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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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人胃泌素細(xì)胞抗體(GCA)ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人胃泌素細(xì)胞抗體(GCA)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測(cè)定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽(yáng)性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照;與陰性對(duì)照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2~3SD,作為陽(yáng)性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽(yáng)性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽(yáng)性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
我們將在人胃泌素細(xì)胞抗體(GCA)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問(wèn)題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來(lái)一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
53059 BORIS/CT27 腫瘤/睪丸抗原27抗體(高遷移率族蛋白) 0.2ml
53060 phospho-GAP43(Ser41) 磷酸化神經(jīng)生長(zhǎng)相關(guān)蛋白43抗體 0.1ml
53061 CDCA7L 細(xì)胞分裂周期相關(guān)蛋白JPO2抗體 0.2ml
53062 ETS2 癌基因ETS2抗體 0.2ml
53063 GAPDH 3-磷酸甘油醛脫氫酶(兔來(lái)源免疫組化用抗體) 0.1ml
53064 GAPDH 3-磷酸甘油醛脫氫酶(兔來(lái)源免疫組化用抗體) 0.1ml
53065 ETV7 轉(zhuǎn)錄因子ETV7抗體 0.2ml
53066 LMO4 乳腺腫瘤自身抗原LMO4抗體 0.2ml
53067 GAPDH 3-磷酸甘油醛脫氫酶(兔來(lái)源免疫組化用抗體) 0.1ml
53068 GCDGP15/SABP 囊性組織液體蛋白15抗體 0.1ml
53069 GNAI3 抑制型G蛋白α3抗體 0.2ml
53070 NFEM5/IRF4/MUM1 淋巴細(xì)胞特異性干擾素調(diào)節(jié)因子抗體 0.2ml
53071 CXCR3/CD183 細(xì)胞表面趨化因子受體3抗體 0.1ml
53072 CXCR3/CD183 細(xì)胞表面趨化因子受體3抗體 0.1ml
53073 CXCR5/CD185 細(xì)胞表面趨化因子受體5抗體 0.1ml
53074 NARG2 *受體調(diào)節(jié)蛋白2抗體 0.2ml
53075 PATZ1 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子MAZR抗體 0.2ml
53076 Gastrin 胃泌素/蛙皮素抗體 0.1ml
53077 Gastrin receptor/GASR 促胃泌素受體抗體 0.1ml
53078 GATA-1 珠蛋白轉(zhuǎn)錄因子1抗體 0.1ml
53079 phospho-GATA1(ser142) 磷酸化珠蛋白轉(zhuǎn)錄因子1抗體 0.1ml
53080 phospho-GATA1(ser310) 磷酸化珠蛋白轉(zhuǎn)錄因子1抗體 0.1ml
53081 GATA-2 GATA結(jié)合蛋白2抗體 0.1ml
53082 GATA-3 GATA結(jié)合蛋白3抗體 0.1ml
53083 GATA-4 GATA結(jié)合蛋白4抗體 0.1ml
53084 GATA-5 GATA結(jié)合蛋白5抗體 0.1ml
53085 GATA6 GATA結(jié)合蛋白6抗體 0.1ml
53086 phospho-GATA6(Tyr271) 磷酸化GATA結(jié)合蛋白6抗體 0.1ml
53087 Gax 生長(zhǎng)終止特異性同源盒基因抗體 0.2ml
53088 PLAG1 多型性腺瘤基因1蛋白抗體 0.2ml
53089 GCN2 蛋白激酶GCN2蛋白抗體 0.2ml
53090 Phospho-GCN2 (Thr899) 磷酸化蛋白激酶GCN2蛋白抗體 0.1ml
53091 phospho-GCN2 (Thr667) 磷酸化蛋白激酶GCN2蛋白抗體 0.1ml
53092 GCP-2 粒細(xì)胞趨化蛋白2抗體 0.1ml
53093 CXCL7/NAP-2/PPBP 血小板趨化因子7蛋白抗體 0.1ml
53094 CXCL9/MIG γ干擾素誘導(dǎo)單核細(xì)胞因子抗體 0.1ml
53095 CXCL11 干擾素誘導(dǎo)T細(xì)胞趨化因子抗體 0.2ml
53096 CXCL13/BCA1 B-淋巴細(xì)胞趨化因子抗體 0.1ml
53097 CXCL13/BCA1 B-淋巴細(xì)胞趨化因子抗體 0.1ml
53098 CXCL15/Lungkine 趨化因子CXCL15抗體 0.2ml
53099 GCK/Glucokinase 葡萄糖激酶抗體 0.1ml
53100 GCS/glucosylceramide synthase *半*γ合成酶抗體 0.1ml
53101 Plzf 早幼粒細(xì)胞白血病鋅指蛋白抗體 0.2ml
53102 CSF3/G-CSF 粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子3抗體 0.1ml
53103 GDIA1 腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因GDIA1抗體 0.1ml
53104 GDIA2/ARHGDIB 腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因GDIA2抗體 0.1ml
53105 G-CSFR/CD114 粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子3受體抗體 0.1ml
53106 GKRP 葡萄糖激酶調(diào)節(jié)蛋白抗體 0.2ml
53107 GDF-1 生長(zhǎng)、分化因子1抗體 0.1ml
53108 GDF3 生長(zhǎng)分化因子3抗體 0.1ml
53109 GDF8/MSTN 生長(zhǎng)分化因子8抗體 0.2ml
53110 GDF8 生長(zhǎng)分化因子8/肌肉抑制素抗體 0.2ml
53111 GDF9 生長(zhǎng)分化因子9抗體 人胃泌素細(xì)胞抗體(GCA)ELISA試劑盒0.1ml
53112 GDF15/MIC-1 生長(zhǎng)分化因子15/巨嗜細(xì)胞抑制因子1抗體 0.1ml
53113 GDNF 膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子抗體 0.1ml
53114 Ribonuclease 6 核糖核酸酶6抗體 0.2ml
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑,嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測(cè),可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時(shí),請(qǐng)分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng),導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無(wú)或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5人胃泌素細(xì)胞抗體(GCA)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或使用過(guò)期顯色劑;
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過(guò)期顯色劑,肉眼可見(jiàn)淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽(yáng)性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過(guò)程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化,有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng),以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本,才能保證檢測(cè)質(zhì)量?,F(xiàn)在國(guó)內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀,這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。
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