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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時(shí)間:2017-01-15 22:47:46瀏覽次數(shù):235次
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人膀胱癌抗原(UBC)ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人膀胱癌抗原(UBC)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測(cè)定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭法則淺于)陰性對(duì)照;與陰性對(duì)照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
我們將在人膀胱癌抗原(UBC)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
51454 ATP7B 銅轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白質(zhì)β鏈抗體 0.1ml
51455 ATG16L2 自噬體ATG16L2蛋白抗體 0.2ml
51456 ATG18/WIPI1 自噬相關(guān)蛋白18抗體 0.2ml
51457 ATP1b2/Na+K+ATPase 鈉鉀ATP酶通道蛋白抗體 0.1ml
51458 ATP1A1 鈉鉀ATP酶蛋白a1抗體 0.2ml
51459 Phospho-ATP1A1(Tyr10) 磷酸化鈉鉀ATP酶蛋白a1抗體 0.1ml
51460 Phospho-ATP1A1(Ser16) 磷酸化鈉鉀ATP酶蛋白a1抗體 0.1ml
51461 Phospho-ATP1A1(Ser23) 磷酸化鈉鉀ATP酶蛋白a1抗體 0.1ml
51462 ATXN1/Ataxin-1 脊髓小腦失調(diào)癥蛋白1抗體 0.2ml
51463 phospho-ATP citrate lyase(Ser455) 磷酸化三磷酸腺檸檬酸裂解酶抗體 0.1ml
51464 ATP citrate lyase/ACLY 三磷酸腺檸檬酸裂解酶抗體 0.2ml
51465 phospho-ATXN1(Ser775) 磷酸化失調(diào)癥蛋白1抗體 0.1ml
51466 AVEN 細(xì)胞死亡調(diào)節(jié)蛋白抗體(凋亡、半胱胺酸蛋白酶激活抑制劑) 0.1ml
51467 phospho-ATXN1(Thr236) 磷酸化失調(diào)癥蛋白1抗體 0.1ml
51468 Kir6.2 ATP敏感性鉀通道亞基kir6.2抗體 0.1ml
51469 GIRK2/Kir3.2 G蛋白激活內(nèi)流鉀通道蛋白2抗體 0.2ml
51470 AVPR2 *加壓素受體2抗體 0.1ml
51471 Bdkrb2/B2R 緩激肽B2受體抗體 0.2ml
51472 Axin1 軸蛋白1抗體 0.1ml
51473 Anei-ATX/Autotaxin 自分泌運(yùn)動(dòng)因子抗體 0.1ml
51474 Aurora A/ARK-1/AURKA 有絲分裂激酶A抗體 0.1ml
51475 Aurora B/STK-1 有絲分裂激酶B抗體 0.1ml
51476 phospho-PTPRA(Tyr798) 磷酸化*磷酸酶α抗體 0.1ml
51477 phospho-PTPRA(Ser180) 磷酸化*磷酸酶α抗體 0.1ml
51478 Aurora C 有絲分裂激酶B抗體 0.2ml
51479 Aurora A/B/C 有絲分裂激酶A/B/C抗體 0.2ml
51480 LEO1 RNA聚合酶相關(guān)蛋白LEO1抗體 0.1ml
51481 B7-H1/PD-L1/CD274 程序性死亡配體1抗體 0.1ml
51482 B7-DC/CD273/PDL2 程序性死亡配體2抗體 0.1ml
51483 ICOS-L/B7-H2/CD275 誘導(dǎo)協(xié)同刺激分子配體CD275抗體 0.1ml
51484 phospho-LEO1(Ser551) 磷酸化RNA聚合酶相關(guān)蛋白LEO1抗體 0.1ml
51485 ICOS-L/B7-H2/CD275 誘導(dǎo)協(xié)同刺激分子配體CD275抗體 0.1ml
51486 CT054/C20orf54 核黃素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2抗體 0.2ml
51487 ZDHHC21 γ-氨基丁酸A受體相關(guān)膜蛋白3 0.2ml
51488 ASGPR1/ASGR1 唾液酸糖蛋白受體1抗體 0.1ml
51489 ITPR1 5-三磷酸肌醇受體1抗體 0.2ml
51490 GPI 糖磷脂酰肌醇抗體 0.1ml
51491 B7H4 B7-H4抗體 0.1ml
51492 ITPR2 5-三磷酸肌醇受體2抗體 0.2ml
51493 BAAT 長鏈脂肪酸酰基*水解酶抗體 0.2ml
51494 Exendin 4 GLP1類似蛋白Exendin4抗體 0.1ml
51495 BACE1/ASP2 β分泌酶抗體 0.1ml
51496 phospho-BACE1(Ser498) 磷酸化β分泌酶抗體 0.1ml
51497 Phospho-Bad(Ser118) 磷酸化相關(guān)死亡促進(jìn)因子抗體 0.1ml
51498 Phospho-Bad(Ser134) 磷酸化相關(guān)死亡促進(jìn)因子抗體 0.1ml
51499 phospho-BAD(Ser99) 磷酸化相關(guān)死亡促進(jìn)因子抗體 0.1ml
51500 Bad 相關(guān)死亡促進(jìn)因子Bad抗體 0.1ml
51501 phospho-BAD(Ser128) 磷酸化相關(guān)死亡促進(jìn)因子抗體 0.1ml
51502 Phospho-Bad(Ser136) 磷酸化相關(guān)死亡促進(jìn)因子抗體 0.1ml
51503 Phospho-Bad(Ser155) 磷酸化相關(guān)死亡促進(jìn)因子抗體 0.1ml
51504 Bad 相關(guān)死亡促進(jìn)因子Bad抗體 0.1ml
51505 Phospho-Bad(Ser112) 磷酸化相關(guān)死亡促進(jìn)因子抗體 0.1ml
51506 phospho-BAD(Ser75) 磷酸化相關(guān)死亡促進(jìn)因子抗體 0.1ml
51507 BAG3 人膀胱癌抗原(UBC)ELISA試劑盒Bcl2抑凋亡蛋白Bag3抗體 0.2ml
51508 BAG2 Bcl-2結(jié)合抑凋亡蛋白2抗體 0.1ml
51509 Bag1/RAP46 抑凋亡基因bag1抗體 0.1ml
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測(cè)試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測(cè),可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時(shí),請(qǐng)分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時(shí)間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5人膀胱癌抗原(UBC)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化,有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng),以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本,才能保證檢測(cè)質(zhì)量。現(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀,這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。
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