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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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人抗網(wǎng)硬蛋白抗體(ARA)ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人抗網(wǎng)硬蛋白抗體(ARA)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測(cè)定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽(yáng)性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照;與陰性對(duì)照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2~3SD,作為陽(yáng)性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽(yáng)性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽(yáng)性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
我們將在人抗網(wǎng)硬蛋白抗體(ARA)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問(wèn)題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來(lái)一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
54810 PIRH2 泛素連接酶抗體 0.1ml
54811 Pin1 肽基脯氨酞順?lè)串悩?gòu)酶Pinl抗體 0.1ml
54812 Phospho-Pin1 (Ser16) 磷酸化肽基脯氨酞順?lè)串悩?gòu)酶Pinl抗體 0.1ml
54813 PI 3 Kinase p85 beta 磷脂酰肌醇激酶p85β抗體 0.1ml
54814 phospho-PIK3R2(Tyr467) 磷酸化磷脂酰肌醇激酶p85β抗體 0.1ml
54815 PIWIL1/Miwi piwi樣1蛋白抗體 0.1ml
54816 Piwil2/Mili piwi樣2蛋白抗體 0.2ml
54817 PCK1 磷酸烯醇丙酮酸羧激酶抗體 0.2ml
54818 PCK2 磷酸羧化酶2抗體 0.2ml
54819 PKA/PKAcat/PKACB 蛋白激酶A抗體 0.1ml
54820 Phospho-PRKACB(Thr198) 磷酸化蛋白激酶C亞性抗體 0.1ml
54821 PKA C alpha+beta 蛋白激酶C抗體 0.1ml
54822 phospho-PKA beta(Ser338) 磷酸化蛋白激酶Aβ抗體 0.1ml
54823 PKA gamma 蛋白激酶Aγ抗體 0.2ml
54824 PKA R2/PKA IIα 蛋白激酶A受體2α亞基抗體 0.2ml
54825 phospho-PKA R2 (Ser96) 磷酸化蛋白激酶A受體2α亞基抗體 0.1ml
54826 PKA regulatory subunit I beta 蛋白激酶受體相關(guān)1β抗體 0.2ml
54827 PKB/AKT-1 蛋白激酶B 0.1ml
54828 PRKAR1 蛋白激酶A調(diào)節(jié)亞基a1抗體 0.1ml
54829 PLASTIN3/T Plastin 絲束蛋白T Plastin抗體 0.2ml
54830 PLAP/Phospholipase A2 activator protein 磷脂酶A2激活蛋白抗體 0.1ml
54831 PLC beta 3 磷酯酶Cβ3抗體 0.1ml
54832 Phospho-PLC beta3 (Ser537) 磷酸化磷酯酶Cβ3抗體 0.1ml
54833 Phospho-PLC beta3 (Ser1105) 磷酸化磷酯酶Cβ3抗體 0.1ml
54834 PKC beta 1/2 蛋白激酶C beta 1/2抗體 0.1ml
54835 phospho-PRKCZ(Thr500) 磷酸化蛋白激酶C(T500)抗體 0.2ml
54836 phospho-PKC beta 1/2(Thr500) 磷酸化蛋白激酶C β1/β2(Thr500)抗體 0.1ml
54837 Phospho-PKC alpha/beta II (Thr638/641) 磷酸化蛋白激酶C α/β2抗體 0.1ml
54838 PKC alpha 蛋白激酶C α抗體 0.2ml
54839 PLCG 2/PLC gamma 2 磷酯酶Cγ2抗體 0.2ml
54840 Phospho-PLCG2(Tyr1217) 磷酸化磷酯酶Cγ2抗體 0.1ml
54841 Phospho-PLC gamma 2 (Tyr759) 磷酸化磷酯酶Cγ2抗體 0.1ml
54842 PLCG 1/PLC gamma 1 磷酯酶Cγ1抗體 0.2ml
54843 Phospho-PLC gamma 2(Tyr753) 磷酸化磷酯酶Cγ2抗體 0.1ml
54844 Phospho-PLC gamma 1 (Tyr771) 磷酸化磷酯酶Cγ1抗體 0.1ml
54845 Phospho-PLC gamma 1(Ser1248) 磷酸化磷酯酶Cγ1抗體 0.1ml
54846 Phospho-PLC γ1 (Tyr783) 磷酸化磷酯酶Cγ1抗體 0.1ml
54847 Phospho-PLC gamma 1/PLCG1(Tyr775) 磷酸化磷酯酶Cγ1抗體 0.1ml
54848 phospho-PRKCZ(Thr410) 磷酸化蛋白激酶C(T410)抗體 0.1ml
54849 PKC epsilon 蛋白激酶C抗體 0.1ml
54850 PKC-γ/SCA14 蛋白激酶C亞型G抗體 0.2ml
54851 Phospho-PKC gamma (Thr514) 磷酸化蛋白激酶C亞型G抗體 0.1ml
54852 Phospho-PKC gamma (Thr674) 磷酸化蛋白激酶C亞型G抗體 0.1ml
54853 PKC delta 蛋白激酶C亞性D型抗體 0.2ml
54854 phospho-PKC delta (Tyr52) 磷酸化蛋白激酶C亞性D型抗體 0.1ml
54855 phospho-PKC delta (Thr505) 磷酸化蛋白激酶C亞性D型抗體 0.1ml
54856 phospho-PKC delta (Tyr311) 磷酸化蛋白激酶C亞性D型抗體 0.1ml
54857 phospho-PRKCB(Ser660) 磷酸化蛋白激酶C抗體 0.1ml
54858 phospho-PKC delta (Ser645) 磷酸化蛋白激酶C亞性D型抗體 0.1ml
54859 phospho-PRKCB(Ser642) 磷酸化蛋白激酶C抗體 0.1ml
54860 phospho-PRKCA(Ser657+Tyr658) 磷酸化蛋白激酶C抗體 0.1ml
54861 phospho-PRKCA(Thr637) 人抗網(wǎng)硬蛋白抗體(ARA)ELISA試劑盒 磷酸化蛋白激酶C抗體 0.1ml
54862 PLAU/UPA/Urokinase *型纖溶酶原激活因子抗體 0.1ml
54863 PLAUR/CD87 *型纖溶酶原激活因子受體抗體 0.1ml
54864 Plasminogen 纖維蛋白溶酶原抗體 0.1ml
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑,嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測(cè),可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時(shí),請(qǐng)分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng),導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無(wú)或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5人抗網(wǎng)硬蛋白抗體(ARA)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或使用過(guò)期顯色劑;
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過(guò)期顯色劑,肉眼可見(jiàn)淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽(yáng)性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過(guò)程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化,有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng),以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本,才能保證檢測(cè)質(zhì)量。現(xiàn)在國(guó)內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀,這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。
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