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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時間:2017-02-14 18:33:43瀏覽次數(shù):155次
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人廣譜細(xì)胞角蛋白(P-CK)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯(lián)免疫實驗得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人廣譜細(xì)胞角蛋白(P-CK)ELISA試劑盒實驗ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人廣譜細(xì)胞角蛋白(P-CK)ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗質(zhì)量。
51512 Transketolase(NT) 轉(zhuǎn)酮醇酶(轉(zhuǎn)羥乙醛酶)抗體(N端) 1ml
51513 Transketolase(CT) 轉(zhuǎn)酮醇酶(轉(zhuǎn)羥乙醛酶)抗體(C端) 1ml
51514 LONP1 線粒體離子肽酶1抗體 0.2ml
51515 FXR1 脆性X相關(guān)蛋白1抗體 0.2ml
51516 ZNF231/Bassoon 鋅指蛋白231抗體 0.2ml
51517 PDIA2/PDI 蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶抗體 0.2ml
51518 Hsp93 熱休克蛋白93抗體 0.2ml
51519 Batroxobin 蛇毒巴曲酶抗體 0.2ml
51520 FIH1/HIF1AN 缺氧誘導(dǎo)因子1α抑制蛋白抗體 0.2ml
51521 Batroxobin 蛇毒蛋白巴曲酶抗體 0.2ml
51522 Bax Bax抗體 0.1ml
51523 phospho-Bax(Ser184) 磷酸化Bax抗體 0.1ml
51524 HN protein 雞新城疫血凝素-神經(jīng)氨酸酶抗體 1ml
51525 Bax Bax 0.1ml
51526 FMDV Polyprotein (VP1 protein) 口蹄疫病毒A型抗體(N端) 0.2ml
51527 PHD1/prolyl hydroxylase 脯氨酰羥化酶抗體 0.2ml
51528 FMDV Polyprotein (3A protein) 口蹄疫病毒A型抗體 0.2ml
51529 FMDV Polyprotein (VPg2 protein) 口蹄疫病毒A型抗體 0.2ml
51530 FMDV Polyprotein (VP1 protein) 口蹄疫病毒A型抗體 1ml
51531 SCNN1B/βENaC 上皮鈉通道β抗體 0.2ml
51532 Chloroplast protease 葉綠體蛋白酶抗體(植物) 1ml
51533 phospho-SCNN1B(Thr615) 磷酸化上皮鈉通道β2抗體 0.1ml
51534 phospho-SCNN1B(Ser633) 磷酸化上皮鈉通道β2抗體 0.1ml
51535 phospho-Bcl 10(Ser218) 磷酸化Bcl-10抗體 0.1ml
51536 Glutamine synthetase/GLUL/GS *合成酶/*氨連接酶抗體 0.1ml
51537 Thioredoxin 2 線粒體硫氧還蛋白2抗體 0.1ml
51538 PRRSV-GP5 豬藍(lán)耳病病毒GP5蛋白抗體 1ml
51539 Bcl-2 Bcl-2抗體 0.1ml
51540 Bcl2L2/BCL W Bcl-2樣蛋白2抗體 0.1ml
51541 Phospho-Bcl-2(Ser70) 磷酸化Bcl-2抗體 0.1ml
51542 Bcl-xL/BCL2L1/bcl-xs Bcl-xL蛋白抗體 0.1ml
51543 phospho-Bcl-xL/Bcl2L1 (Ser62) 磷酸化Bcl-xL(Ser62)抗體 0.1ml
51544 phospho-Bcl-xL/BCL2L1(Thr115) 磷酸化Bcl-xL蛋白抗體 0.1ml
51545 Phospho-Bcl-2(Thr129) 磷酸化Bcl-2抗體 0.1ml
51546 Phospho-Bcl-2 (Thr56) 磷酸化Bcl-2抗體 0.1ml
51547 Phospho-Wee1(Ser123) 磷酸化WEE1蛋白抗體 0.1ml
51548 Bcl-2 Bcl-2抗體 0.1ml
51549 Bcl-6/5 原癌基因Bcl-6抗體 0.2ml
51550 Bcl-10/CLAP/CIPER Bcl-10抗體 0.1ml
51551 PKMYT1 髓鞘轉(zhuǎn)錄因子1激酶抗體 0.1ml
51552 phospho-PKMYT1(Thr495) 磷酸化髓鞘轉(zhuǎn)錄因子1激酶抗體 0.1ml
51553 BBC3/PUMA p53正向細(xì)胞凋亡調(diào)控因子抗體 0.1ml
51554 Keratan Sulfate 硫酸角質(zhì)素抗體 0.2ml
51555 Salmonella tropina 沙門氏菌菌體蛋白抗體 0.2ml
51556 ARHGAP20 Rho GTP酶激活蛋白20抗體 0.2ml
51557 BCHE (NT) 丁酰*酯酶抗體(N端) 0.1ml
51558 BCHE(1E8) 丁酰*酯酶單克隆抗體 0.2ml
51559 BCHE (CT) 丁酰*酯酶抗體(C端) 0.1ml
51560 BCMA/CD269 B淋巴細(xì)胞成熟因子抗體 0.1ml
51561 Listeria tropina 李斯特菌菌體蛋白抗體 1ml
51562 BDNF 腦源神經(jīng)營養(yǎng)因子抗體 0.1ml
51563 BDH1 3-羥丁酸脫氫酶抗體 0.2ml
51564 BECN1/Beclin 1/ATG6 Bcl-2同源結(jié)構(gòu)域蛋白抗體 0.1ml
51565 β-casein人廣譜細(xì)胞角蛋白(P-CK)ELISA試劑盒 β-酪蛋白抗體 0.1ml
51566 BAFF/CD257 TNF家族B細(xì)胞激活因子抗體 0.2ml
51567 BAFFR/CD268 B細(xì)胞活化因子受體抗體 0.2ml
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人廣譜細(xì)胞角蛋白(P-CK)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本,才能保證檢測質(zhì)量?,F(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標(biāo)儀,這對于實現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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