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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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人抗軟骨抗體(anti-cartilage-Ab)ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人抗軟骨抗體(anti-cartilage-Ab)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對(duì)照;與陰性對(duì)照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測物的含量。
我們將在人抗軟骨抗體(anti-cartilage-Ab)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
55032 phospho-c-Raf(Ser338/Tyr340) 磷酸化原癌基因c-Raf抗體 0.1ml
55033 phospho-c-Raf (Ser289) 磷酸化原癌基因c-Raf抗體 0.1ml
55034 phospho-c-Raf(Ser259) 磷酸化原癌基因c-Raf抗體 0.1ml
55035 phospho-c-Raf(Ser296) 磷酸化原癌基因c-Raf抗體 0.1ml
55036 phospho-c-Raf(Ser338) 磷酸化原癌基因c-Raf抗體 0.1ml
55037 phospho-c-Raf(Ser301) 磷酸化原癌基因c-Raf抗體 0.1ml
55038 phospho-c-Raf(Ser462) 磷酸化原癌基因c-Raf抗體 0.1ml
55039 phospho-c-Raf(Ser494) 磷酸化原癌基因c-Raf抗體 0.1ml
55040 phospho-c-Raf(Ser43) 磷酸化原癌基因c-Raf抗體 0.1ml
55041 phospho-c-Raf(Ser471) 磷酸化原癌基因c-Raf抗體 0.1ml
55042 phospho-c-Raf(Tyr341) 磷酸化原癌基因c-Raf抗體 0.1ml
55043 phospho-c-Raf(Thr269) 磷酸化原癌基因c-Raf抗體 0.1ml
55044 RASGRF1 Ras特異性*核苷酸釋放因子1 0.2ml
55045 Phospho-RasGRF1(Ser916) 磷酸化Ras特異性*核苷酸釋放因子1 0.1ml
55046 phospho-c-Raf(Ser339) 磷酸化原癌基因c-Raf抗體 0.1ml
55047 Phospho-RASGRF1(Ser929) 磷酸化Ras特異性*核苷酸釋放因子1 0.1ml
55048 RAR α 維甲酸受體-α 抗體 0.1ml
55049 RAR Beta 維甲酸受體β抗體 0.1ml
55050 RAR gamma/Retinoic Acid Receptor gamma 維甲酸受體γ抗體 0.2ml
55051 RASSF1A Ras相關(guān)區(qū)域家族1A抗體 0.1ml
55052 RASSF4 Ras相關(guān)區(qū)域家族蛋白4抗體 0.2ml
55053 RASSF2 Ras相關(guān)結(jié)構(gòu)域蛋白質(zhì)2抗體 0.2ml
55054 RASSF8 RAS家族關(guān)聯(lián)結(jié)構(gòu)域蛋白8抗體 0.2ml
55055 Pan-ras Pan ras抗體 0.1ml
55056 RCC1 染色體濃縮調(diào)控蛋白1抗體 0.2ml
55057 Phospho-RCC1 (Ser11) 磷酸化染色體濃縮調(diào)控蛋白1抗體 0.1ml
55058 phospho-Rb(Ser249) 視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤相關(guān)蛋白1抗體 0.1ml
55059 Phospho-Rb (Ser608) 磷酸化視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤相關(guān)蛋白1抗體 0.1ml
55060 Phospho-Rb (Ser807/Ser811) 磷酸化視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤相關(guān)蛋白1抗體 0.1ml
55061 Phospho-Rb (Thr821) 磷酸化視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤相關(guān)蛋白1抗體 0.1ml
55062 Phospho-Rb(Ser612) 磷酸化視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤相關(guān)蛋白1抗體 0.1ml
55063 Phospho-Rb(Ser788) 磷酸化視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤相關(guān)蛋白1抗體 0.1ml
55064 Phospho-Rb(Ser795) 磷酸化視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤相關(guān)蛋白1抗體 0.1ml
55065 Phospho-Rb(Thr826) 磷酸化視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤相關(guān)蛋白1抗體 0.1ml
55066 Rat secretory IgA 分泌型免疫球蛋白A抗體 0.2ml
55067 RECK 金屬蛋白酶抑制因子RECK抗體 0.2ml
55068 REG4/RELP 再生基因蛋白4抗體 0.2ml
55069 RELN/Reelin 絡(luò)絲蛋白抗體 0.1ml
55070 Rbms3 抑癌基因Rbms3抗體 0.1ml
55071 RET/C ret 指狀蛋白R(shí)ET抗體 0.2ml
55072 Phospho-Ret (Tyr905) 磷酸化指狀蛋白R(shí)ET抗體 0.1ml
55073 Phospho-Ret (Tyr1062) 磷酸化指狀蛋白R(shí)ET抗體 0.1ml
55074 Resistin 抵抗素抗體 0.1ml
55075 Resistin 抵抗素抗體 0.1ml
55076 RELMa/RELM alpha 抵抗素樣分子α抗體 0.2ml
55077 RelB 核轉(zhuǎn)錄因子NFKB-RelB蛋白抗體 0.2ml
55078 Phospho-RelB(Ser552) 磷酸化核轉(zhuǎn)錄因子NFKB-RelB蛋白抗體 0.1ml
55079 Phospho-RelB(Ser573) 磷酸化核轉(zhuǎn)錄因子NFKB-RelB蛋白抗體 0.1ml
55080 Reprimo 細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的糖基化蛋白抗體 0.1ml
55081 C-REL 淋巴細(xì)胞衍生C-型凝集素抗體 0.2ml
55082 RGS2 G蛋白信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)節(jié)因子2抗體 0.1ml
55083 RGS5 G蛋白信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)節(jié)因子5抗體人抗軟骨抗體(anti-cartilage-Ab)ELISA試劑盒 0.2ml
55084 RGS19 G蛋白信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)節(jié)因子19抗體 0.2ml
55085 phospho-RGS19(Ser22) 磷酸化G蛋白信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)節(jié)因子19抗體 0.1ml
55086 phospho-RGS19(Ser24) 磷酸化G蛋白信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)節(jié)因子19抗體 0.1ml
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時(shí),請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時(shí)間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5人抗軟骨抗體(anti-cartilage-Ab)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng),以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本,才能保證檢測質(zhì)量?,F(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀,這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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