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上海紀寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時間:2017-01-20 08:21:35瀏覽次數(shù):122次
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人抗核仁纖維蛋白抗體(AFA/snoRNP/U3RNP)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯(lián)免疫實驗得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結(jié)果。
人抗核仁纖維蛋白抗體(AFA/snoRNP/U3RNP)ELISA試劑盒實驗ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人抗核仁纖維蛋白抗體(AFA/snoRNP/U3RNP)ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗質(zhì)量。
54523 OLFM1 嗅球蛋白1抗體 0.2ml
54524 OPCML 阿片樣物質(zhì)結(jié)合蛋白/細胞粘附分子樣蛋白抗體 0.1ml
54525 OPG 骨保護蛋白/護骨素抗體 0.1ml
54526 RANK/CD265 核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB受體抗體(核因子kB受體活化因子) 0.1ml
54527 OPGL/RANKL/ODF 骨保護蛋白配體抗體(破骨細胞分化因子) 0.1ml
54528 OPN/BSP 骨橋蛋白抗體(分泌型磷蛋白1)人 0.1ml
54529 OPN/BSP 骨橋蛋白抗體(分泌型磷蛋白1) 0.1ml
54530 Sigma1R 衰老相關(guān)基因8蛋白抗體 0.2ml
54531 Orexin-A 增食欲素A/欲激素A 0.1ml
54532 OSM/Oncostatin M 抑瘤素M抗體 0.1ml
54533 OSMR/OSMRB 抑瘤素M受體抗體 0.1ml
54534 Osterix 成骨相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子抗體 0.1ml
54535 OXCT1 含氧酸*轉(zhuǎn)移酶1抗體 0.2ml
54536 Os05g0477200 protein 水稻白葉枯病菌Os05g0477200蛋白抗體 1ml
54537 Oxytocin R 催產(chǎn)素受體(*受體)抗體 0.1ml
54538 OVA/SerpinB8 雞卵白蛋白/卵清蛋白抗體 0.1ml
54539 CD200R/Orexin receptor 丘腦分泌素受體抗體(食欲素受體) 0.1ml
54540 P2X2/ATP receptor 嘌呤受體P2X2抗體 0.1ml
54541 P2RX3/ATP receptor 嘌呤受體P2X3抗體 0.1ml
54542 RBBP5 視網(wǎng)膜母細胞瘤結(jié)合蛋白5抗體 0.2ml
54543 RBBP6/P2P-R 增殖潛能相關(guān)蛋白抗體 0.1ml
54544 P14ARF 抑癌基因p14抗體 0.1ml
54545 CDKN2A/P16 抑癌基因p16抗體 0.1ml
54546 phospho-CDKN2A/P16 (Ser140) 磷酸化抑癌基因p16抗體 0.1ml
54547 phospho-CDKN2A/P16 (Ser152) 磷酸化抑癌基因p16抗體 0.1ml
54548 phospho-CDKN2A/P16 (Ser8) 磷酸化抑癌基因p16抗體 0.1ml
54549 CDKN2A/p19ARF p19ARF抑癌基因抗體 0.1ml
54550 P21/CDKN1A p21蛋白抗體 0.1ml
54551 phospho-CDKN1A/P21 (Thr145) 磷酸化p21蛋白抗體 0.1ml
54552 phospho-CDKN1A/P21 (Thr57) 磷酸化p21蛋白抗體 0.1ml
54553 phospho-CDKN1A/P21 (Ser146) 磷酸化p21蛋白抗體 0.1ml
54554 phospho-CDKN1A/P21 (Ser130) 磷酸化p21蛋白抗體 0.1ml
54555 CDKN1B/P27kip1 P27抗體/周期素依賴激酶抑制劑 0.1ml
54556 phospho-CDKN1B/P27kip1 (Ser10) 磷酸化P27抗體/周期素依賴激酶抑制劑 0.1ml
54557 phospho-CDKN1B/P27kip1 (Thr157) 磷酸化P27抗體/周期素依賴激酶抑制劑抗體 0.1ml
54558 phospho-CDKN1B/P27kip1 (Thr187) 磷酸化P27抗體/周期素依賴激酶抑制劑抗體 0.1ml
54559 phospho-CDKN1B/P27kip1 (Ser178) 磷酸化P27抗體/周期素依賴激酶抑制劑抗體 0.1ml
54560 phospho-CDKN1B/P27kip1 (Thr198) 磷酸化P27抗體/周期素依賴激酶抑制劑抗體 0.1ml
54561 P2Y1R/P2ry1 P2Y1受體抗體/嘌呤受體抗體 0.1ml
54562 P2Y4 P2Y4受體抗體 0.1ml
54563 P311 protein 神經(jīng)再生相關(guān)蛋白抗體 0.1ml
54564 P4HB 蛋白二硫鍵異構(gòu)酶P4HB抗體 0.2ml
54565 p38MAPK/MAPK14/p38Alpha 絲裂原活化蛋白激酶p38α抗體 0.1ml
54566 P38 MAPK(Phospho-Thr180/Tyr182) 磷酸化-絲裂原活化蛋白激酶p38抗體(P-p38 MAPK) 0.1ml
54567 phospho-p38 MAPK/MAPK14(Thr180/Tyr182) 磷酸化絲裂原活化蛋白激酶p38抗體 0.1ml
54568 MKK3/MEK3 絲裂原活化蛋白激酶MKK3抗體 0.1ml
54569 Phospho-MKK3(Ser189)/MKK6(Ser207) 磷酸化絲裂原活化蛋白激酶MKK3/6抗體 0.1ml
54570 MEK5/MAP2K5 絲裂原活化蛋白激酶激酶5抗體 0.1ml
54571 phospho-MEK5(Ser142) 磷酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶5抗體 0.1ml
54572 SEK1/MKK4 人抗核仁纖維蛋白抗體(AFA/snoRNP/U3RNP)ELISA試劑盒絲裂原活化蛋白激酶激酶4抗體 0.2ml
54573 Phospho-MKK4(Ser80) 磷酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶4抗體 0.1ml
54574 Phospho-SEK1/MKK4 (Ser257) 磷酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶4抗體 0.1ml
54575 Phospho-SEK1/MKK4 (Thr261) 磷酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶4抗體 0.1ml
54576 Phospho-SEK1/MKK4 (Ser257/Thr261) 磷酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶4抗體 0.1ml
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人抗核仁纖維蛋白抗體(AFA/snoRNP/U3RNP)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴謹?shù)墓ぷ髯黠L檢測每一份標本,才能保證檢測質(zhì)量?,F(xiàn)在國內(nèi)已有相當數(shù)量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現(xiàn)ELISA標準化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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