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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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人BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導(dǎo)蛋白(Bid)ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導(dǎo)蛋白(Bid)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對(duì)照;與陰性對(duì)照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測物的含量。
我們將在人BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導(dǎo)蛋白(Bid)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
51680 Calcineurin A/PP-2B alpha 1 鈣調(diào)磷酸酶抗體 0.1ml
51681 Caldesmon 鈣介質(zhì)素抗體 0.1ml
51682 phosphor-Caldesmon(Ser789) 磷酸化鈣介質(zhì)素抗體 0.1ml
51683 Calpain 1 鈣蛋白酶1抗體 0.1ml
51684 Calpain 2 鈣激活的*2抗體 0.1ml
51685 Calponin 1/COLP 鈣調(diào)節(jié)蛋白-1抗體 0.1ml
51686 Phospho-Troponin I(Ser23/24) 磷酸化鈣調(diào)節(jié)蛋白-1抗體 0.1ml
51687 SLC27A1 長鏈脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1抗體 0.2ml
51688 Calmodulin/CaM I 鈣調(diào)節(jié)素抗體(鈣調(diào)蛋白/鈣調(diào)素) 0.1ml
51689 CaMK2a 鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶2α抗體 0.1ml
51690 Phospho-CaMKII (Thr286) 磷酸化鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶2α抗體 0.1ml
51691 phospho-CaMK2 alpha (Tyr231) 磷酸化鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶2α抗體 0.1ml
51692 phospho-CaMK2 alpha (Thr305) 磷酸化鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶2α抗體 0.1ml
51693 Camk1g 鈣/鈣調(diào)蛋白依賴蛋白激酶IG抗體 0.1ml
51694 CaMK2 beta/CaMK2 gamma 鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶2b/2γ抗體 0.1ml
51695 XPB/ERCC3 DNA損傷修復(fù)酶ERCC3蛋白抗體 0.2ml
51696 phospho-CAMK2G (Ter286) 磷酸化鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶CAMK2G抗體 0.1ml
51697 CAP1/PARK7 CAP1抗體 0.2ml
51698 CAP2 環(huán)化酶相關(guān)蛋白CAP-2抗體 0.2ml
51699 CAPZA1 F肌動(dòng)蛋白α1亞基抗體 0.1ml
51700 CAPZA2/CapZ alpha 2 F肌動(dòng)蛋白α2亞基抗體 0.1ml
51701 CTn1/Troponin I/TNNC1 心肌肌鈣蛋白抗體 0.1ml
51702 CT-1/CTF1 心肌營養(yǎng)素1抗體 0.1ml
51703 CA I/Carbonic anhydrase 1 碳酸酐酶1抗體 0.2ml
51704 CTNNAL1 粘附分子相關(guān)蛋白a1抗體 0.1ml
51705 CA II/Carbonic anhydrase 2 碳酸酐酶2抗體 0.1ml
51706 CA IX 碳酸酐酶9抗體 0.1ml
51707 CAS/CSE1 細(xì)胞凋亡敏感性基因抗體 0.1ml
51708 Phospho-Cas (Tyr165) 磷酸化細(xì)胞凋亡敏感性基因 0.1ml
51709 Caspase-1(actived P10) 天冬氨酸-*特異性蛋白酶家族抗體 0.1ml
51710 Caspase 2 半胱胺酸蛋白酶-2抗體 0.1ml
51711 Caspase-10 半胱胺酸蛋白酶-10抗體 0.1ml
51712 Caspase-12 半胱胺酸蛋白酶蛋白-12抗體 0.1ml
51713 Caspase-12 半胱胺酸蛋白酶蛋白-12抗體 0.1ml
51714 Caspase-13/4 半胱胺酸蛋白酶蛋白-13抗體 0.2ml
51715 Caspase-3(Active) 活化半胱胺酸蛋白酶蛋白-3抗體 0.1ml
51716 caspase-3 p12 subunit 活化半胱胺酸蛋白酶蛋白-3抗體 0.1ml
51717 caspase-3 p11 半胱天冬酶-3酶原抗體 0.1ml
51718 Caspase 4 半胱胺酸蛋白酶蛋白-4抗體 0.1ml
51719 Caspase-6 (CT) 半胱胺酸蛋白酶蛋白-6抗體(C端) 0.1ml
51720 Caspase-6 (NT) 半胱胺酸蛋白酶蛋白-6抗體(N端) 0.1ml
51721 Caspase-6 (NT) 半胱胺酸蛋白酶蛋白-6抗體(N端) 0.1ml
51722 phospho-Caspase 6 (Ser257) 磷酸化半胱胺酸蛋白酶蛋白6抗體 0.1ml
51723 Caspase-7 半胱胺酸蛋白酶蛋白-7抗體 0.1ml
51724 Caspase-7 半胱胺酸蛋白酶蛋白-7抗體 0.1ml
51725 Caspase 8 半*蛋白酶8抗體 0.1ml
51726 Caspase-9 白介素1-β轉(zhuǎn)化酶樣凋亡蛋白酶6抗體 0.1ml
51727 Caspase-9 白介素1-β轉(zhuǎn)化酶樣凋亡蛋白酶6抗體 0.1ml
51728 Phospho-Caspase-9 (Thr125) 磷酸化半*蛋白酶9抗體 0.1ml
51729 Phospho-Caspase-9 (Tyr153) 磷酸化半*蛋白酶9抗體 0.1ml
51730 Phospho-Caspase-9 (Ser196) 磷酸化半*蛋白酶9抗體 0.1ml
51731 Caveolin-1 細(xì)胞質(zhì)膜微囊蛋白-1抗體人BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導(dǎo)蛋白(Bid)ELISA試劑盒 0.1ml
51732 Phospho-Caveolin-1 (Tyr14) 磷酸化細(xì)胞質(zhì)膜微囊蛋白-1抗體 0.1ml
51733 Caveolin-3 細(xì)胞質(zhì)膜微囊蛋白-3抗體 0.2ml
51734 Alpha-Catenin/CTNNA1 α-連環(huán)蛋白抗體(鈣粘蛋白相關(guān)蛋白) 0.1ml
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時(shí),請(qǐng)分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時(shí)間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5人BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導(dǎo)蛋白(Bid)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng),以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本,才能保證檢測質(zhì)量?,F(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀,這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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