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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時間:2017-02-23 11:20:47瀏覽次數(shù):176次
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人NOGO-A抗體(Nogo-A Ab)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯(lián)免疫實驗得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人NOGO-A抗體(Nogo-A Ab)ELISA試劑盒實驗ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人NOGO-A抗體(Nogo-A Ab)ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗質(zhì)量。
53669 IL-33 白介素33抗體 0.1ml
53670 IL-1 Alpha 白介素1α/IL-1α抗體 0.1ml
53671 IL-1 Beta/IL-1B 白介素1β抗體 IL-1β 0.1ml
53672 IL-2 白介素2抗體(大、小鼠) 0.2ml
53673 IL-2 白介素2抗體 0.2ml
53674 IL-2 白介素2抗體 0.2ml
53675 IL-2 白介素2抗體(人) 0.2ml
53676 IL-2(H2E4) 白細(xì)胞介素-2單克隆抗體 0.2ml
53677 ITK/PSCTK2 IL-2誘導(dǎo)型T細(xì)胞激酶抗體 0.2ml
53678 IL-3 白介素3抗體 0.2ml
53679 IL-3(human) 白介素3抗體(人) 0.2ml
53680 IL-3R alpha/CD123 白介素3受體a鏈抗體 0.2ml
53681 IL-4 白介素4抗體 0.1ml
53682 IL-4 (human) 白介素4抗體(人) 0.1ml
53683 IL-4R/CD124 白細(xì)胞介素4受體抗體IL-4Rα 0.1ml
53684 IL-5 白細(xì)胞介素5抗體 0.1ml
53685 IL5RA/CD125 白介素-5受體α鏈抗體IL-5Rα 0.1ml
53686 IL-6 白介素6 0.1ml
53687 IL-6 白介素6 0.1ml
53688 IL-6 白介素6抗體 0.1ml
53689 IL-6 白介素6抗體 0.1ml
53690 IL-6 (NT) 白介素6抗體(N端) 0.1ml
53691 IL-6 白介素6抗體 0.1ml
53692 IL-7 白介素7抗體 0.1ml
53693 IL-6R alpha 白細(xì)胞介素6受體α抗體IL-6Rα 0.1ml
53694 IL-6R Beta/CD130/gp130 白細(xì)胞介素6受體β抗體IL-6Rβ 0.1ml
53695 IL-8/CXCL8 白介素8抗體 0.1ml
53696 IL-7Ra/CD127 白細(xì)胞介素-7受體a抗體 0.2ml
53697 phospho-IL-7Ra(Tyr449) 磷酸化白細(xì)胞介素-7受體a抗體 0.1ml
53698 Mitofilin/IMMT 線粒體內(nèi)膜蛋白抗體 0.2ml
53699 ILK-1 整合素連接激酶-1抗體 0.2ml
53700 phospho-ILK-1(Thr173) 磷酸化整合素連接激酶1抗體 0.1ml
53701 phospho-ILK-1(Ser246) 磷酸化整合素連接激酶1抗體 0.1ml
53702 phospho-ILK-1(Ser259) 磷酸化整合素連接激酶1抗體 0.1ml
53703 ING1/p33 生長抑制因子基因1抗體 0.1ml
53704 IGF2BP3/IMP3 胰島素樣生長因子ⅡmRNA結(jié)合蛋白3抗體 0.1ml
53705 Inhibin Alpha 抑制素α抗體 Inhibin α 0.1ml
53706 Inhibin beta A/Activin A 抑制素βA抗體 Inhibin βA 0.2ml
53707 Inhibin beta B 抑制素βB/Inhibin β B抗體 0.1ml
53708 Inhibin Beta C 抑制素βC抗體 0.2ml
53709 Insig1 胰島素誘導(dǎo)基因1抗體 0.2ml
53710 Insulin 胰島素抗體 0.1ml
53711 Insulin 胰島素抗體 0.1ml
53712 Insulin 抗*抗體 0.1ml
53713 Insulin(1D4:) 豬胰島素單克隆抗體 0.1ml
53714 Insulin(1G11) *單克隆抗體 0.1ml
53715 Insulin Receptor/CD220 胰島素受體抗體 0.1ml
53716 Insulin Receptor alpha 胰島素受體α抗體 0.1ml
53717 Insulin Receptor Alpha 胰島素受體α抗體 0.1ml
53718 Insulin Receptor Beta 胰島素受體β抗體 0.1ml
53719 Phospho-Insulin Receptor Beta(Tyr1345) 磷酸化胰島素受體β抗體 0.1ml
53720 Phospho-Insulin Receptor Beta(Tyr1361) 磷酸化胰島素受體β抗體 0.1ml
53721 Phospho-Insulin Receptor Beta(Tyr1185) 磷酸化胰島素受體β抗體 0.1ml
53722 Insulin 胰島素蛋白抗體 人NOGO-A抗體(Nogo-A Ab)ELISA試劑盒 0.1ml
53723 Integrin alpha 3/CD49c 整合素α3抗體 0.1ml
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人NOGO-A抗體(Nogo-A Ab)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本,才能保證檢測質(zhì)量。現(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標(biāo)儀,這對于實現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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