人蛋白酶3抗體(PR3Ab)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法：
1)目測(cè)定性法：加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后，肉眼觀察陽(yáng)性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照；與陰性對(duì)照的顏色接近者，判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2～3SD，作為陽(yáng)性結(jié)果的閾值。
3)以P／N值(陽(yáng)性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽(yáng)性；P／N值小于2．1，但大于1．5為可疑；P／N小于1．5為陰性。
4)定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
我們將在人蛋白酶3抗體(PR3Ab)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問(wèn)題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給客戶帶來(lái)一些啟發(fā)，提高試驗(yàn)質(zhì)量。

58153 TTC營(yíng)養(yǎng)瓊脂    TTC Nutrient Agar 250 用于細(xì)菌總數(shù)測(cè)定
58154 LB肉湯     LB Broth 250 用于細(xì)菌培養(yǎng)
58155 LB營(yíng)養(yǎng)瓊脂    LB Nutrient Agar 250 用于細(xì)菌培養(yǎng)
58156 苯*脫氨酶培養(yǎng)基    Phenylalanine Deaminase  Medium 100 用于苯*脫氨酶試驗(yàn)
58157 哥倫比亞MUG培養(yǎng)基 Columbia- MUG Medium 250 用于大腸桿菌的熒光檢測(cè)(SN標(biāo)準(zhǔn))
58158 2216E瓊脂 2216E　Agar 250 用于海生細(xì)菌的培養(yǎng)和計(jì)數(shù)
58159 腸球菌瓊脂(膽鹽－七葉苷－疊氮鈉瓊脂) Enterococcus Agar(Bile Esculin Azide Agar) 250 用于腸球菌和腸道致病菌的分離培養(yǎng)(Acumedia方法)
58160 BDS培養(yǎng)基 BDS Medium 250 用于培養(yǎng)擬桿菌
58161 葡萄糖瓊脂 Dextrose Agar 250 用于細(xì)菌的綜合生化試驗(yàn)
58162 Andrade氏糖類肉湯 Andrade’s Carbohydrate Broth 250 用于細(xì)菌的糖發(fā)酵試驗(yàn)
58163 Korser氏枸椽酸鹽肉湯 Korser Citrate Sodium Broth 100 用于細(xì)菌枸椽酸鹽試驗(yàn)(SN標(biāo)準(zhǔn))
58164 Endo 培養(yǎng)基 Endo Agar 250 用于大腸菌群的確診試驗(yàn)(APHA)
58165 緩沖MUG瓊脂 Buffered MUG Agar 100 用于濾膜MUG法檢測(cè)食品中大腸桿菌數(shù)(SN/T1059.2)
58166 乳糖莫能霉素葡萄糖醛酸瓊脂 LMG Agar 250 用于濾膜MUG法檢測(cè)食品中大腸菌群數(shù)(SN/T1059.2)
58167 茜素-β-半乳糖苷瓊脂 Aliz-gal Agar 250 用于食品、飲料和飲用水中大腸菌群快速檢測(cè)和計(jì)數(shù)(GB/T)
58168 Tergitol-7 瓊脂 Tergitol-7 Agar 250 用于大腸菌群的鑒定(NMKL)
58169 TTC 溶液(0.125%) TTC Solution(0.125%) 2ml*10 添加于HB0127中
58170 標(biāo)準(zhǔn)I號(hào)營(yíng)養(yǎng)瓊脂 Standard I Nutrient Agar 250 標(biāo)準(zhǔn)細(xì)菌計(jì)數(shù)、含糖(MERCK方法)
58171 標(biāo)準(zhǔn)II號(hào)營(yíng)養(yǎng)瓊脂 Standard II Nutrient Agar 250 細(xì)菌計(jì)數(shù)、不含糖，可作血瓊脂基礎(chǔ)和傳代用(MERCK方法)
58172 A1 培養(yǎng)基 A1 Medium 250 用于檢測(cè)水中的大腸菌群(US-EPA標(biāo)準(zhǔn))
58173 胰胨大豆胨固綠瓊脂 Tryptic Soy Fast Green Agar 250 用于濾膜細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定和分離培養(yǎng)(NEOGEN方法)
58174 LES Endo 瓊脂 m-Endo Agar，LES 250g 用于濾膜細(xì)菌計(jì)數(shù)(Merck方法)
58175 m-TGE 肉湯 m-TGE Broth 250 用于奶制品中濾膜細(xì)菌計(jì)數(shù)(Acumedia方法)
58176 m-TEC瓊脂 m-TEC Agar 250 用于水中耐熱細(xì)菌濾膜計(jì)數(shù)(Acumedia方法)
58177 現(xiàn)隱肉湯 Presence Absence Broth 250 用于水中大腸菌群計(jì)數(shù)(US-EPA方法)
