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上海紀寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時間:2017-01-18 22:33:55瀏覽次數(shù):331次
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人抗核抗體(ANA)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯(lián)免疫實驗得到了廣泛的應用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。
人抗核抗體(ANA)ELISA試劑盒實驗ELISA結果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結果根據(jù)標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人抗核抗體(ANA)ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗質(zhì)量。
57624 Anti-OXR 食欲素受體抗體 1ml
57625 Anti-P14ARF 抑癌基因p14抗體 0.2ml
57626 Anti-P16/CDKN2A 抑癌基因p16抗體 0.1ml
57627 Anti-P19ARF p19ARF抑癌基因抗體 0.1ml
57628 Anti-P21/WAF1/CIP1 p21抗體 0.1ml
57629 Anti-P27/kip1 P27抗體/周期素依賴激酶抑制劑 0.1ml
57630 Anti-P2Y1 receptor P2Y1受體抗體 0.2ml
57631 Anti-P311 protein 神經(jīng)再生相關蛋白抗體 0.1ml
57632 Anti-P38 MAPK 絲裂原活化蛋白激酶p38抗體 0.1ml
57633 Anti-P-p38 MAPK/MAPK14 磷酸化-絲裂原活化蛋白激酶p38抗體 0.1ml
57634 Anti-P63 protein P63 腫瘤抑制基因抗體 0.1ml
57635 Anti-PACAP/VIP receptor 腺苷酸環(huán)化酶激活肽受體-II/血管活性腸肽受體-II抗體 0.2ml
57636 Anti-PACAP/VIP receptor-I 腺苷酸環(huán)化酶激活肽受體-I/血管活性腸肽-I抗體 0.2ml
57637 Anti-PACAP-27/38 腺苷酸環(huán)化酶激活肽-27/38抗體 0.2ml
57638 Anti-PACAP-38 腺苷酸環(huán)化酶激活肽-38抗體 0.2ml
57639 Anti-PADI4/PAD4 關節(jié)炎相關基因抗體 0.1ml
57640 Anti-PAF 血小板活化因子抗體 0.1ml
57641 anti-PALB2 乳腺癌易感基因相關蛋白2 0.2ml
57642 Anti-PAP2c 磷脂酸磷酸酶2C抗體 0.1ml
57643 Anti-PAR-1 蛋白酶激活受體-1抗體 0.2ml
57644 Anti-PAR-2 蛋白酶激活受體-2抗體 0.2ml
57645 Anti-PAR4 蛋白酶活化受體4/前列腺細胞凋亡反應蛋白4抗體 0.1ml
57646 Anti-PARP 多腺苷二磷酸多聚酶抗體 0.1ml
57647 Anti-PAX1 配對盒基因1抗體 0.2ml
57648 Anti-PAX2 配對盒基因2抗體 0.1ml
57649 Anti-PAX3 配對盒基因3抗體 1ml
57650 Anti-PAX8 配對盒基因8抗體 0.1ml
57651 Anti-PAX9 配對盒基因9抗體 0.2ml
57652 Anti-P-cadherin P-鈣粘附分子抗體 0.1ml
57653 Anti-PCNA 增殖細胞核抗原抗體 0.1ml
57654 anti-PDE4D 磷酸二酯酶4D抗體 0.2ml
57655 Anti-PDGF-A 血小板源性生長因子-A抗體 0.1ml
57656 Anti-PDGF-B 血小板源性生長因子-B抗體 0.1ml
57657 Anti-PDGF-BB 血小板源性生長因子-BB抗體 0.2ml
57658 Anti-PDGF-R-A 血小板源性生長因子受體-A抗體 0.1ml
57659 Anti-PDGF-R-B 血小板源性生長因子受體-B抗體 0.1ml
57660 Anti-Pdk4 丙酮酸脫氫酶激酶4抗體 0.1ml
57661 anti-Pdx1 胰十二指腸同源異型盒基因抗體 0.1ml
57662 Anti-PEDF 色素上皮源性因子抗體 0.1ml
57663 Anti-PEG10 肝癌高表達基因抗體 1ml
57664 Anti-PEPT1 腸道肽轉(zhuǎn)運蛋白1/小肽轉(zhuǎn)運蛋白1抗體 0.1ml
57665 Anti-PEPT2 腸道肽轉(zhuǎn)運蛋白2/小肽轉(zhuǎn)運蛋白2抗體 0.1ml
57666 Anti-P-fscn1 磷酸化纖維束蛋白同源物1/肌動蛋白集束蛋白/圓線蟲紫癜 抗體 0.1ml
57667 Anti-P-GP P-糖蛋白 0.1ml
57668 Anti-PGRN 顆粒蛋白前體抗體 0.1ml
57669 Anti-PI3K/P85 alpha 磷脂酰肌醇激酶抗體 0.1ml
57670 Anti-PIBF 孕激素誘導阻斷因子抗體 0.2ml
57671 Anti-PIWIL1 piwi樣1蛋白抗體 0.1ml
57672 Anti-PKA 蛋白激酶A抗體 0.1ml
57673 Anti-PKB/AKT-1 蛋白激酶B 0.1ml
57674 Anti-PKC 蛋白激酶C抗體 0.1ml
57675 Anti-PLAU/uPA *型纖溶酶原激活因子抗體 0.1ml
57676 Anti-PLGF 人胎盤生長因子相關抗體 0.1ml
57677 Anti-PLGF 小鼠胎盤生長因子抗體 0.2ml
57678 Anti-PLGF 胎盤生長因子抗體 0.2ml
57679 Anti-PMP-22 人抗核抗體(ANA)ELISA試劑盒外周髓鞘蛋白-22 0.2ml
57680 Anti-Podoplanin Protein 平足蛋白抗體 0.1ml
57681 Anti-Pokemon “撲克蒙"蛋白又稱“波克曼"蛋白抗體 0.2ml
57682 Anti-PP-1 蛋白磷酸酯酶-1抗體 0.1ml
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人抗核抗體(ANA)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴謹?shù)墓ぷ髯黠L檢測每一份標本,才能保證檢測質(zhì)量?,F(xiàn)在國內(nèi)已有相當數(shù)量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現(xiàn)ELISA標準化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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