人抗平滑肌抗體(ASMA)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法：
1)目測(cè)定性法：加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后，肉眼觀察陽(yáng)性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照；與陰性對(duì)照的顏色接近者，判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2～3SD，作為陽(yáng)性結(jié)果的閾值。
3)以P／N值(陽(yáng)性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽(yáng)性；P／N值小于2．1，但大于1．5為可疑；P／N小于1．5為陰性。
4)定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
我們將在人抗平滑肌抗體(ASMA)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問(wèn)題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給客戶帶來(lái)一些啟發(fā)，提高試驗(yàn)質(zhì)量。

56882 Donkey Anti-Goat IgG/Cy5.5  Cy5.5標(biāo)記的驢抗羊IgG  0.1ml
56883 Donkey Anti-Goat IgG/Cy7  Cy7標(biāo)記的驢抗羊IgG  0.1ml
56884 Donkey Anti-Goat IgG/PE  PE標(biāo)記的驢抗羊IgG  0.1ml
56885 Donkey Anti-Goat IgG/PE-Cy3  PE-Cy3標(biāo)記的驢抗羊IgG  0.1ml
56886 Donkey Anti-Goat IgG/PE-CY5  PE-CY5標(biāo)記的驢抗羊IgG  0.1ml
56887 Donkey Anti-Goat IgG/APC  APC標(biāo)記的驢抗羊IgG  0.1ml
56888 Donkey Anti-Goat IgG/Alexa Fluor 350  Alexa Fluor 350標(biāo)記的驢抗羊IgG  0.1ml
56889 Donkey Anti-Goat IgG/Alexa Fluor 488  Alexa Fluor 488標(biāo)記的驢抗羊IgG  0.1ml
56890 Donkey Anti-Goat IgG/RBITC  羅丹明標(biāo)記的驢抗羊IgG  0.1ml
56891 Donkey Anti-Goat IgG/Bio  *標(biāo)記的驢抗羊IgG  0.1ml
56892 Donkey Anti-Guinea pig IgG/Gold  膠體金標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG  0.5ml
56893 Donkey Anti-Guinea pig IgG/HRP  辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG  0.1ml
56894 Donkey Anti-Guinea pig IgG/Bio  *標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG  0.1ml
56895 Donkey Anti-Guinea pig IgG/AP  堿性磷酸酶（AP）標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG  0.1ml
56896 Donkey Anti-Guinea pig IgG/Cy3  Cy3標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG  0.1ml
56897 Donkey Anti-Guinea pig IgG/Cy5  Cy5標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG  0.1ml
56898 Donkey Anti-Guinea pig IgG/Cy5.5  Cy5.5標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG  0.1ml
56899 Donkey Anti-Guinea pig IgG/Cy7  Cy7標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG  0.1ml
56900 Donkey Anti-Guinea pig IgG/PE  PE標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG  0.1ml
56901 Donkey Anti-Guinea pig IgG/PE-Cy3  PE-Cy3標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG  0.1ml
56902 Donkey Anti-Guinea pig IgG/PE-CY5  PE-CY5標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG  0.1ml
56903 Donkey Anti-Guinea pig IgG/APC  APC標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG  0.1ml
56904 Donkey Anti-Guinea pig IgG/Alexa Fluor 350  Alexa Fluor 350標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG  0.1ml
56905 Donkey Anti-Guinea pig IgG/Alexa Fluor 488  Alexa Fluor 488標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG  0.1ml
56906 Donkey Anti-Guinea pig IgG/Alexa Fluor 555  Alexa Fluor 555標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG  0.1ml
56907 Donkey Anti-Guinea pig IgG/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG  0.1ml
56908 Donkey Anti-Guinea pig IgG/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG  0.1ml
56909 Donkey Anti-Guinea pig IgG/PE-Cy7  PE-Cy7標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG  0.1ml
56910 Donkey Anti-Guinea pig IgG/FITC  FITC標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG  0.3ml
56911 Donkey Anti-Guinea pig IgG/RBITC  羅丹明標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG  0.1ml
56912 Mouse Anti-human IgG(3D3)/RBITC  羅丹明標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體  0.1ml
56913 Mouse Anti-human IgG(3D3)/FITC  FITC標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體  0.1ml
56914 Mouse Anti-human IgG(3D3)/Gold  膠體金標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體  0.5ml
56915 Mouse Anti-human IgG(3D3)/Cy3  Cy3標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體  0.1ml
56916 Mouse Anti-human IgG(3D3)/Cy5  Cy5標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體  0.1ml
56917 Mouse Anti-human IgG(3D3)/Cy5.5  Cy5.5標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體  0.1ml
56918 Mouse Anti-human IgG(3D3)/Cy7  Cy7標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體  0.1ml
