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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時間:2017-02-23 10:39:03瀏覽次數(shù):261次
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人抗磷脂抗體(Apl/APA)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯(lián)免疫實驗得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人抗磷脂抗體(Apl/APA)ELISA試劑盒實驗ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人抗磷脂抗體(Apl/APA)ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗質(zhì)量。
57244 Anti-Dynamin 2 兔抗人鳥苷三磷酸酶-發(fā)動蛋白2抗體 0.1ml
57245 Anti-E2F1 轉(zhuǎn)錄因子E2F-1抗體 0.1ml
57246 Anti-E2F2 轉(zhuǎn)錄因子E2F-2抗體 0.1ml
57247 Anti-E7 protein 人乳頭瘤病毒16型E7抗體 0.1ml
57248 Anti-EAAT1/Glast 膠質(zhì)細(xì)胞*運載蛋白1 抗體 0.1ml
57249 Anti-EBNA-3 EB病毒編碼核蛋白-3抗體 0.1ml
57250 Anti-ECE1 內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶1ECE1抗體 0.1ml
57251 Anti-ECG2 食道癌相關(guān)基因抗體 0.1ml
57252 Anti-ECM1 細(xì)胞外基質(zhì)蛋白1抗體 0.2ml
57253 Anti-ED-1 外胚層發(fā)育不良抗體 0.1ml
57254 Anti-EGF-R 表皮生長因子受體抗體 0.1ml
57255 Anti-EGFR-ⅤⅢ 表皮生長因子受體-8抗體 0.2ml
57256 Anti-Egr-1 早期反應(yīng)基因-1/應(yīng)急反應(yīng)生長基因1抗體 0.1ml
57257 Anti-Emp1 表皮膜蛋白1抗體 0.2ml
57258 anti-EMAb 抗子宮內(nèi)膜抗體 0.2ml
57259 Anti-Endostatin 內(nèi)皮抑素/內(nèi)皮他丁抗體 0.1ml
57260 Anti-EpCAM 上皮細(xì)胞粘附分子/表皮細(xì)胞粘附分子抗體 0.2ml
57261 Anti-EPEC-IgG O 大腸埃希桿菌O抗體 0.2ml
57262 Anti-EphA2 R *蛋白激酶受體A2抗體 0.1ml
57263 Anti-EphB2 R *蛋白激酶受體B2抗體 0.1ml
57264 Anti-ER 雌激素受體 0.1ml
57265 Anti-ERAB 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)Aβ相關(guān)結(jié)合蛋白抗體 0.2ml
57266 Anti-ERK2/ERK 絲裂原活化蛋白激酶1/2抗體 0.1ml
57267 Anti-MAPK1/ERK3 絲裂原活化蛋白激酶3抗體 0.1ml
57268 Anti-ER-α 雌激素受體α抗體 0.1ml
57269 Anti-ER-α/β Estrpgen Receptor α/β 雌激素受體α/β抗體 0.1ml
57270 Anti-ER-β 雌激素受體β 抗體 0.2ml
57271 Anti-ESA 上皮特異性抗原抗體 0.1ml
57272 Anti-ET-1 內(nèi)皮素-1抗體 0.1ml
57273 anti-ets1/E26 Ets轉(zhuǎn)錄因子家族ets1抗體 0.2ml
57274 Anti-Eukaryotic aspartyl protease 天冬氨酸蛋白酶家族蛋白抗體 0.1ml
57275 Anti-EV71 腸道病毒71型/手足口病病毒抗體 0.1ml
57276 Anti-EXPB-2death inducer-obliterator-2 植物延展素-β 0.2ml
57277 Anti-Fabp2 脂肪酸結(jié)合蛋白2抗體 0.1ml
57278 Anti-FABP 腦型脂肪酸結(jié)合蛋白抗體 0.1ml
57279 Anti-factor VIII 第八因子相關(guān)抗原抗體 0.1ml
57280 Anti-FADD Fas死亡結(jié)構(gòu)域相關(guān)蛋白 0.1ml
57281 Anti-FAM3B/PANDER 胰腺衍生因子抗體 0.1ml
57282 Anti-FAS/Apo-a1/CD95 載脂蛋白A1抗體 0.1ml
57283 Anti-FasLAnti-FasL FasL抗體 0.1ml
57284 Anti-FBN1 原纖維蛋白1抗體 0.1ml
57285 Anti-Fe65 protein Fe65 蛋白抗體 0.2ml
57286 Anti-FGF1/aFGF/ECGF-beta/HBGF-1 肝素結(jié)合生長因子/酸性成纖維細(xì)胞生長因子抗體 0.1ml
57287 Anti-FGF3/Oncogene INT2 纖維母細(xì)胞生長因子3抗體 0.1ml
57288 Anti-FGF3/HSTF1/HBGF-4 纖維母細(xì)胞生長因子4抗體 0.1ml
57289 Anti-FGF5 纖維母細(xì)胞生長因子5抗體 0.1ml
57290 Anti- KGF/FGF-7 角質(zhì)形成細(xì)胞生長因子受體/纖維母細(xì)胞生長因子-7抗體 0.1ml
57291 Anti-FGF-8/HBGF-8 成纖維細(xì)胞生長因子-8/纖維母細(xì)胞生長因子-8抗體 0.1ml
57292 anti-FGF-10 成纖維細(xì)胞生長因子-10/纖維母細(xì)胞生長因子-10抗體 0.2ml
57293 Anti-KGFR 角質(zhì)形成細(xì)胞生長因子受體抗體 0.2ml
57294 Anti-FGFR1 纖維母細(xì)胞生長因子受體1抗體 0.1ml
57295 Anti-FGFR2 成纖維細(xì)胞生長因子受體2抗體 0.1ml
57296 Anti-FGFR3 成纖維細(xì)胞生長因子受體3抗體 0.1ml
57297 Anti-FGFR4 成纖維細(xì)胞生長因子受體4抗體 0.1ml
57298 Anti-fgl2 *原酶抗體/纖維介素蛋白/前凝血素抗體 0.1ml
57299 anti-Fibulin 1 抗“衰老關(guān)鍵蛋白"抗體 0.1ml
57300 Anti-FLIP S/L 凋亡調(diào)節(jié)基因之一抗體 0.1ml
57301 Anti-FN 纖維連結(jié)蛋白抗體 0.1ml
57302 Anti-FOSB FosB抗體 0.2ml
57303 Anti-FOSL1 FOSL1抗體 1ml
57304 Anti-FOSL2 FOSL2抗體 0.1ml
57305 anti-FoxP1 人抗磷脂抗體(Apl/APA)ELISA試劑盒 FoxP1抗體 0.1ml
57306 Anti-FoxP3 叉頭蛋白3-T細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子 0.1ml
57307 anti-Measles virus of fusion protein 抗麻疹病毒抗體 0.1ml
57308 Anti-FSH 鼠抗人促卵泡生成素單克隆抗體 0.1ml
57309 anti-FSH-R 促卵泡刺激素受體抗體 0.2ml
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機(jī)洗板時,洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機(jī)。
5人抗磷脂抗體(Apl/APA)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本,才能保證檢測質(zhì)量?,F(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標(biāo)儀,這對于實現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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