58178 醋酸鹽瓊脂 Acetate Agar  250 用于細(xì)菌醋酸鹽試驗(yàn)
58179 水平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基 Water Plate Count Agar 250 用于飼料中細(xì)菌總數(shù)測(cè)定
58180 R2A 瓊脂 R2A Agar 250 用于飲用水中異生細(xì)菌分離培養(yǎng)(ACUMEDIA方法)
58181 心浸液瓊脂 Heart Infusion Agar 250 用于培養(yǎng)營(yíng)養(yǎng)要求高的微生物 (ACUMEDIA方法)
58182 桔汁瓊脂 ORANGE SERUM AGAR 250 用于飲料中耐酸細(xì)菌的分離培養(yǎng)(ACUMEDIA方法)
58183 CATC瓊脂 CATC Agar 250 用于食品和飲料腸球菌的分離培養(yǎng)(MERCK方法)
58184 EEM培養(yǎng)基 EEM medium 250 用于致病性大腸桿菌的增菌培養(yǎng)和腸桿菌的增菌培養(yǎng)(Japan方法)
58185 胰蛋白胨膽鹽瓊脂 Tryptone Bile Agar 250 用于大腸桿菌的膜過(guò)濾法選擇性培養(yǎng)(ISO標(biāo)準(zhǔn))
58186 膽鹽七葉苷瓊脂 Bile Esculin Agar 250 用于腸球菌和腸道致病菌的分離培養(yǎng)(Acumedia方法)
58187 VRBG 瓊脂 VRBGA Agar 250 用于奶粉中坂崎桿菌的分離培養(yǎng)(FDA方法)
58188 TSA 瓊脂 TSA agar 250 用于奶粉中坂崎桿菌的純化培養(yǎng)(FDA方法)
58189 胰蛋白胨大豆肉湯    Trypticase (Tryptic) Soy Broth 250 用于*的MPN測(cè)定，增菌培養(yǎng)，NaCl濃度可根據(jù)需要而調(diào)整（GB、SN標(biāo)準(zhǔn)）
58190 Baird-Parker瓊脂基礎(chǔ)     Baird-Parker Agar Base 250 用于*的選擇性分離培養(yǎng)（GB、SN標(biāo)準(zhǔn)）
58191 亞碲酸鹽卵黃增菌液  Egg-Yolk lurite Emulsion 5ml*10 加入Baird-Parker瓊脂基礎(chǔ)中
58192 兔血漿   Rabbit  Plasma 0.5ml*20 用于*凝固酶試驗(yàn)
58193 DNA酶瓊脂    DNase Agar 100 用于核糖核酸酶檢測(cè)
58194 7.5%氯化鈉肉湯    7.5% Sodium Chloride Broth 250 用于*的增菌培養(yǎng)（GB標(biāo)準(zhǔn)）
58195 普通肉湯培養(yǎng)基      Broth Medium 250 用于*的增菌培養(yǎng)（SN標(biāo)準(zhǔn)）
58196 腸毒素產(chǎn)毒培養(yǎng)基 250 用于*腸毒素產(chǎn)毒試驗(yàn)
58197 亞碲酸鈉肉湯培養(yǎng)基基礎(chǔ)    Sodium lurite Broth Base 250 用于*的增菌培養(yǎng)。每100ml培養(yǎng)基需另加入1%亞碲酸鈉1ml
58198 葡萄球菌增菌肉湯   Staphylococcus  Enrichment Broth 250 用于凝固酶陽(yáng)性葡萄球菌的選擇性增菌
58199 葡萄球菌選擇性瓊脂    Staphylococcus Selective Agar 250 用于凝固酶陽(yáng)性葡萄球菌的選擇性分離培養(yǎng)
58200 北沙參亞碲酸鈉胨水培養(yǎng)基基礎(chǔ) Beisachang Sodium lurite Broth Base 250 用于*的增菌培養(yǎng)。每100ml培養(yǎng)基需另加入1%亞碲酸鈉0.2ml
58201 葡萄球菌選擇性瓊脂110(CHAPMAN 瓊脂) Staphylococcus Selective Agar 10  250 用于*的分離培養(yǎng)
58202 *卵黃培養(yǎng)基基礎(chǔ) Egg-Yolk Mannitol Salt agar Base 250 用于*的分離培養(yǎng)(Japan方法)
58203 V-J瓊脂 Vogel-Johnson Agar 250 病源標(biāo)本和其它標(biāo)本中*陽(yáng)性*的選擇性分離(Merck方法)
58204 改良Giolitti-Cantobi 肉湯 Modified 人蛋白酶3抗體(PR3Ab)ELISA試劑盒Giolitti-Cantoni Broth 250 用于*的增菌培養(yǎng)
58205 *高鹽瓊脂    Manitol Salt Agar 250 用于*的選擇性分離培養(yǎng)
58206 TMP瓊脂培養(yǎng)基 TMP Agar  250 用于*的分離培養(yǎng)
58207 緩沖蛋白胨水（BPW）   Buffered Peptone Water 250 用于沙門氏菌前增菌培養(yǎng)，亦可用于李氏菌前增菌培養(yǎng)（GB、SN標(biāo)準(zhǔn)）
58208 膽硫乳瓊脂（DHL）  Deoxycholate Hydrogen Sulfide Lactose Agar 250 腸道菌選擇性培養(yǎng)基，特別是沙門氏菌的選擇性分離（GB、SN標(biāo)準(zhǔn)）

下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因，并給出相應(yīng)的解決辦法：
