人抗多發(fā)性肌炎硬皮病抗體(PM-Scl/PM-1)ELISA試劑盒實驗ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法：
1)目測定性法：加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后，肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照；與陰性對照的顏色接近者，判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2～3SD，作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P／N值(陽性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽性；P／N值小于2．1，但大于1．5為可疑；P／N小于1．5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人抗多發(fā)性肌炎硬皮病抗體(PM-Scl/PM-1)ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給客戶帶來一些啟發(fā)，提高試驗質(zhì)量。

56326 Rabbit Anti-Biotin/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗*抗體IgG  0.1ml
56327 Rabbit Anti-Biotin/PE-Cy7  PE-Cy7標(biāo)記的兔抗*抗體IgG  0.1ml
56328 Rabbit Anti-Biotin/FITC  FITC標(biāo)記的兔抗*抗體IgG  0.1ml
56329 Rabbit Anti-Biotin/Gold  膠體金標(biāo)記的兔抗*抗體IgG  0.5ml
56330 Rabbit Anti-Biotin/RBITC  羅丹明標(biāo)記的兔抗*抗體IgG  0.1ml
56331 Rabbit Anti-Biotin/HRP  辣根過氧化物酶標(biāo)記的兔抗*抗體IgG  0.1ml
56332 Rabbit Anti-Biotin/AP  堿性磷酸酶（AP）標(biāo)記的兔抗*抗體IgG  0.1ml
56333 Rabbit Anti-Biotin/Bio  *標(biāo)記的兔抗*抗體IgG  0.1ml
56334 Rabbit Anti-Bov IgG/Bio  *標(biāo)記的兔抗牛IgG   0.1ml
56335 Rabbit Anti-Bov IgG/Cy3  Cy3標(biāo)記的兔抗牛IgG   0.1ml
56336 Rabbit Anti-Bov IgG/Cy5  Cy5標(biāo)記的兔抗牛IgG   0.1ml
56337 Rabbit Anti-Bov IgG/Cy5.5  Cy5.5標(biāo)記的兔抗牛IgG   0.1ml
56338 Rabbit Anti-Bov IgG/Cy7  Cy7標(biāo)記的兔抗牛IgG   0.1ml
56339 Rabbit Anti-Bov IgG/PE  PE標(biāo)記的兔抗牛IgG   0.1ml
56340 Rabbit Anti-Bov IgG/PE-Cy3  PE-Cy3標(biāo)記的兔抗牛IgG   0.1ml
56341 Rabbit Anti-Bov IgG/PE-CY5  PE-CY5標(biāo)記的兔抗牛IgG   0.1ml
56342 Rabbit Anti-Bov IgG/APC  APC標(biāo)記的兔抗牛IgG   0.1ml
56343 Rabbit Anti-Bov IgG/Alexa Fluor 350  Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗牛IgG   0.1ml
56344 Rabbit Anti-Bov IgG/Alexa Fluor 488  Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗牛IgG   0.1ml
56345 Rabbit Anti-Bov IgG/Alexa Fluor 555  Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗牛IgG   0.1ml
56346 Rabbit Anti-Bov IgG/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗牛IgG   0.1ml
56347 Rabbit Anti-Bov IgG/AP  堿性磷酸酶（AP）標(biāo)記的兔抗牛IgG   0.1ml
56348 Rabbit Anti-Bov IgG/HRP  辣根過氧化物酶標(biāo)記的兔抗牛IgG   0.1ml
56349 Rabbit Anti-Bov IgG/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗牛IgG   0.1ml
56350 Rabbit Anti-Bov IgG/PE-Cy7  PE-Cy7標(biāo)記的兔抗牛IgG   0.1ml
56351 Rabbit Anti-Bov IgG/Gold  膠體金標(biāo)記的兔抗牛IgG   0.5ml
56352 Rabbit Anti-Bov IgG/RBITC  羅丹明標(biāo)記的兔抗牛IgG   0.3ml
56353 Rabbit Anti-Bov IgG/FITC  FITC標(biāo)記的兔抗牛IgG   0.3ml
56354 Rabbit Anti-Bovine IgM/FITC  FITC標(biāo)記的兔抗牛IgM  0.3ml
56355 Rabbit Anti-Bovine IgM/RBITC  羅丹明標(biāo)記的兔抗牛IgM  0.3ml
56356 Rabbit Anti-Bovine IgM/AP  堿性磷酸酶（AP）標(biāo)記的兔抗牛IgM  0.1ml
56357 Rabbit Anti-Bovine IgM/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗牛IgM  0.1ml
56358 Rabbit Anti-Bovine IgM/PE-Cy7  PE-Cy7標(biāo)記的兔抗牛IgM  0.1ml
56359 Rabbit Anti-Bovine IgM/Alexa Fluor 488  Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗牛IgM  0.1ml
56360 Rabbit Anti-Bovine IgM/Alexa Fluor 555  Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗牛IgM  0.1ml
56361 Rabbit Anti-Bovine IgM/HRP  辣根過氧化物酶標(biāo)記的兔抗牛IgM  0.1ml
56362 Rabbit Anti-Bovine IgM/Gold  膠體金標(biāo)記的兔抗牛IgM  2ml
56363 Rabbit Anti-Bovine IgM/Bio  *標(biāo)記的兔抗牛IgM  0.1ml
56364 Rabbit Anti-Bovine IgM/Cy3  Cy3標(biāo)記的兔抗牛IgM  0.1ml
56365 Rabbit Anti-Bovine IgM/Cy5  Cy5標(biāo)記的兔抗牛IgM  0.1ml
