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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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人抗磷脂酰*抗體(APSA)ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人抗磷脂酰*抗體(APSA)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測(cè)定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽(yáng)性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照;與陰性對(duì)照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2~3SD,作為陽(yáng)性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽(yáng)性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽(yáng)性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
我們將在人抗磷脂酰*抗體(APSA)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問(wèn)題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來(lái)一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
55310 SP-A 肺表面活性蛋白A抗體 0.1ml
55311 SPA-1/SIPA-1 信號(hào)感應(yīng)增殖相關(guān)蛋白1抗體 0.1ml
55312 SPAG5/MAP126/Astrin 精子相關(guān)抗原5抗體 0.1ml
55313 SPARC 富含半*的酸性分泌蛋白抗體 0.2ml
55314 SP-B 肺表面活性蛋白B抗體 0.1ml
55315 SP-C 肺表面活性蛋白C抗體 0.1ml
55316 SP-D/PSPD 肺表面活性蛋白D抗體 0.1ml
55317 alpha 1 Spectrin/Spectrin α 血影蛋白/收縮蛋白抗體 0.1ml
55318 SPECA a-包襯蛋白抗體 0.2ml
55319 SPHK1 鞘氨醇激酶1抗體 0.2ml
55320 SPHK2 鞘氨醇激酶2抗體 0.2ml
55321 Spindlin 1 卵巢癌相關(guān)蛋白抗體 0.1ml
55322 SPY/CCDC99 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白99抗體 0.1ml
55323 Persephin PSP抗體 0.1ml
55324 SRC src原癌基因抗體 0.2ml
55325 Phospho-SRC-3 (Thr24) 磷酸化類固醇受體輔助活化因子-3 0.1ml
55326 phospho-Src(Tyr529) 磷酸化Src原癌基因抗體 0.1ml
55327 phospho-Src(Tyr418) 磷酸化Src原癌基因抗體 0.1ml
55328 phospho-Src(Tyr215) 磷酸化Src原癌基因抗體 0.1ml
55329 SRF/SAP2/MCM1 生長(zhǎng)激素釋放因子抗體(血清應(yīng)答因子) 0.2ml
55330 Phospho-SRF (Ser103) 磷酸化生長(zhǎng)激素釋放因子抗體(血清應(yīng)答因子) 0.1ml
55331 SREBP-1 *調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白1抗體 0.1ml
55332 SREBP-2 *調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白2抗體 0.1ml
55333 srGAP3 精神障礙相關(guān)GAP蛋白抗體 0.1ml
55334 synaptotagmin-2 突觸結(jié)合蛋白相關(guān)基因2抗體 0.1ml
55335 Synaptotagmin-4 突觸結(jié)合蛋白4抗體 0.1ml
55336 Synaptotagmin 5 突觸結(jié)合蛋白5抗體 0.2ml
55337 SPATA12 睪丸特異表達(dá)新基因5抗體 0.1ml
55338 SRG11/Spata17 睪丸凋亡基因抗體 0.1ml
55339 Synaptopodin 突觸極蛋白synaptopodin抗體 0.1ml
55340 SSA/52KDa Ro 核糖核蛋白抗原抗體 0.2ml
55341 SSB/La 干燥癥SSB/La抗體 0.2ml
55342 Sulfatase 1 硫酸酯酶1抗體 0.2ml
55343 SSDD/Steroid sulfatase 類固醇硫酸酯酶抗體 0.1ml
55344 Sulfatase 2 硫酸酯酶2蛋白抗體 0.2ml
55345 SSEA3 階段特異性胚胎表面抗原-3抗體 0.1ml
55346 AKAP12/Gravin *抑制蛋白激酶C底物抗體 0.1ml
55347 CD15/Fut4/SSEA-1 階段特異性胚胎表面抗原-1抗體 0.1ml
55348 SSTR1 *受體1抗體 0.1ml
55349 SSTR2 *受體2抗體 0.1ml
55350 SSTR3 *受體3抗體 0.1ml
55351 SSTR4 *受體4抗體 0.1ml
55352 SSTR5 *受體5抗體 0.1ml
55353 StAR/StARD1 促黃體激素誘導(dǎo)蛋白抗體 0.2ml
55354 STARD5 促黃體激素誘導(dǎo)蛋白5抗體 0.2ml
55355 STAT1 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子1抗體 0.1ml
55356 phospho-STAT1 (Tyr701) 磷酸化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子1抗體 0.1ml
55357 phospho-STAT1 (Ser727) 磷酸化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子1抗體 0.1ml
55358 STAT2 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子2抗體 0.1ml
55359 Phospho-Stat2 (Tyr690) 磷酸化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子2抗體 0.1ml
55360 STEAP1 前列腺跨膜上皮1抗原抗體人抗磷脂酰*抗體(APSA)ELISA試劑盒 0.2ml
55361 phospho-STAT3 (Tyr705) 磷酸化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3抗體 0.1ml
55362 phospho-STAT3 (Ser727) 磷酸化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3抗體 0.1ml
55363 phospho-STAT5a(Tyr694) 磷酸化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子5a抗體 0.1ml
55364 phospho-STAT5a(Ser726) 磷酸化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子5a抗體 0.1ml
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑,嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測(cè),可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時(shí),請(qǐng)分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng),導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無(wú)或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5人抗磷脂酰*抗體(APSA)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或使用過(guò)期顯色劑;
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過(guò)期顯色劑,肉眼可見(jiàn)淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽(yáng)性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過(guò)程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化,有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng),以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本,才能保證檢測(cè)質(zhì)量?,F(xiàn)在國(guó)內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀,這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。
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