1 選擇試劑：選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑，嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣：可能原因： 
1）血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣； 
2）手工操作中，加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí))； 3）加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法： 
1） 標(biāo)本為血清：將血液先自然存放1-2小時(shí)后，再用3000rmp離心15分鐘；標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒*混合5-10次，放置一段時(shí)間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測(cè)，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。 
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。 
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。 
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 
5) 標(biāo)本較多時(shí)，請(qǐng)分批操作。
3 孵育：可能原因： 
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗*； 
2) 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng)，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗*。解決辦法： 
1) 貼封片或加蓋； 
2) 按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板：可能原因： 
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。 
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí)，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不*；洗板針堵塞，抽吸不*；洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差。 
3) 反應(yīng)板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。 解決辦法： 
1) 保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙（選擇干凈、無(wú)或少塵的吸水材料）上輕輕拍干； 
2) 合理安排，或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5人蛋白酶3抗體(PR3Ab)ELISA試劑盒顯色：可能原因： 
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或使用過(guò)期顯色劑； 
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法： 
1) 顯色劑盡量在臨用前配制，堅(jiān)持不用過(guò)期顯色劑，肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用； 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流； 
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止：可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽(yáng)性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板：如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過(guò)程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化，有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
在實(shí)際操作中，除了選擇優(yōu)良試劑外，必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作，同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng)，以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本，才能保證檢測(cè)質(zhì)量?，F(xiàn)在國(guó)內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀，這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。
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