人抗脫氧核糖核蛋白抗體(DNP-Ab)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法：
1)目測(cè)定性法：加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后，肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照；與陰性對(duì)照的顏色接近者，判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2～3SD，作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P／N值(陽性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽性；P／N值小于2．1，但大于1．5為可疑；P／N小于1．5為陰性。
4)定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
我們將在人抗脫氧核糖核蛋白抗體(DNP-Ab)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給客戶帶來一些啟發(fā)，提高試驗(yàn)質(zhì)量。

58103 大腸桿菌顯色培養(yǎng)基 E.Coli Chromogenic Medium 1000ml 用于快速、準(zhǔn)確檢測(cè)大腸桿菌大腸桿菌培養(yǎng)24小時(shí)，顯蘭色
58104 9cm平皿
58105 大腸菌群顯色培養(yǎng)基 Coliform Chromogenic Medium 1000ml 用于快速、準(zhǔn)確檢測(cè)大腸菌群大腸菌群培養(yǎng)24小時(shí)，顯蘭色
58106 9cm平皿
58107 大腸桿菌／大腸菌群顯色培養(yǎng)基 E.Coli/Coliform Chromogenic Medium 1000ml 用于快速、準(zhǔn)確同時(shí)檢測(cè)大腸桿菌和大腸菌群，培養(yǎng)24小時(shí)，大腸桿菌顯紫色,大腸菌群顯紅色
58108 9cm平皿
58109 TBX 培養(yǎng)基 TBX Agar 1000ml 用于快速、準(zhǔn)確檢測(cè)大腸桿菌大腸桿菌培養(yǎng)24小時(shí)，顯蘭色
58110 9cm平皿
58111 細(xì)菌總數(shù)顯色培養(yǎng)基 Total Genes Chromogenic Medium  250g 用于快速、準(zhǔn)確檢測(cè)細(xì)菌總數(shù)，培養(yǎng)24小時(shí)，細(xì)菌顯紅色
58112 9cm平皿
58113 O157顯色培養(yǎng)基 O157 Chromogenic Medium 1000ml 用于O157菌的顯色培養(yǎng)
58114 9cm平皿
58115 沙門氏菌顯色培養(yǎng)基 Salmonella Chromogenic Medium 1000ml 用于沙門氏菌的顯色培養(yǎng)
58116 9cm平皿
58117 李斯特氏菌顯色培養(yǎng)基 Listera Chromogenic Medium 1000ml 用于李斯特氏菌的顯色培養(yǎng)
58118 9cm平皿
58119 金黃色葡萄球顯色培養(yǎng)基 Staphylococcus Chromogenic Medium 1000ml 用于*的顯色培養(yǎng)
58120 9cm平皿
58121 霉菌和酵母菌顯色培養(yǎng)基 Mould and Yeast Chromogenic Medium 1000ml 用于霉菌和酵母菌的顯色培養(yǎng)
58122 9cm平皿
58123 弧菌顯色培養(yǎng)基 Vibrio Chromogenic Medium 1000ml 用于弧菌的顯色培養(yǎng)，副溶血性弧菌顯藍(lán)色，其它弧菌顯無色。
58124 坂崎桿菌顯色培養(yǎng)基 Enterobacter sakazakii Chromogenic Medium 1000ml 用于坂崎桿菌的顯色培養(yǎng)，坂崎桿菌顯藍(lán)色，其它腸桿菌顯無色。
58125 尿道定位顯色培養(yǎng)基 Urine Orientation Chromogenic Medium 1000ml 用于分離和鑒別常見尿道致病菌
58126 *麥康凱瓊脂基礎(chǔ)(SMAC)    Sorbitol Maconkey Agar Base 250 用于大腸桿菌0157的分離培養(yǎng)(SN標(biāo)準(zhǔn))
58127 * A 1.25μg/支*5 添加于100ml HB0121中
58128 1%亞碲酸鉀溶液 5ml*10 適量添加于HB0121 
58129 4-甲基傘形酮-D-葡萄糖醛酸苷 （MUG） 0.1 0.01g添加于100ml LST-MUG中用于0157鑒定
58130 mEC 肉湯       mE.Coli Broth 250 用于0157選擇性增菌(USDA-FSIS方法)
58131 mTSB肉湯 mTSB Broth With Novobiocin 250 用于0157選擇性增菌(ISO方法)
58132 新生霉素A Novobiocin 2mg/支*5 添加于100ml mEC肉湯和mTSB肉湯中用于0157選擇性增菌
58133 SD-39瓊脂 SD-39 Agar 250 用于濾膜法大腸桿菌0157的分離培養(yǎng)(NEOGEN方法)
58134 平板計(jì)數(shù)瓊脂（PCA） Plate Count Agar 250 標(biāo)準(zhǔn)平板計(jì)數(shù)瓊脂,含糖,用于細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定(SN標(biāo)準(zhǔn))
58135 煌綠乳糖膽鹽肉湯 （BGLB）     Brilliant Green Lactose Bile Broth 250 用于大腸菌群、大腸桿菌的測(cè)定(SN標(biāo)準(zhǔn))
58136 EC 肉湯       E.Coli Broth 250 用于糞大腸菌群、大腸桿菌的測(cè)定(SN標(biāo)準(zhǔn))
58137 伊紅美藍(lán)瓊脂 (EMB) Eosin-Methylene Blue Agar 250 弱選擇性培養(yǎng)基、用于分離腸道致病菌，特別是大腸桿菌(SN標(biāo)準(zhǔn))
58138 營養(yǎng)肉湯 (NB)    Nutrient Broth 250 一般細(xì)菌培養(yǎng)、轉(zhuǎn)種、復(fù)壯、增菌等(GB標(biāo)準(zhǔn))
58139 營養(yǎng)瓊脂 (NA)    Nutrient Agar 250 細(xì)菌計(jì)數(shù)、不含糖，可作血瓊脂基礎(chǔ)和傳代用(GB標(biāo)準(zhǔn))
58140 乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基      Lactose Bile Broth 250 用于大腸菌群，糞大腸菌群，大腸桿菌的測(cè)定(GB標(biāo)準(zhǔn))
58141 乳糖復(fù)發(fā)酵培養(yǎng)基     Lactose Broth 250 用于大腸菌群,糞大腸菌群,大腸桿菌的測(cè)定(GB標(biāo)準(zhǔn))
58142 去氧膽酸鹽瓊脂      Desoxycholate Lactose Agar 250 用于大腸桿菌固體平板測(cè)定,腸道菌選擇性分離
