn)的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人抗IgE受體抗體ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測物的含量。
我們將在人抗IgE受體抗體ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
58512 *測定培養(yǎng)基 Vitamin PP Assay Broth 250 用于嬰兒食品和乳粉中*和*測定
58513 *測定培養(yǎng)基 Folic Acid Assay Medium 250 用于嬰兒食品和乳粉中*測定
58514 泛酸測定培養(yǎng)基 Pantothenic Acid Assay Medium 250 用于嬰兒食品和乳粉中泛酸測定
58515 游離*測定培養(yǎng)基 Free Biotin Assay Medium 250 用于嬰兒食品和乳粉中游離*測定
58516 氣單胞菌培養(yǎng)基基礎(chǔ) Aeromonas Medium Base(Ryan) 250 用于氣單胞菌分離培養(yǎng)
58517 醋酸鹽鑒別瓊脂 ACETATE 250
58518 氣單胞菌培養(yǎng)基添加劑 Ampicillin Selective Supplement 10支 每支添加劑加入100ml氣單胞菌培養(yǎng)基基礎(chǔ)
58519 支原體培養(yǎng)基基礎(chǔ) Mycoplasma Broth Base 250 用于培養(yǎng)支原體的基礎(chǔ)培養(yǎng)基
58520 胰蛋白胨大豆瓊脂 Tryptose Soya Agar 250 一種通用培養(yǎng)基,用于各種微生物的培養(yǎng)(AOAC EP IDF NMKL USDA USP)
58521 布氏菌選擇性培養(yǎng)基 Brucella Selective Medium 250 用于布氏菌的選擇性分離培養(yǎng)
58522 改良rv培養(yǎng)基 Rv 250
58523 類桿菌-膽汁-七葉甙(BBE)瓊脂 BBE Agar 250 用于脆弱擬桿菌群的分離培養(yǎng)
58524 BCYE 瓊脂(Legionella 瓊脂) BCYE Agar(Legionella Agar) 250 用于軍團(tuán)菌的選擇性分離培養(yǎng)(OXOID方法)
58525 發(fā)酵蛋白胨 250
58526 BIGGY 瓊脂 BIGGY Agar(Nickerson Medium) 250 用于念球菌的分離培養(yǎng)和計(jì)數(shù)(OXOID方法)
58527 C.L.E.D 培養(yǎng)基 C.L.E.D Medium 250 用于尿液中微生物的選擇性分離培養(yǎng)(OXOID方法)
58528 C.L.E.D 培養(yǎng)基添加劑 C.L.E.D Medium Supplement 1ml*5支 每支加入100ml C.L.E.D 培養(yǎng)基中
58529 GC瓊脂 GC Agar 250 用于淋球菌的分離培養(yǎng)(OXOID方法)
58530 BLB培養(yǎng)基 BLB Medium 250 用于雙歧桿菌的分離培養(yǎng)
58531 PEA 瓊脂 PEA Agar 250g 用于從含革蘭氏陰性菌的標(biāo)本中分離培養(yǎng)革蘭氏陽性菌
58532 艾格瓊脂 Eugonic Agar 250 用于生產(chǎn)過程中無菌監(jiān)測(Acumedia方法)
58533 NTM 培養(yǎng)基 NTM Medium 250 用于淋球菌的分離培養(yǎng)(Quelab方法)
58534 TM培養(yǎng)基 Thayer Martin Agar 250 用于淋球菌的分離培養(yǎng)(Quelab方法)
58535 YNB 培養(yǎng)基 YNB Medium 100 用于基因工程中酵母菌的發(fā)酵培養(yǎng)
58536 胰蛋白胨 Tryptone 250 培養(yǎng)基原材料,提供細(xì)菌生長氮源,含*
58537 酪蛋白胨 Peptone from Casein 250 干酪素*水解而成,培養(yǎng)基原材料
58538 牛肉浸粉 Beef Extract Powder 250 培養(yǎng)基原材料,提供細(xì)菌生長所需的生長因子
58539 酵母浸粉 Yeast Extract Powder 250 培養(yǎng)基原材料,提供細(xì)菌生長所需的*族
58540 細(xì)菌瓊脂粉 Agar Bacteriological 250 培養(yǎng)基原材料,培養(yǎng)基凝固劑
58541 植物(大豆)蛋白胨 Peptone from Soybean Meal 200 培養(yǎng)基原材料,含碳水化合物,提供細(xì)菌生長氮源
58542 細(xì)菌蛋白胨 Peptone Bacteriological 250 培養(yǎng)基原材料,提供細(xì)菌生長所需的生長因子
58543 月示胨 Proteose peptone 250 培養(yǎng)基原材料,為營養(yǎng)要求高的細(xì)菌生長提供營養(yǎng)
58544 三號膽鹽 No. 3 Bile Salt 100 用于抑制革蘭氏陽性菌的生長
58545 牛心浸粉 Beef Heart Infusion 100 培養(yǎng)基原材料,提供豐富的營養(yǎng)成份
58546 肝浸粉 Liver Infusion 100 培養(yǎng)基原材料,為營養(yǎng)要求高的細(xì)菌提供生長營養(yǎng)成份
58547 小麥胚芽粉 Wheat gern powder BR 500克
58548 麥芽浸粉 Malt extract BR 250克
58549 麥芽浸汁 Malt extract BR 100克
58550 無脂肪奶粉 Nonfat-Dried Milk 蛋白組級 250克
58551 血清消化粉 Serum powder BR 250克
58552 全胃浸粉 全胃浸粉 BR 250克
58553 牛肝浸粉 Liver extract powder(Beef) BR 250克
58554 牛腦浸粉 Brain infusion powder BR 250克
58555 HAT混合鹽 HAT Media Supplement (50×) Hybri-Max™ γ射線滅菌 1vail
58556 10vail
58557 HT混合鹽 HT Media Supplement (50×) Hybri-Max™ γ射線滅菌 1vail
58558 10vail
58559 牛膽酸 Cholic acid BR,98% 25克
58560 100克
58561 500克
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時(shí),請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時(shí)間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機(jī)。
5顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本,才能保證檢測質(zhì)量?,F(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀,這對于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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