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上海紀寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時間:2017-02-21 13:24:16瀏覽次數(shù):198次
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人腫瘤特異生長因子/腫瘤相關(guān)因子(TGSF)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯(lián)免疫實驗得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結(jié)果。
人腫瘤特異生長因子/腫瘤相關(guān)因子(TGSF)ELISA試劑盒實驗ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人腫瘤特異生長因子/腫瘤相關(guān)因子(TGSF)ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗質(zhì)量。
51736 β-catenin β-連環(huán)蛋白/β-連環(huán)素/β鏈接素抗體 0.1ml
51737 phospho-β catenin(Tyr142) 磷酸化β 連環(huán)素蛋白抗體 0.1ml
51738 Phospho-Beta-Catenin(Ser33/37) 磷酸化β 連環(huán)素蛋白抗體 0.1ml
51739 Phospho-Beta-Catenin(Ser45) 磷酸化β 連環(huán)素蛋白抗體 0.1ml
51740 Phospho-Beta-Catenin (Ser552) 磷酸化β 連環(huán)素蛋白抗體 0.1ml
51741 Phospho-Beta-Catenin (Ser675) 磷酸化β 連環(huán)素蛋白抗體 0.1ml
51742 Phospho-Beta-Catenin (Thr41/Ser45) 磷酸化β 連環(huán)素蛋白抗體 0.1ml
51743 phospho-Beta-catenin(Tyr86) 磷酸化β 連環(huán)素蛋白抗體 0.1ml
51744 Catalase 過氧化氫酶抗體 0.1ml
51745 NEK6 高度相似的細胞周期蛋白激酶NEK6抗體 0.2ml
51746 MRG15 轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子MRG15抗體 0.2ml
51747 MLL5 髓系/淋巴混合譜系白血病蛋白5抗體 0.2ml
51748 JUP/Cateninma γ γ連環(huán)蛋白抗體(Catenin γ , γ鏈接素) 0.2ml
51749 phospho-JUP(Tyr550) 磷酸化γ連環(huán)蛋白抗體 0.1ml
51750 Protective protein 組織蛋白酶A抗體 0.1ml
51751 Cathepsin B 組織蛋白酶B抗體 0.1ml
51752 Cathepsin C 組織蛋白酶C抗體 0.1ml
51753 Cathepsin E 組織蛋白酶E抗體 0.1ml
51754 Cathepsin D/CTSD 組織蛋白酶D抗體 0.1ml
51755 Cathepsin L/CTSL 組織蛋白酶L抗體 0.1ml
51756 Cathepsin G/CTSG 組織蛋白酶G抗體 0.1ml
51757 Cathepsin K 組織蛋白酶K抗體 0.1ml
51758 Cathepsin H/CTSH 組織蛋白酶H抗體 0.1ml
51759 CBL2 原癌蛋白CBL2抗體 0.2ml
51760 phospho-CBL2(Tyr731) 磷酸化原癌蛋白CBL2抗體 0.1ml
51761 phospho-CBL2(Tyr774) 磷酸化原癌蛋白CBL2抗體 0.1ml
51762 Cathepsin Z 組織蛋白酶z抗體 0.1ml
51763 CBFA1/RUNX2 核心結(jié)合因子α1抗體(成骨特異性轉(zhuǎn)錄因子)Cbfα1 0.1ml
51764 phospho-RUNX2(Ser451) 磷酸化成骨特異性轉(zhuǎn)錄因子抗體 0.1ml
51765 HP1 alpha 異染色質(zhì)蛋白1-α(HP1α)抗體 0.1ml
51766 CBP/p300 CREB結(jié)合蛋白抗體 0.1ml
51767 HP1 gamma 異染色質(zhì)蛋白1-γ抗體 0.2ml
51768 Phospho-HP1 gamma (Ser93) 磷酸化染色質(zhì)相關(guān)蛋白1-γ抗體 0.1ml
51769 Phosphor-CBX5 磷酸化CBX5抗體 0.2ml
51770 Cbx8 染色質(zhì)結(jié)合蛋白Cbx8抗體 0.2ml
51771 CCK8 膽囊收縮素8抗體 0.1ml
51772 CC16/CCSP 克拉拉細胞蛋白抗體 0.1ml
51773 CCP 瓜氨酸環(huán)肽抗體 0.2ml
51774 CCL1/TCA3/I-309 嗜酸粒細胞趨化蛋白CCL1抗體 0.1ml
51775 CCL3/MIP 1α 巨噬細胞炎性蛋白1α抗體 0.1ml
51776 CCL4/MIP-1 Beta 巨噬細胞炎性蛋白1β抗體 0.1ml
51777 CCL5/RANTES T細胞特異性趨化因子抗體 0.1ml
51778 CCL6/C10 嗜酸粒細胞趨化蛋白CCL6抗體 0.2ml
51779 CCL11/Eotaxin 1 嗜酸粒細胞趨化蛋白抗體 0.2ml
51780 CCL12/MCP5 單核細胞趨化蛋白5抗體 0.2ml
51781 CCL13/MCP-4 單核細胞趨化蛋白4抗體 0.2ml
51782 CCL14/HCC-1 嗜酸粒細胞趨化蛋白14抗體 0.2ml
51783 CCL15/MIP5 巨噬細胞炎性蛋白15 0.1ml
51784 CCL16/HCC-4 巨噬細胞炎性蛋白16抗體 0.2ml
51785 CCL17/ABCD2 胸腺活化調(diào)節(jié)趨化因子抗體 0.1ml
51786 CCL21/6Ckine 淋巴細胞趨化因子CCL21抗體 0.1ml
51787 CCL20/MIP3 alpha 巨噬細胞炎性蛋白MIP-3a抗體 0.1ml
51788 CCL23/MIP3 巨噬細胞炎性蛋白抗體 0.1ml
51789 CCL24 嗜酸粒細胞趨化蛋白24抗體 0.2ml
51790 CCL25/TECK 胸腺表達趨化因子抗體 0.2ml
51791 CCL19/MIP-3 beta 巨噬細胞炎性蛋白19抗體 0.2ml
51792 CCL26/Eotaxin 3 嗜酸粒細胞趨化蛋白3抗體 0.2ml
51793 CCL27/CTACK 皮膚T細胞虜獲趨化因子抗體 0.2ml
51794 DECTIN-1/CLECSF12/beta Glucan Receptor β葡聚糖受體抗體 0.1ml
51795 CCR-1 細胞表面趨化因子受體1抗體 0.1ml
51796 DECTIN 2 C型凝集素結(jié)構(gòu)域家族6成員A抗體 0.1ml
51797 RelB 轉(zhuǎn)錄因子RelB蛋白抗體人腫瘤特異生長因子/腫瘤相關(guān)因子(TGSF)ELISA試劑盒 0.2ml
51798 phospho-RelB(Ser552) 磷酸化轉(zhuǎn)錄因子RelB蛋白抗體 0.1ml
51799 CCR-2/CD192 細胞表面趨化因子受體2抗體 0.1ml
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人腫瘤特異生長因子/腫瘤相關(guān)因子(TGSF)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴謹?shù)墓ぷ髯黠L檢測每一份標本,才能保證檢測質(zhì)量?,F(xiàn)在國內(nèi)已有相當數(shù)量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現(xiàn)ELISA標準化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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