58143 MR-VP培養(yǎng)基      Methyl Red Voges Proskauer Broth 250 用于大腸桿菌的甲基紅和VP試驗(yàn)(SN標(biāo)準(zhǔn))
58144 結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂 (VRBA)     Violet Red Bile Agar 250 用于大腸菌群的固體平板檢測(cè)(SN標(biāo)準(zhǔn))
58145 西蒙氏枸櫞酸鹽瓊脂      Simmons Citrate Agar 250 用于腸道菌的檸檬酸鹽利用試驗(yàn)(GB標(biāo)準(zhǔn))
58146 腸道菌計(jì)數(shù)瓊脂 (VRBDA)      Violet Red Bile Dextrose Agar   250 用于腸道菌計(jì)數(shù)和腸桿菌科鑒別(MERCK方法)
58147 菌種保存培養(yǎng)基    Strain Store Medium 250 用于常用細(xì)菌斜面?zhèn)鞔笆覝乇４?BR>58148 乳糖蛋白胨培養(yǎng)液     Lactose Peptone Broth 250 用于飲用水，水源水中總大腸菌群的測(cè)定(GB標(biāo)準(zhǔn))
58149 Cary-Blair 氏*        Cary-Blair Transport Medium 250 用于運(yùn)送腸道致病菌標(biāo)本
58150 哥倫比亞血瓊脂基礎(chǔ) Columbia Blood Agar Base 250 營養(yǎng)非常豐富，用各種細(xì)菌的基礎(chǔ)培養(yǎng)基(AFNOR EP IDF標(biāo)準(zhǔn))
58151 亮綠乳糖培養(yǎng)基    Brilliant Green Lactose Medium 250 用于飲用天然礦泉水中大腸桿菌的檢驗(yàn)人抗脫氧核糖核蛋白抗體(DNP-Ab)ELISA試劑盒(GB標(biāo)準(zhǔn))
58152 腸道菌增菌肉湯(EE肉湯)    Enterobacteria Enrichment Broth 250 用于腸道菌的增菌培養(yǎng)(GB、FDA標(biāo)準(zhǔn))

下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因，并給出相應(yīng)的解決辦法：
1 選擇試劑：選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑，嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣：可能原因： 
1）血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣； 
2）手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí))； 3）加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法： 
1） 標(biāo)本為血清：將血液先自然存放1-2小時(shí)后，再用3000rmp離心15分鐘；標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒*混合5-10次，放置一段時(shí)間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測(cè)，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。 
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。 
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。 
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 
5) 標(biāo)本較多時(shí)，請(qǐng)分批操作。
3 孵育：可能原因： 
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗*； 
2) 孵育時(shí)間人為延長，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗*。解決辦法： 
1) 貼封片或加蓋； 
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板：可能原因： 
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。 
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí)，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不*；洗板針堵塞，抽吸不*；洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差。 
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長。 解決辦法： 
1) 保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙（選擇干凈、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干； 
2) 合理安排，或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5人抗脫氧核糖核蛋白抗體(DNP-Ab)ELISA試劑盒顯色：可能原因： 
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過長或使用過期顯色劑； 
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法： 
1) 顯色劑盡量在臨用前配制，堅(jiān)持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用； 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流； 
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止：可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板：如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化，有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
在實(shí)際操作中，除了選擇優(yōu)良試劑外，必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作，同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng)，以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本，才能保證檢測(cè)質(zhì)量?，F(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀，這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。
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