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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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人透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白(HABP)ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對試驗(yàn)的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白(HABP)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測物的含量。
我們將在人透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白(HABP)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
53167 GLUT1 葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1抗體 0.1ml
53168 GLUT2 葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2抗體 0.1ml
53169 GLUT3 葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白3抗體 0.1ml
53170 GLUT4 葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4抗體 0.1ml
53171 GLUT5 葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白5抗體 0.1ml
53172 GLUT8 葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白8抗體 0.2ml
53173 GlyR alpha 1/2/3 *受體alpha 1/2/3型抗體 0.1ml
53174 GLUT12 葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白12抗體 0.2ml
53175 E1 glycoprotein 風(fēng)疹病毒糖蛋白抗體 0.2ml
53176 GM1(GS) 神經(jīng)節(jié)苷酯抗體 0.1ml
53177 GM-CSF 粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞克隆刺激因子抗體 0.1ml
53178 GM-CSF 粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞克隆刺激因子抗體 0.1ml
53179 GM-CSFR alpha/CD116/CSF2RA 粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子受體α抗體 0.2ml
53180 GM-CSFR β/CSF2RB 粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子受體β抗體 0.2ml
53181 phospho-CSF2RB (Tyr766) 磷酸化粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子受體β抗體 0.1ml
53182 cGMP 環(huán)磷酸鳥苷抗體 0.2ml
53183 Fx1A 腎刷狀緣抗體 0.2ml
53184 GP65/SDFR1/NPTN 間質(zhì)細(xì)胞衍化因子受體1抗體 0.1ml
53185 GPA33 糖蛋白A33抗體 0.2ml
53186 GNG2 G蛋白γ2抗體/*核苷酸結(jié)合蛋白γ2抗體 0.2ml
53187 GNLY/NKG5 顆粒溶素抗體 0.1ml
53188 GNMT *-N-甲基轉(zhuǎn)移酶 0.2ml
53189 GPNMB/Osteoactivin GPNMB抗體 0.2ml
53190 glypican 1 磷脂?;嫉鞍拙厶?1抗體 0.2ml
53191 glypican 3/GPC3 磷脂酰基醇蛋白聚糖-3抗體 0.1ml
53192 Glypican 4 磷脂?;嫉鞍拙厶?4抗體 0.2ml
53193 Glypican 5 磷脂?;嫉鞍拙厶?5抗體 0.2ml
53194 Glycodelin A/PP14 胎盤蛋白14抗體 0.1ml
53195 Glypican 6 磷脂?;嫉鞍拙厶?6抗體 0.2ml
53196 Glucocorticoid receptor(GR) 糖皮質(zhì)激素受體抗體 0.1ml
53197 Phospho-Glucocorticoid Receptor (Ser211) 磷酸化糖皮質(zhì)激素受體抗體 0.1ml
53198 GOT2 谷草轉(zhuǎn)氨酶2抗體 0.1ml
53199 GRB2/ASH 生長因子受體結(jié)合蛋白2抗體 0.1ml
53200 GZMA/Granzyme A 顆粒酶A抗體 0.2ml
53201 GZMB/Granzyme B 顆粒酶B抗體 0.1ml
53202 GPAM 線粒體甘油3磷酸?;D(zhuǎn)移酶抗體 0.2ml
53203 Granzyme D/B/E/N/G/F/H 顆粒酶D/B/E/N/G/F/H抗體 0.1ml
53204 GPD1 甘油三磷酸脫氫酶1抗體 0.2ml
53205 GPD2 線粒體甘油三磷酸脫氫酶2抗體 0.2ml
53206 GRB10 生長因子受體結(jié)合蛋白10抗體 0.2ml
53207 Phospho-GRB10 (Tyr67) 磷酸化生長因子受體結(jié)合蛋白10抗體 0.1ml
53208 UTS2R/GPCR GPR14 G蛋白偶聯(lián)受體14抗體 0.1ml
53209 GPR15 G蛋白偶聯(lián)受體15抗體 0.1ml
53210 GNPAT 磷酸二羥丙酮?;D(zhuǎn)移酶抗體 0.2ml
53211 GREB1 乳腺癌雌激素調(diào)控蛋白GREB1抗體 0.1ml
53212 GRGDS(Gly-Arg-Gly-Asp-Ser) 兔抗粘附多肽抗體 0.2ml
53213 GPR30 G蛋白偶聯(lián)受體30抗體 0.1ml
53214 gremlin 骨形態(tài)形成蛋白拮抗蛋白抗體 0.1ml
53215 GnRHR *釋放激素受體抗體 0.1ml
53216 GRP75 G蛋白偶聯(lián)受體75抗體 0.2ml
53217 GPA/GYPA/CD235a 血型糖蛋白A/涎糖蛋白抗體 0.1ml
53218 GPR78 G蛋白偶聯(lián)受體78抗體人透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白(HABP)ELISA試劑盒 0.2ml
53219 KiSS1R/GPR54 G蛋白偶聯(lián)受體54抗體 0.1ml
53220 GPR109A/HM74A G蛋白偶聯(lián)受體109A抗體 0.2ml
53221 G protein alpha S G蛋白αS抗體(*核苷酸結(jié)合蛋白Gα s) 0.2ml
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時(shí),請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時(shí)間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機(jī)。
5人透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白(HABP)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本,才能保證檢測質(zhì)量?,F(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標(biāo)儀,這對于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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