人抗肌內(nèi)膜抗體IgA(EMA IgA)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法：
1)目測(cè)定性法：加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后，肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照；與陰性對(duì)照的顏色接近者，判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2～3SD，作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P／N值(陽性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽性；P／N值小于2．1，但大于1．5為可疑；P／N小于1．5為陰性。
4)定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
我們將在人抗肌內(nèi)膜抗體IgA(EMA IgA)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給客戶帶來一些啟發(fā)，提高試驗(yàn)質(zhì)量。

58310 馬尿酸鈉培養(yǎng)基 100 用于彎曲桿菌的馬尿酸鈉水解試驗(yàn)（GB標(biāo)準(zhǔn)）
58311 快速硫化氫(H2S)試驗(yàn)瓊脂 250 用于彎曲桿菌的硫化氫試驗(yàn)（GB標(biāo)準(zhǔn)）
58312 波爾頓選擇性增菌肉湯 Bolton Selective Enrichment broth 250 用于彎曲桿菌選擇性增菌培養(yǎng)(Merck方法)
58313 CCDA基礎(chǔ) CCDA Base 250 用于彎曲桿菌分離培養(yǎng)(WHO方法)
58314 CCDA添加劑 CCDA Supplement 2ml*10支 每支添加于200mlCCDA基礎(chǔ)中
58315 Campy-Cefex 瓊脂基礎(chǔ) Campy-Cefex Agar Base 250 用于彎曲桿菌分離培養(yǎng)(FDA方法)
58316 Campy-Cefex 添加劑 Campy-Cefex Supplement 2ml*10 每支添加于200ml Campy-Cefex 瓊脂基礎(chǔ)中
58317 *卵黃多粘菌素瓊脂基礎(chǔ)（MYP）  Mannitol-Egg-Yolk-Polymyxin Agar Base 250 用于蠟樣芽孢桿菌的固體平板計(jì)數(shù)（GB.SN標(biāo)準(zhǔn)）
58318 胰酪胨大豆多粘菌素肉湯基礎(chǔ)   Trypticase-Soy-Polymyxin Broth Base 250 用于蠟樣芽孢桿菌的MPN值測(cè)定 (SN標(biāo)準(zhǔn))
58319 改良V-P培養(yǎng)基  V-P Medium,Modified 250 用于蠟樣芽孢桿菌的V-P試驗(yàn)(SN標(biāo)準(zhǔn))
58320 胰酪胨大豆羊血瓊脂基礎(chǔ)   Trypticase Soy Sheep Blood Agar Base 250 用于蠟樣芽孢桿菌的溶血測(cè)試驗(yàn)(SN標(biāo)準(zhǔn))
58321 酪蛋白瓊脂    Casein Agar 250 用于蠟樣芽孢桿菌的酪蛋白分解試驗(yàn)  (GB標(biāo)準(zhǔn))
58322 酚紅葡萄糖肉湯 Phenol Red Dextrose Broth 250 用于蠟樣芽孢桿菌葡萄糖分解試驗(yàn)(SN標(biāo)準(zhǔn))
58323 木糖-明膠培養(yǎng)基 250 用于蠟樣芽孢桿菌明膠液化試驗(yàn)
58324 臘樣芽胞桿菌選擇瓊脂基礎(chǔ) Bacilus Cereus Selective Agar Base 250 用于臘樣芽胞桿菌選擇性分離培養(yǎng)
58325 葡萄糖酪胨瓊脂 Dextrose Casein-peptone Agar 250 用于食品中臘樣芽胞桿菌鑒定和計(jì)數(shù)(APHA方法)
58326 D-環(huán)*     0.1g/支*2 加入250ml TSC瓊脂基礎(chǔ)中
58327 產(chǎn)芽孢肉湯    Sporulation Broth 250 用于產(chǎn)氣莢膜梭菌的產(chǎn)芽孢培養(yǎng)
58328 *   Polymyxin B 1.2mg/支*5 用1ml無菌水溶解后添加于100ml HB0256中
58329 多價(jià)蛋白胨-酵母膏 (PY) 培養(yǎng)基     Poly Peptone Yeast Extract Medium 250 用于產(chǎn)氣莢膜梭菌的培養(yǎng)(SN標(biāo)準(zhǔn))
58330 皰肉培養(yǎng)基基礎(chǔ)    Cooked Meat Medium Base 250 加入牛肉粒,用于肉毒梭菌及厭氧梭狀芽孢桿菌的檢驗(yàn)(GB標(biāo)準(zhǔn))
58331 皰肉牛肉粒    Dried Meat Particle 100 加入皰肉基礎(chǔ)中，配成皰肉培養(yǎng)基
58332 卵黃瓊脂培養(yǎng)基基礎(chǔ)     Egg Yolk Agar Base 250 用于肉毒梭菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌的分離培養(yǎng)（GB標(biāo)準(zhǔn)）
58333 含鐵牛奶培養(yǎng)基 250 用于產(chǎn)氣莢膜梭菌的牛奶發(fā)酵試驗(yàn)
58334 梭菌鑒別瓊脂(DCA) Differentia Clostridial Agar 250 用于干燥食品的計(jì)數(shù)和培養(yǎng)(MERCK方法)
58335 強(qiáng)化梭菌鑒別瓊脂(DRCA) Differentia Reinforced Clostridial Agar 250 用于食品和其它物質(zhì)中梭菌的計(jì)數(shù)和培養(yǎng)(MERCK方法)
58336 強(qiáng)化梭菌瓊脂 Reinforced Clostridium Agar 250 用于梭菌的分離培養(yǎng)(MERCK方法)
58337 強(qiáng)化梭菌培養(yǎng)基(RCM) Reinforced Clostridium Medium 250 用于梭菌的分離培養(yǎng)(Merck方法)
58338 TSN 瓊脂 TSN Agar 250 用于產(chǎn)氣莢膜梭菌的平板計(jì)數(shù)(Merck方法)
58339 TBB 培養(yǎng)基 Tyrobutyricum Broth Base 250 用于乳酪產(chǎn)品中梭菌的計(jì)數(shù)(Merck方法)
58340 CHO培養(yǎng)基基礎(chǔ) CHO Medium Base 250 用于厭氧菌的糖生化反應(yīng)(Acumedia 方法)
58341 SCHAEDLER 瓊脂 SCHAEDLER AGAR 250 用于厭氧菌的分離培養(yǎng)(Acumedia 方法)
58342 WILKINS-CHALGREN瓊脂 WILKINS-CHALGREN AGAR 250 用于厭氧菌的分離培養(yǎng)(Acumedia 方法)
58343 MCP瓊脂 MCP Agar 250 用于產(chǎn)氣莢膜梭菌的計(jì)數(shù)和培養(yǎng)(Acumedia 方法)
58344 厭氧菌瓊脂 Anaerobic Agar 250 用于厭氧菌分離培養(yǎng)
58345 CDC厭氧菌瓊脂 CDC Anaerobic Agar 250 用于厭氧菌分離培養(yǎng)(Acumedia 方法)
