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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時間:2017-02-24 11:13:06瀏覽次數(shù):185次
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人微量轉(zhuǎn)鐵蛋白(MTF)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯(lián)免疫實驗得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人微量轉(zhuǎn)鐵蛋白(MTF)ELISA試劑盒實驗ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人微量轉(zhuǎn)鐵蛋白(MTF)ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗質(zhì)量。
52139 Metronidazole(1C2) *單克隆抗體 0.2ml
52140 MARK2 */*蛋白激酶MARK2抗體 0.2ml
52141 phospho-MARK2(Thr595) 磷酸化*/*蛋白激酶MARK2抗體 0.1ml
52142 WBSCR14/ChREBP 糖類應(yīng)答元件結(jié)合蛋白ChREBP抗體 0.2ml
52143 CDKN3 細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制蛋白3抗體 0.2ml
52144 ChRM2/Acetylcholine receptor(M2) 毒蕈堿型乙酰*受體抗體 0.1ml
52145 ChRM1/Acetylcholine receptor(M1) 毒蕈堿型乙酰*受體M1抗體 0.1ml
52146 ChRM2 毒蕈堿型乙酰*受體M2抗體 0.1ml
52147 CABLES2 細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶CABLES2抗體 0.2ml
52148 ChRM3/Acetylcholine receptor(M3) 毒蕈堿型乙酰*受體M3抗體 0.1ml
52149 CKS1 細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶調(diào)節(jié)亞基1抗體 0.2ml
52150 CIDEB 促進凋亡基因抗體 0.2ml
52151 CIB1 鈣整合素結(jié)合蛋白1抗體 0.1ml
52152 C-jun/AP-1 原癌基因蛋白/活化蛋白1抗體 0.1ml
52153 CDC2L1 細(xì)胞分裂周期蛋白2亞型1抗體 0.2ml
52154 phospho-c-Jun(Thr91+Thr93) 磷酸化原癌基因c-Jun抗體 0.1ml
52155 phospho-c-Jun (Ser73) 磷酸化原癌基因c-Jun抗體 0.1ml
52156 phospho-c-Jun(Ser243) 磷酸化原癌基因c-Jun抗體 0.1ml
52157 phospho-c-Jun(Ser63) 磷酸化原癌基因c-Jun抗體 0.1ml
52158 phospho-c-Jun(Thr91) 磷酸化原癌基因c-Jun抗體 0.1ml
52159 phospho-Smad3(Ser213) 磷酸化細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子SMAD3抗體 0.1ml
52160 phospho-c-Jun(Thr239) 磷酸化原癌基因c-Jun抗體 0.1ml
52161 phospho-c-Jun(Thr249) 磷酸化原癌基因c-Jun抗體 0.1ml
52162 Jun B 活化蛋白激酶B抗體 0.1ml
52163 phospho-c-Jun(Tyr170) 磷酸化原癌基因c-Jun抗體 0.1ml
52164 phospho-JunB(Ser259) 磷酸化活化蛋白激酶B抗體 0.1ml
52165 phospho-JunB(Ser79) 磷酸化活化蛋白激酶B抗體 0.1ml
52166 Jun D 活化蛋白激酶D抗體 0.1ml
52167 phospho-JunD(Ser255) 磷酸化活化蛋白激酶D抗體 0.1ml
52168 CK I alpha/STK 絲/*蛋白質(zhì)激酶抗體Casein kinase Ⅰα(CKⅠα) 0.1ml
52169 CK II Alpha/STK 絲/*蛋白質(zhì)激酶抗體Casein kinase Ⅱα(CKⅡα) 0.1ml
52170 CSNK1G2 酪蛋白激酶1γ2抗體 0.2ml
52171 CK II alpha/STK 絲/*蛋白質(zhì)激酶II α抗體 0.2ml
52172 CK II beta 絲/*蛋白激酶II β抗體(casein kinase IIβ) 0.1ml
52173 DBF4B/ASKL1 S期激酶活化蛋白DBF4B抗體 0.2ml
52174 P-CK/Cytokeratin AE1 + AE3 廣譜細(xì)胞角蛋白PCK抗體 0.1ml
52175 CDKL3/NKIAMRE 細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶樣3抗體 0.2ml
52176 CK18 細(xì)胞角蛋白18抗體(C端) 0.1ml
52177 CK18 細(xì)胞角蛋白18抗體 0.1ml
52178 phospho-CK18(Ser74) 磷酸化細(xì)胞角蛋白18抗體 0.1ml
52179 phospho-CK18(Ser33) 磷酸化細(xì)胞角蛋白18抗體 0.1ml
52180 phospho-LCK(Tyr394) 磷酸化淋巴細(xì)胞特異性蛋白*激酶抗體 0.1ml
52181 CK14/17/42/10 細(xì)胞角蛋白14抗體 0.1ml
52182 CK15 細(xì)胞角蛋白15抗體 0.1ml
52183 CK16 細(xì)胞角蛋白16抗體 0.1ml
52184 CK17/Cytokeratin 17 細(xì)胞角蛋白17抗體 0.1ml
52185 Phospho-CK17 (Ser44) 磷酸化細(xì)胞角蛋白17抗體 0.1ml
52186 GCDFP15 特異性囊腫病液體蛋白15抗體 0.2ml
52187 CK19 細(xì)胞角蛋白19抗體 0.1ml
52188 CK20 細(xì)胞角蛋白20抗體 0.1ml
52189 CK1 人微量轉(zhuǎn)鐵蛋白(MTF)ELISA試劑盒細(xì)胞角蛋白1抗體 0.1ml
52190 DCK 脫氧胞苷激酶抗體 0.2ml
52191 CK2 細(xì)胞角蛋白2抗體 0.1ml
52192 CK3 細(xì)胞角蛋白3抗體 0.1ml
52193 Cytokeratin 3+12 細(xì)胞角蛋白3+12抗體 0.2ml
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人微量轉(zhuǎn)鐵蛋白(MTF)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本,才能保證檢測質(zhì)量?,F(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標(biāo)儀,這對于實現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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