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上海紀寧酶聯科技有限公司
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人抗突觸前膜抗體(PsmAb)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯免疫實驗得到了廣泛的應用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。
人抗突觸前膜抗體(PsmAb)ELISA試劑盒實驗ELISA結果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人抗突觸前膜抗體(PsmAb)ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現問題的原因及解決辦法總結于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗質量。
53949 EDG4/LPA2 溶血磷脂酸受體蛋白2抗體 0.2ml
53950 EDG7/LPA3 溶血磷脂酸受體蛋白3抗體 0.2ml
53951 EDG6/SLP4 內皮細胞的分化蛋白6抗體 0.2ml
53952 Lpin1 protein Lpin1 抗體 0.2ml
53953 Lpin1 protein Lpin1 抗體 0.2ml
53954 LPL/PLASTIN2 脂蛋白脂酶抗體 0.1ml
53955 LPL protein 內皮脂肪酶 0.1ml
53956 Endothelial lipase 內皮脂肪酶抗體 0.2ml
53957 LPLUNC1 鼻咽癌癌基因抗體 0.1ml
53958 LRIG1 LRIG1抗體 0.2ml
53959 LPP/LIM protein 脂肪瘤相關蛋白抗體 0.1ml
53960 LRIG2 LRIG2抗體 0.2ml
53961 LRIG3 LRIG3抗體 0.2ml
53962 LRP/MVP 肺耐藥相關蛋白抗體 0.1ml
53963 LRP1/CD91 低密度脂蛋白受體相關蛋白1抗體 0.2ml
53964 phospho-LRP1(Ser4523) 磷酸化低密度脂蛋白受體相關蛋白1抗體 0.1ml
53965 Lrp2/Megalin 糖蛋白gp330抗體 0.2ml
53966 LRP6 低密度脂蛋白受體相關蛋白6抗體 0.2ml
53967 Phospho-LRP6 (Ser1490) 磷酸化低密度脂蛋白受體相關蛋白6抗體 0.1ml
53968 Phospho-LRP6(Thr1479) 磷酸化低密度脂蛋白受體相關蛋白6抗體 0.1ml
53969 LRP5 低密度脂蛋白受體相關蛋白5抗體 0.1ml
53970 phospho-LRP5(Thr1492) 磷酸化低密度脂蛋白受體相關蛋白5抗體 0.1ml
53971 LRRC4 腦瘤相關基因抗體 0.2ml
53972 LRRK2 富*重復激酶2抗體 0.2ml
53973 LTA4H 白三烯A4水解酶抗體 0.1ml
53974 LTB4-R1/BLTR 白三烯B4受體1抗體 0.1ml
53975 LTB4-R2 白三烯B4受體2抗體 0.1ml
53976 Iumbrokinase *抗體 0.1ml
53977 Lxn/Latexin 羧肽酶抑制劑抗體 0.1ml
53978 LXR alpha 肝臟X受體抗體 0.1ml
53979 Ly-6G/Gr-1 淋巴細胞抗原6G抗體 0.2ml
53980 LY-86/MD-1 MD-1蛋白抗體 0.1ml
53981 LY-96/MD-2 MD-2蛋白抗體 0.1ml
53982 Lysozyme *抗體 0.1ml
53983 Lyn 膜相關蛋白*激酶Lyn抗體 0.2ml
53984 Phospho-Lyn (Tyr507) 膜相關蛋白*激酶Lyn抗體 0.1ml
53985 Phospho-Lyn (Tyr396) 磷酸化膜相關蛋白*激酶Lyn抗體 0.1ml
53986 Phospho-Lyn (Tyr497) 磷酸化膜相關蛋白*激酶Lyn抗體 0.1ml
53987 LYVE-1 淋巴管內皮透明質酸受體抗體 0.1ml
53988 LYK5 蛋白激酶LYK5抗體 0.2ml
53989 LZTFL1 *拉鏈轉錄因子樣1抗體 0.1ml
53990 M2-PK/PKM2 丙酮酸激酶-M2抗體 0.1ml
53991 Phospho-PKM2 (Tyr105) 磷酸化丙酮酸激酶M2抗體 0.1ml
53992 M2-PK/PKM2 小鼠抗丙酮酸激酶-M2抗體 0.1ml
53993 M2-PK (pyruvate Kinase M2) 丙酮酸激酶-M2 0.1ml
53994 Integrin alpha E2 整合素alpha E2 抗體 0.1ml
53995 Integrin alpha L/CD11a 整合素αL抗體 0.1ml
53996 CD11b/Integrin αM/Integrin Alpha M 整合素αM/巨噬細胞表面分子抗體 0.1ml
53997 Integrin Alpha X/CD11c 整合素αX抗體 0.1ml
53998 MARCO 巨噬細胞清道夫受體抗體人抗突觸前膜抗體(PsmAb)ELISA試劑盒 0.2ml
53999 BST1/CD157 骨髓基質干細胞抗原1抗體 0.2ml
54000 MARCKS *蛋白激酶C底物Marcks抗體 0.2ml
54001 Phospho-MARCKS (Ser152/156) 磷酸化*蛋白激酶C底物Marcks抗體 0.1ml
54002 Phospho-MARCKS (Ser162) 磷酸化*蛋白激酶C底物Marcks抗體 0.1ml
54003 Phospho-MARCKS(Ser170) 磷酸化*蛋白激酶C底物Marcks抗體 0.1ml
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質量優(yōu)良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人抗突觸前膜抗體(PsmAb)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質量。
在實際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內質控、室間質評,以嚴謹的工作作風檢測每一份標本,才能保證檢測質量?,F在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
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