56366 Rabbit Anti-Bovine IgM/Cy5.5  Cy5.5標(biāo)記的兔抗牛IgM  0.1ml
56367 Rabbit Anti-Bovine IgM/Cy7  Cy7標(biāo)記的兔抗牛IgM  0.1ml
56368 Rabbit Anti-Bovine IgM/PE  PE標(biāo)記的兔抗牛IgM  0.1ml
56369 Rabbit Anti-Bovine IgM/PE-Cy3  PE-Cy3標(biāo)記的兔抗牛IgM  0.1ml
56370 Rabbit Anti-Bovine IgM/PE-CY5  PE-CY5標(biāo)記的兔抗牛IgM  0.1ml
56371 Rabbit Anti-Bovine IgM/APC  APC標(biāo)記的兔抗牛IgM  0.1ml
56372 Rabbit Anti-Bovine IgM/Alexa Fluor 350  Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗牛IgM  0.1ml
56373 Rabbit Anti-Bovine IgM/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗牛IgM  0.1ml
56374 Rabbit Anti-chicken IgG/Bio  *標(biāo)記的兔抗雞IgG  0.1ml
56375 Rabbit Anti-chicken IgG/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗雞IgG  0.1ml
56376 Rabbit Anti-chicken IgG/AP  人抗多發(fā)性肌炎硬皮病抗體(PM-Scl/PM-1)ELISA試劑盒堿性磷酸酶（AP）標(biāo)記的兔抗雞IgG  0.1ml
56377 Rabbit Anti-chicken IgG/HRP  辣根過氧化物酶標(biāo)記的兔抗雞IgG  0.1ml
56378 Rabbit Anti-chicken IgG/Alexa Fluor 350  Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗雞IgG  0.1ml
56379 Rabbit Anti-chicken IgG/Alexa Fluor 488  Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗雞IgG  0.1ml
56380 Rabbit Anti-chicken IgG/Alexa Fluor 555  Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗雞IgG  0.1ml

下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結(jié)果的原因，并給出相應(yīng)的解決辦法：
1 選擇試劑：選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑，嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣：可能原因： 
1）血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣； 
2）手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時)； 3）加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法： 
1） 標(biāo)本為血清：將血液先自然存放1-2小時后，再用3000rmp離心15分鐘；標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒*混合5-10次，放置一段時間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。 
2) 加樣后及時放入孵箱。 
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。 
4) 如果采用AT或其他全自動加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 
5) 標(biāo)本較多時，請分批操作。
3 孵育：可能原因： 
1) 孵育時未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗*； 
2) 孵育時間人為延長，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗*。解決辦法： 
1) 貼封片或加蓋； 
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間。
4 洗板：可能原因： 
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。 
2) 采用半自動洗板機洗板時，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不*；洗板針堵塞，抽吸不*；洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差。 
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法： 
1) 保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙（選擇干凈、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干； 
2) 合理安排，或多用幾臺洗板機。
5人抗多發(fā)性肌炎硬皮病抗體(PM-Scl/PM-1)ELISA試劑盒顯色：可能原因： 
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑； 
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法： 
1) 顯色劑盡量在臨用前配制，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用； 2) 加樣時保持顯色劑不外流； 
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止：可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板：如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化，有效提高檢測質(zhì)量。
在實際操作中，除了選擇優(yōu)良試劑外，必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作，同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評，以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本，才能保證檢測質(zhì)量?，F(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標(biāo)儀，這對于實現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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