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上海紀寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時間:2017-02-24 07:00:22瀏覽次數(shù):188次
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人肺炎支原體抗體(MP-Ab)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯(lián)免疫實驗得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結(jié)果。
人肺炎支原體抗體(MP-Ab)ELISA試劑盒實驗ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人肺炎支原體抗體(MP-Ab)ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗質(zhì)量。
52489 PCDHGB5 原鈣粘蛋白γB5抗體 0.2ml
52490 PBR/DBI/TSPO 外周苯二氮受體抗體 0.1ml
52491 DCC 結(jié)腸直腸癌缺失基因抗體 0.1ml
52492 DCIR/CLEC4A C型凝集素結(jié)構(gòu)域家族4成員A抗體 0.2ml
52493 DCN/Decorin 核心蛋白聚糖抗體 0.1ml
52494 CLEC5A/MDL1 C型凝集素結(jié)構(gòu)域家族5成員A抗體 0.2ml
52495 LAMP-3/DC-LAMP/CD208 溶酶體相關(guān)膜蛋白3抗體 0.1ml
52496 DC-SIGN/CD209 細胞間粘附分子非整合素蛋白3抗體 0.1ml
52497 DC-SIGN/CD209 細胞間粘附分子非整合素蛋白3抗體 0.1ml
52498 DC-SIGNR/CD299 CD299抗體 0.2ml
52499 DEC-205/CD205/Ly75 淋巴細胞抗原75抗體 0.2ml
52500 DECR1 線粒體2,4-雙烯酰*還原酶1抗體 0.1ml
52501 PCDHB11 原鈣粘蛋白β11抗體 0.2ml
52502 DEGS1 退行性精母細胞同源物1抗體 0.2ml
52503 DCP 異常*原/脫-γ-羧基*原抗體 0.2ml
52504 PCDHB13 原鈣粘蛋白13抗體 0.2ml
52505 DHCR7 7脫氫*還原酶抗體 0.2ml
52506 Doublecortin 雙皮質(zhì)素抗體 0.1ml
52507 Phospho-Doublecortin (Ser297) 磷酸化雙皮質(zhì)素抗體 0.1ml
52508 DcR1 腫瘤壞死因子配體超家族成員10C 0.1ml
52509 DcR2/CD264/TNFRSF10D 誘捕受體2抗體 0.1ml
52510 TNFRSF12A/TWEAKR/CD266 腫瘤壞死因子配體超家族成員12A抗體 0.1ml
52511 DcR3/TR6 誘捕受體3抗體 0.1ml
52512 DDAH-II 雙甲基*水解酶2抗體 0.2ml
52513 DDX19B/DBP5 解旋酶DEAD5抗體 0.1ml
52514 D-DIMER 交聯(lián)纖維蛋白二聚體抗體 0.2ml
52515 DDX58 DDX58抗體 0.2ml
52516 phospho-DDX58 (Ser8) 磷酸化DDX58抗體 0.1ml
52517 phospho-DDX58 (Thr170) 磷酸化DDX58抗體 0.1ml
52518 DDB1 DNA損傷結(jié)合蛋白1抗體 0.2ml
52519 DDB2 DNA損傷結(jié)合蛋白2抗體 0.1ml
52520 DDC/DOPA Decarboxylase 多巴胺脫羧酶抗體 0.1ml
52521 NG2 *蛋白多糖4/黑色素瘤相關(guān)蛋白抗體 0.1ml
52522 DDX4/MVH DDX4抗體 0.1ml
52523 DEF1/α Defensin 1/3 防御素α1/3抗體 0.1ml
52524 Defensin alpha 4 防御素α4抗體 0.1ml
52525 Defensin β1 防御素β1抗體 0.1ml
52526 RAB21 G蛋白家族RAB21蛋白抗體 0.2ml
52527 Defensin β1 防御素β1抗體 0.1ml
52528 DEK DEK癌基因結(jié)合蛋白 0.1ml
52529 Defensin β2/DEFB2/HBD-2 防御素β2抗體 0.1ml
52530 Defensin β2 防御素β2抗體 0.1ml
52531 DAP-5/p97 死亡相關(guān)蛋白5抗體 0.1ml
52532 DAPK1 凋亡相關(guān)蛋白激酶1抗體 0.1ml
52533 DAPK2 凋亡相關(guān)蛋白激酶2抗體 0.1ml
52534 DAPK3/ZIP Kinase 凋亡相關(guān)蛋白激酶3抗體 0.1ml
52535 DCBLD2 內(nèi)皮細胞和平滑肌細胞衍生的神經(jīng)纖毛蛋白抗體 0.2ml
52536 ANKHD1 艾滋病病毒制約錨定蛋白抗體 0.2ml
52537 Deltex-1 DTX1抗體 0.2ml
52538 envelope glycoprotein (Dengue virus type-2) 登革熱病毒抗體 0.2ml
52539 ASAP3 GTP酶激活蛋白ASAP3抗體 0.2ml
52540 polyprotein (DHAV) 鴨甲型肝炎病毒聚蛋白抗體 1ml
52541 ASB2 含錨蛋白重復序列-細胞因子信號抑制物盒蛋白家族2抗體 0.2ml
52542 Desmin/DES 結(jié)蛋白抗體 人肺炎支原體抗體(MP-Ab)ELISA試劑盒 0.1ml
52543 phospho-DES (Thr16) 磷酸化結(jié)蛋白抗體 0.1ml
52544 phospho-DES (Thr76/Thr77) 磷酸化結(jié)蛋白抗體 0.1ml
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人肺炎支原體抗體(MP-Ab)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴謹?shù)墓ぷ髯黠L檢測每一份標本,才能保證檢測質(zhì)量?,F(xiàn)在國內(nèi)已有相當數(shù)量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現(xiàn)ELISA標準化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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