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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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人抗補(bǔ)體1q抗體(C1q)ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人抗補(bǔ)體1q抗體(C1q)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測(cè)定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽(yáng)性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照;與陰性對(duì)照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2~3SD,作為陽(yáng)性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽(yáng)性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽(yáng)性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
我們將在人抗補(bǔ)體1q抗體(C1q)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問(wèn)題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶(hù)帶來(lái)一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
57118 Anti-CD49/VLA CD49抗體 0.1ml
57119 Anti-CD5 CD5抗體 0.1ml
57120 Anti-CD54/ICAM-1 細(xì)胞間粘附分子-1抗體 0.1ml
57121 Anti-ICAM-2/CD102 細(xì)胞間粘附分子-2抗體 0.2ml
57122 Anti-CD56/NCAM1 神經(jīng)細(xì)胞粘附分子1抗體 0.1ml
57123 Anti-CD62L L選擇素抗體 0.2ml
57124 anti-E-Selectin E選擇素抗體 0.1ml
57125 Anti-CD68 CD68抗體 0.1ml
57126 Anti-CD73 胞漿-5′-核苷酸酶-Ⅱ抗體 0.2ml
57127 Anti-CD79A/IGBP-1 免疫球蛋白結(jié)合蛋白-1抗體 0.2ml
57128 Anti-CD8 鼠抗人CD8單克隆抗體 0.1ml
57129 Anti-CD86/B7-2 CD86抗體 0.1ml
57130 Anti-CDK1 周期素依賴(lài)性激酶1抗體 0.1ml
57131 Anti-CDK2 周期素依賴(lài)性激酶2抗體 0.1ml
57132 Anti-CDK4 周期素依賴(lài)性激酶4抗體 0.1ml
57133 Anti-CDK5 周期素依賴(lài)性激酶5抗體 1ml
57134 Anti-CDK6 周期素依賴(lài)性激酶6抗體 0.2ml
57135 Anti-CDK7 周期素依賴(lài)性激酶7抗體 1ml
57136 Anti-CDK8 周期素依賴(lài)性激酶8抗體 0.2ml
57137 Anti-Cdkn1c/p57/Kip2 周期蛋白依賴(lài)激酶抑制因子1C抗體 0.2ml
57138 Anti-CDR/YKL-40 軟骨糖蛋白39抗體 0.1ml
57139 Anti-CEA 人癌胚抗原抗體 0.2ml
57140 Anti-CEAcam8/CD67 癌胚抗原相關(guān)細(xì)胞粘附分子8抗體 0.2ml
57141 Anti-C-erbB-2 c-erbB-2抗體 0.1ml
57142 Anti-C-erbB-4/HER4/erbB-4 c-erbB-4癌基因抗體 0.1ml
57143 Anti-c-fos 即刻早期基因抗體 0.1ml
57144 anti-CFTR 囊性纖維化跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)調(diào)節(jié)因子抗體 0.1ml
57145 Anti-CGA 嗜鉻粒素A抗體 0.2ml
57146 Anti-CGB 嗜鉻粒素B抗體 0.2ml
57147 Anti-CGRP 降鈣素基因相關(guān)肽抗體 0.1ml
57148 Anti-ChAT *乙酰轉(zhuǎn)移酶抗體 0.1ml
57149 Anti-ChRM2 毒蕈堿型乙酰*受體M2抗體 0.1ml
57150 Anti-ChRM3 毒蕈堿型乙酰*受體M3抗體 0.1ml
57151 Anti-CIDE-B 促進(jìn)凋亡基因抗體 0.2ml
57152 Anti-C-jun/AP-1 原癌基因蛋白/活化蛋白1抗體 0.1ml
57153 Anti-STK/CKⅠα 屬絲/*蛋白質(zhì)激酶抗體 0.1ml
57154 Anti-CK18 細(xì)胞角蛋白18抗體 0.1ml
57155 Anti-CK16 細(xì)胞角蛋白16抗體 0.1ml
57156 Anti-CK19 細(xì)胞角蛋白19抗體 0.1ml
57157 Anti-CK2 *激酶2抗體 0.1ml
57158 Anti-CK4 細(xì)胞角蛋白4抗體 0.1ml
57159 Anti-CK5 細(xì)胞角蛋白5抗體 0.1ml
57160 Anti-CK8 細(xì)胞角蛋白8抗體 0.1ml
57161 anti-CKLFSF2 人類(lèi)新細(xì)胞因子/趨化素樣因子超家族成員2抗體 0.2ml
57162 claudin-5 緊密連接蛋白-5抗體 0.1ml
57163 CKIP-1 酪蛋白激酶2相互作用蛋白1抗體 0.1ml
57164 anti-Clostridium perfringens type D 兔抗D型產(chǎn)氣莢膜梭菌抗體 0.2ml
57165 Anti-C-Mer/MERTK c-mer原癌基因*激酶抗體 0.1ml
57166 Anti-C-Met/HGFR 肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體抗體 0.1ml
57167 Anti-C-Myc/MYC/MTLC 致癌基因抗體 0.1ml
57168 anti-c-Myc tag c-Myc tag標(biāo)簽抗體 0.1ml
57169 Anti-CNP/CNPase C型鈉尿肽抗體 0.1ml
57170 anti-CNTF 睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子抗體 0.1ml
57171 Anti-Collagen Ⅱ 抗Ⅱ型膠原抗體 0.1ml
57172 Anti-Collagen Ⅲ 抗Ⅲ型膠原抗體 0.1ml
57173 Anti-Collagen Ⅳ 抗IV型膠原抗體 0.1ml
57174 Anti-Collagen Ⅵ 抗Ⅵ型膠原抗體 0.2ml
57175 Anti-Collagen I 人抗補(bǔ)體1q抗體(C1q)ELISA試劑盒抗I型膠原抗體 0.1ml
57176 Anti-CollagenⅤ 抗Ⅴ型膠原抗體 0.1ml
57177 Anti-CollagenⅩ 抗Ⅹ型膠原抗體 0.2ml
57178 Anti-COX-1 前列腺素氧化環(huán)化酶1抗體 0.1ml
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑,嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測(cè),可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時(shí),請(qǐng)分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng),導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周?chē)?,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿(mǎn)各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無(wú)或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5人抗補(bǔ)體1q抗體(C1q)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或使用過(guò)期顯色劑;
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過(guò)期顯色劑,肉眼可見(jiàn)淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽(yáng)性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過(guò)程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化,有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng),以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本,才能保證檢測(cè)質(zhì)量。現(xiàn)在國(guó)內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀,這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。
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