58346 葡萄糖肉浸液肉湯     Dextrose Meat Infusion Broth 250 用于溶血性鏈球菌的增菌培養(yǎng)（GB標(biāo)準(zhǔn)）
58347 匹克     匹克氏肉湯基礎(chǔ)A   Pick’s Broth BaseA 100 用于溶血性鏈球菌的增菌培養(yǎng) （GB標(biāo)準(zhǔn)）
58348 肉浸液肉湯培養(yǎng)基   Meat Infusion Broth 250 用于溶血性鏈球菌、蠟樣芽孢桿菌和*的增菌培養(yǎng)（GB標(biāo)準(zhǔn)）
58349 疊氮鈉葡萄糖肉湯   Azide Dextrose Broth 250 用于鏈球菌的增菌培養(yǎng)
58350 乙基紫疊氮鈉肉湯   Ethyl Violet Azide Broth 250 用于鏈球菌的增菌培養(yǎng)
58351 用于腸道菌的選擇性增菌培養(yǎng)(Alpha Biosciences方法)
58352 KF鏈球菌瓊脂   KF Streptococcus Agar 100 用于鏈球菌的選擇性分離及計(jì)數(shù)（SN標(biāo)準(zhǔn)）
58353 LIM培養(yǎng)基 LIM Medium 250 用于鏈球菌的分離培養(yǎng)(Japan方法)
58354 BETA-SSA 瓊脂 BETA-SSA Agar 250 用于鏈球菌的選擇性分離培養(yǎng)(ACUMEDIA方法)
58355 改良Y培養(yǎng)基 人抗肌內(nèi)膜抗體IgA(EMA IgA)ELISA試劑盒   Agar Y，Modified 250 用于分離小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌 （GB標(biāo)準(zhǔn)）
58356 改良磷酸鹽緩沖液PSB   Phosphate Saline Buffer,Modified 250 用于小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌冷增菌培養(yǎng) （GB標(biāo)準(zhǔn)）
58357 ITC 肉湯 ITC Broth 250 用于分離培養(yǎng)耶爾森氏菌(ISO方法)

下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因，并給出相應(yīng)的解決辦法：
1 選擇試劑：選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑，嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣：可能原因： 
1）血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣； 
2）手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí))； 3）加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法： 
1） 標(biāo)本為血清：將血液先自然存放1-2小時(shí)后，再用3000rmp離心15分鐘；標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒*混合5-10次，放置一段時(shí)間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測(cè)，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。 
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。 
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。 
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 
5) 標(biāo)本較多時(shí)，請(qǐng)分批操作。
3 孵育：可能原因： 
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗*； 
2) 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng)，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗*。解決辦法： 
1) 貼封片或加蓋； 
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板：可能原因： 
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。 
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí)，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不*；洗板針堵塞，抽吸不*；洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差。 
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。 解決辦法： 
1) 保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙（選擇干凈、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干； 
2) 合理安排，或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5人抗肌內(nèi)膜抗體IgA(EMA IgA)ELISA試劑盒顯色：可能原因： 
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過長(zhǎng)或使用過期顯色劑； 
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法： 
1) 顯色劑盡量在臨用前配制，堅(jiān)持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用； 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流； 
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止：可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板：如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化，有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
在實(shí)際操作中，除了選擇優(yōu)良試劑外，必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作，同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng)，以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本，才能保證檢測(cè)質(zhì)量。現(xiàn)在國(guó)內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀，這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。
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