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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時間:2017-02-11 13:42:14瀏覽次數(shù):162次
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人血管緊張素Ⅱ受體1抗體(ATⅡR1)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯(lián)免疫實驗得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人血管緊張素Ⅱ受體1抗體(ATⅡR1)ELISA試劑盒實驗ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人血管緊張素Ⅱ受體1抗體(ATⅡR1)ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗質(zhì)量。
54061 phospho-MEK2(Tyr78) 磷酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶2抗體 0.1ml
54062 Matrilin 1 軟骨基質(zhì)蛋白抗體 0.2ml
54063 phospho-MEK2(Thr394) 磷酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶2抗體 0.1ml
54064 phospho-MEK2(Ser226) 磷酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶2抗體 0.1ml
54065 MAP3K5/ASK1/MEKK5 細(xì)胞凋亡信號調(diào)節(jié)激酶1抗體 0.1ml
54066 phospho-ASK1 (Ser966) 磷酸化細(xì)胞凋亡信號調(diào)節(jié)激酶1抗體 0.1ml
54067 phospho-ASK1(Ser967) 磷酸化細(xì)胞凋亡信號調(diào)節(jié)激酶1抗體 0.2ml
54068 phospho-ASK1(Thr845) 磷酸化細(xì)胞凋亡信號調(diào)節(jié)激酶1抗體 0.1ml
54069 phospho-ASK1(Ser83) 磷酸化細(xì)胞凋亡信號調(diào)節(jié)激酶1抗體 0.1ml
54070 phospho-ASK1(Ser1033) 磷酸化細(xì)胞凋亡信號調(diào)節(jié)激酶1抗體 0.1ml
54071 phospho-MEK3(Thr222) 磷酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶3抗體 0.1ml
54072 Maspin 抑癌基因抗體 0.1ml
54073 MASP 甘露聚糖結(jié)合凝集素*肽酶1抗體 0.2ml
54074 MAL MAL蛋白抗體 0.1ml
54075 MASP2 甘露聚糖結(jié)合凝集素*肽酶2抗體 0.1ml
54076 Matriptase 蛋白裂解酶(一種新的癌基因)抗體 0.1ml
54077 RbAp48 視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤結(jié)合蛋白P48抗體 0.2ml
54078 MBP 髓鞘堿性蛋白(磷脂堿性蛋白)抗體 0.1ml
54079 FAM123B/AMER1/Wilms tumor on the X 腎母細(xì)胞瘤基因X染色體蛋白抗體 0.2ml
54080 phospho-MBP(Thr232) 磷酸化髓鞘堿性蛋白抗體 0.1ml
54081 Cytomegalovirus pp65 巨細(xì)胞病毒PP65/CMV低基質(zhì)磷脂蛋白抗體 0.1ml
54082 phospho-MBP(Tyr203) 磷酸化髓鞘堿性蛋白抗體 0.1ml
54083 HCMV 人巨細(xì)胞病毒抗體 0.1ml
54084 HCMV UL23 人巨細(xì)胞病毒UL23抗體 0.1ml
54085 HCMV UL49 人巨細(xì)胞病毒UL49蛋白抗體 0.1ml
54086 HCMV UL49 人巨細(xì)胞病毒UL49蛋白抗體 0.2ml
54087 hnRNP F 異質(zhì)核糖核蛋白F抗體 0.2ml
54088 hnRNP L 異質(zhì)核糖核蛋白L抗體 0.2ml
54089 WNT4 信號通路Wnt4抗體 0.2ml
54090 Wnt6 信號通路Wnt6抗體 0.2ml
54091 Adenovirus 5 E1A 腺病毒早期E1A蛋白抗體 0.2ml
54092 MCP1/CCL2 單核細(xì)胞趨化蛋白1抗體 0.1ml
54093 MCP1/CCL2 單核細(xì)胞趨化蛋白1抗體 0.1ml
54094 MCP-2/CCL8 單核細(xì)胞趨化蛋白2抗體 0.2ml
54095 MCP-2/CCL8 單核細(xì)胞趨化蛋白2抗體(小鼠) 0.1ml
54096 MCP-3/CCL7 單核細(xì)胞趨化蛋白3抗體 0.1ml
54097 MCP-3/CCL7 單核細(xì)胞趨化蛋白3抗體 0.2ml
54098 CCL9/CCL10/MIP-1 gamma/SCYA10 巨噬細(xì)胞炎癥蛋白-1γ抗體 0.1ml
54099 Mast Cell Tryptase 肥大細(xì)胞蛋白酶7抗體 0.1ml
54100 TPSB2 肥大細(xì)胞類*β2 0.1ml
54101 MC-1R 黑皮質(zhì)素-1受體抗體 0.1ml
54102 MCSF Receptor 巨噬細(xì)胞集落刺激因子受體抗體 0.1ml
54103 MCSF/M-CSF 巨噬細(xì)胞克隆刺激因子抗體 0.1ml
54104 phospho-M-CSF Receptor(Tyr546) 磷酸化巨噬細(xì)胞集落刺激因子受體抗體 0.1ml
54105 phospho CSF1R (Tyr699) 磷酸化巨噬細(xì)胞集落刺激因子受體抗體 0.1ml
54106 phospho-M-CSF Receptor(Tyr708) 磷酸化巨噬細(xì)胞集落刺激因子受體抗體 0.1ml
54107 phospho-CSF1R (Tyr723) 磷酸化巨噬細(xì)胞集落刺激因子受體抗體 0.1ml
54108 phospho-M-CSF Receptor(Tyr809) 磷酸化巨噬細(xì)胞集落刺激因子受體抗體 0.1ml
54109 phospho-CSF1R(Tyr923) 磷酸化巨噬細(xì)胞集落刺激因子受體抗體 0.1ml
54110 MCT1 單羧酸轉(zhuǎn)運蛋白-1抗體 0.2ml
54111 MCM2 微小染色體維持缺陷蛋白2抗體 0.1ml
54112 MCM3 人血管緊張素Ⅱ受體1抗體(ATⅡR1)ELISA試劑盒微小染色體維持缺陷蛋白3抗體 0.2ml
54113 MCM5 微小染色體維持缺陷蛋白5抗體 0.1ml
54114 MCM7 微小染色體維持缺陷蛋白7抗體 0.2ml
54115 Mcl1/BCL2L3 髓樣分化蛋白2抗體 0.1ml
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機(jī)洗板時,洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機(jī)。
5人血管緊張素Ⅱ受體1抗體(ATⅡR1)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本,才能保證檢測質(zhì)量?,F(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標(biāo)儀,這對于實現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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