56919 Mouse Anti-human IgG(3D3)/PE  PE標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體  0.1ml
56920 Mouse Anti-human IgG(3D3)/PE-Cy3  PE-Cy3標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體  0.1ml
56921 Mouse Anti-human IgG(3D3)/PE-CY5  PE-CY5標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體  0.1ml
56922 Mouse Anti-human IgG(3D3)/APC  APC標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體  0.1ml
56923 Mouse Anti-human IgG(3D3)/Alexa Fluor 350  Alexa Fluor 350標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體  0.1ml
56924 Mouse Anti-human IgG(3D3)/Alexa Fluor 488  Alexa Fluor 488標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體  0.1ml
56925 Mouse Anti-human IgG(3D3)/Alexa Fluor 555  Alexa Fluor 555標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體  0.1ml
56926 Mouse Anti-human IgG(3D3)/Alexa人抗平滑肌抗體(ASMA)ELISA試劑盒 Fluor 647  Alexa Fluor 647標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體  0.1ml
56927 Mouse Anti-human IgG(3D3)/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體  0.1ml
56928 Mouse Anti-human IgG(3D3)/PE-Cy7  PE-Cy7標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體  0.1ml
56929 Mouse Anti-human IgG(3D3)/HRP  辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體  0.1ml
56930 Mouse Anti-human IgG(3D3)/AP  堿性磷酸酶（AP）標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體  0.1ml
56931 Mouse Anti-human IgG(3D3)/Bio  *標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體  0.1ml

下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因，并給出相應(yīng)的解決辦法：
1 選擇試劑：選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑，嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣：可能原因： 
1）血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣； 
2）手工操作中，加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí))； 3）加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法： 
1） 標(biāo)本為血清：將血液先自然存放1-2小時(shí)后，再用3000rmp離心15分鐘；標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒*混合5-10次，放置一段時(shí)間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測(cè)，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。 
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。 
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。 
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 
5) 標(biāo)本較多時(shí)，請(qǐng)分批操作。
3 孵育：可能原因： 
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗*； 
2) 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng)，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周?chē)?，難以清洗*。解決辦法： 
1) 貼封片或加蓋； 
2) 按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板：可能原因： 
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。 
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí)，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不*；洗板針堵塞，抽吸不*；洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差。 
3) 反應(yīng)板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。 解決辦法： 
1) 保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙（選擇干凈、無(wú)或少塵的吸水材料）上輕輕拍干； 
2) 合理安排，或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5人抗平滑肌抗體(ASMA)ELISA試劑盒顯色：可能原因： 
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或使用過(guò)期顯色劑； 
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法： 
1) 顯色劑盡量在臨用前配制，堅(jiān)持不用過(guò)期顯色劑，肉眼可見(jiàn)淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用； 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流； 
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止：可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽(yáng)性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板：如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過(guò)程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化，有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
在實(shí)際操作中，除了選擇優(yōu)良試劑外，必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作，同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng)，以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本，才能保證檢測(cè)質(zhì)量。現(xiàn)在國(guó)內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀，這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。
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