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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時間:2017-01-19 03:06:13瀏覽次數(shù):400次
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人抗核糖核蛋白抗體(RNP-Ab)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯(lián)免疫實驗得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人抗核糖核蛋白抗體(RNP-Ab)ELISA試劑盒實驗ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人抗核糖核蛋白抗體(RNP-Ab)ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗質(zhì)量。
57930 Anti-CD14 CD14/內(nèi)毒素受體抗體 0.1ml
57931 Anti-CD147/EMMPRIN 細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子抗體 0.1ml
57932 Anti-CD158a/KIR2DL1 NK細(xì)胞抑制性受體2DL1抗體 0.1ml
57933 Anti-CD158e/KIR3DL1 NK細(xì)胞抑制性受體3DL1抗體 0.1ml
57934 Anti-CD177/NB1 嗜中性粒細(xì)胞抗原CD177抗體 0.1ml
57935 Anti-CD22/fpc1/blcam 抗B淋巴細(xì)胞粘附分子CD22抗體 0.1ml
57936 Anti-CD25/IL-2RA CD25/白介素2受體a鏈抗體 0.1ml
57937 Anti-CD122/IL-2RB CD122/白介素2受體β鏈抗體 0.1ml
57938 Anti-CD3 CD3抗體 0.1ml
57939 Anti-CD33 CD33抗體(人) 0.1ml
57940 Anti-CD33/Siglec-3 CD33抗體(大、小鼠) 0.1ml
57941 Anti-CD34 CD34抗體(細(xì)胞表面的唾液粘蛋白) 0.1ml
57942 Anti-CD38 CD38抗體(人) 0.1ml
57943 Anti-CD4 CD4抗體 0.1ml
57944 Anti-CD7 CD7抗體 0.1ml
57945 Anti-CD8 CD8抗體 0.1ml
57946 Anti-CD40L CD40L抗體 0.1ml
57947 Anti-CD45 CD45(白細(xì)胞共同抗原)抗體 0.1ml
57948 Anti-CD46/MCP/membrane cofactor protein 膜輔蛋白/內(nèi)源性輔助因子活性蛋白抗體(人) 0.1ml
57949 Anti-CD46/MCP/membrane cofactor protein 膜輔蛋白/內(nèi)源性輔助因子活性蛋白抗體 0.1ml
57950 Anti-CD45RO CD45RO抗體 0.1ml
57951 Anti-CD49/VLA CD49(非常晚期抗原)抗體 0.1ml
57952 Anti-CD50/ICAM-3 細(xì)胞間粘附分子-3抗體 0.1ml
57953 Anti-CD55/DAF 衰變加速因子CD55抗體 0.1ml
57954 Anti-CD59/potectin 反應(yīng)性溶血膜抑制蛋白抗體 0.1ml
57955 Anti-CD56/NCAM1 神經(jīng)細(xì)胞粘附分子1抗體(Elisa IP IHC 用) 0.1ml
57956 Anti-CD171/NCAM-L1 神經(jīng)細(xì)胞粘附分子配體1抗體 0.1ml
57957 Anti-CD57 CD57抗體 0.1ml
57958 Anti-CD68 CD68抗體(人、牛) 0.1ml
57959 Anti-CD80/B7-1 刺激分子B7-1蛋白抗體 0.1ml
57960 Anti-CD71/TFR 轉(zhuǎn)鐵蛋白受體抗體 0.1ml
57961 Anti-CD82/KAI1 腫瘤轉(zhuǎn)移抑制蛋白1抗體 0.1ml
57962 Anti-Cdc2/P34CDC2/CDK1 周期素依賴激酶1抗體 0.1ml
57963 Anti-CD335/NKp46/NCR1 細(xì)胞毒性受體NK-p46抗體 0.1ml
57964 Anti-CD336/NKp44/NCR2 細(xì)胞毒性受體NK-p44抗體 0.1ml
57965 Anti-CD337/NKp30/NCR3 細(xì)胞毒性受體NK-p30抗體 0.1ml
57966 Anti-Cdc6 細(xì)胞分裂周期蛋白6抗體 0.1ml
57967 Anti-CD339/Jagged1 抗Jagged1/CD339抗體 0.1ml
57968 Anti-Cdc34 細(xì)胞周期調(diào)控因子34 0.1ml
57969 Anti-CDK3 周期素依賴性激酶3抗體 0.1ml
57970 Anti-CCNT1/CDK9 周期素依賴性激酶9抗體 0.1ml
57971 Anti-CEA 鼠抗人癌胚抗原單克隆抗體(包被) 0.1ml
57972 Anti-GAPDH 小鼠抗3-磷酸甘油醛脫氫酶單克隆抗體(內(nèi)參抗體) 0.1ml
57973 Anti-β-Actin β-肌動蛋白抗體(內(nèi)參抗體) 0.1ml
57974 Anti-14-3-3 protein 14-3-3 蛋白抗體 0.1ml
57975 Anti-14-3-3 family protein 14-3-3蛋白抗體(植物) 0.1ml
57976 Anti-5-HTR1B 5-羥色胺受體1B(5-HT/serotonin R1B)抗體 0.1ml
57977 Anti-5-HTR2B 5-羥色胺受體2B(5-HT/serotonin R2B)抗體 0.1ml
57978 Anti-5-HTT/SERT 5-羥色胺轉(zhuǎn)運蛋白抗體 0.1ml
57979 Anti-5-HTR3 5-羥色胺受體3抗體 0.1ml
57980 Anti-5-HTR4 5-羥色胺受體4抗體 0.1ml
57981 Anti-8-OHdG 8-羥基脫氧鳥苷抗體 0.1ml
57982 Anti-A2AR/Adenosine A2A-R 腺苷A2A受體抗體 0.1ml
57983 Anti-AAK1 AP2關(guān)聯(lián)激酶1抗體 0.1ml
57984 Anti-AARS2 丙氨酰tRNA合成酶2抗體 0.1ml
57985 Anti-AATK 細(xì)胞凋亡關(guān)聯(lián)*激酶抗體 0.1ml
57986 Anti-ABCA1 腺苷三磷酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體A1抗體 0.1ml
57987 Anti-ABCB5/ ATP結(jié)合蛋白家族5抗體 0.1ml
57988 Anti-ABCB6人抗核糖核蛋白抗體(RNP-Ab)ELISA試劑盒 ATP結(jié)合蛋白家族6抗體 0.1ml
57989 Anti-ABCF1 ATP結(jié)合盒蛋白家族GCN20F家族1抗體 0.1ml
57990 Anti-ABCG1 三磷酸腺苷結(jié)合盒亞家族G1抗體 0.1ml
57991 Anti-ABCG2/BCRP/BXP-21 三磷酸腺苷結(jié)合轉(zhuǎn)運蛋白G超家族成員2抗體 0.1ml
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人抗核糖核蛋白抗體(RNP-Ab)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本,才能保證檢測質(zhì)量?,F(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標(biāo)儀,這對于實現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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