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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時(shí)間:2017-01-23 03:08:08瀏覽次數(shù):317次
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人肝癌抗原(PHC)ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對試驗(yàn)的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人肝癌抗原(PHC)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測物的含量。
我們將在人肝癌抗原(PHC)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
51342 PRPH2 外周蛋白2抗體 0.2ml
51343 ProSAPiP1 含*突觸相關(guān)蛋白相互作用蛋白1抗體 0.2ml
51344 DBX1 腦發(fā)育同源蛋白1抗體 0.2ml
51345 LHX2 調(diào)控胚胎干細(xì)胞分化蛋白Lhx2抗體 0.2ml
51346 ARNT2 芳香烴受體核轉(zhuǎn)錄蛋白2抗體 0.2ml
51347 AGT 血管緊張素原抗體 0.1ml
51348 TBL1X 轉(zhuǎn)導(dǎo)素β1X連鎖蛋白抗體 0.2ml
51349 GIT1 G蛋白偶聯(lián)受體激酶相互作用蛋白1 0.1ml
51350 TBLR1/TBL1XR1 轉(zhuǎn)導(dǎo)素β1X連鎖受體蛋白1抗體 0.2ml
51351 Musashi 1/Msi1 神經(jīng)干細(xì)胞RNA結(jié)合蛋白Musashi1抗體 0.2ml
51352 NR2E1/Tailless 核受體蛋白NR2E1抗體 0.2ml
51353 OCT6 八聚體結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子6抗體 0.2ml
51354 PAX6 轉(zhuǎn)錄因子Pax6抗體 0.2ml
51355 PLAGL1/ZAC1 多型性腺瘤基因樣蛋白1抗體 0.2ml
51356 SOX22 核轉(zhuǎn)錄因子SOX22抗體 0.2ml
51357 SOX4 核轉(zhuǎn)錄因子SOX4抗體 0.2ml
51358 SUFU/Suppressor of Fused 抑制Hh信號通路蛋白SUFU抗體 0.2ml
51359 DNAH9 軸絲動(dòng)力蛋白重鏈9抗體 0.2ml
51360 phospho-GIT1(Ser375) 磷酸化G蛋白偶聯(lián)受體激酶相互作用蛋白1 0.1ml
51361 KIF3A 驅(qū)動(dòng)蛋白家族蛋白3抗體 0.2ml
51362 KLC1/KNS2 驅(qū)動(dòng)蛋白2抗體 0.2ml
51363 LRRTM1 富含*重復(fù)跨膜神經(jīng)元蛋白1抗體 0.2ml
51364 Nfasc186 神經(jīng)束蛋白186抗體 0.2ml
51365 Plexin B2 神經(jīng)叢蛋白B2抗體 0.2ml
51366 Sprouty1 軟脂酰化磷蛋白Sprouty1抗體 0.1ml
51367 MTMR14 肌管素相關(guān)蛋白14抗體 0.2ml
51368 Pumilio 1 PUM1蛋白抗體 0.2ml
51369 Exportin 5 核輸出蛋白5抗體 0.2ml
51370 PTBP1 核糖核酸結(jié)合蛋白1抗體 0.2ml
51371 phospho-GIT1(Tyr554) 磷酸化G蛋白偶聯(lián)受體激酶相互作用蛋白1 0.1ml
51372 SH3TC2 脫髓鞘相關(guān)蛋白SH3TC2N抗體 0.2ml
51373 Phospho-p53BP1 (Ser1778) 磷酸化p53結(jié)合蛋白1抗體 0.1ml
51374 ATRIP/TREX1 系統(tǒng)性紅斑狼瘡相關(guān)蛋白TREX1抗體 0.2ml
51375 phospho-ATRIP (Ser68+Ser72) 系統(tǒng)性紅斑狼瘡先關(guān)蛋白TREX1抗體 0.1ml
51376 Phospho-ATRIP (Ser224) 系統(tǒng)性紅斑狼瘡先關(guān)蛋白TREX1抗體 0.1ml
51377 Phospho-CHEK1 (Ser296) 磷酸化細(xì)胞周期檢測點(diǎn)激酶1抗體 0.1ml
51378 Microcephalin 1/BRIT1 小腦癥基因1/認(rèn)知相關(guān)蛋白抗體 0.2ml
51379 Phospho-JunB (Thr102/Thr104) 磷酸化活化蛋白激酶B抗體 0.2ml
51380 OTUB1 泛素特異性蛋白酶OTB1抗體 0.2ml
51381 RAD50 DNA修復(fù)蛋白Rad50抗體 0.2ml
51382 phospho-GIT1(Tyr510) 磷酸化G蛋白偶聯(lián)受體激酶相互作用蛋白1 0.1ml
51383 RECQL5 RecQ解旋酶樣蛋白5抗體 0.2ml
51384 RECQL5 RecQ解旋酶樣蛋白5抗體 0.2ml
51385 RPA70 單鏈結(jié)合蛋白70抗體 0.2ml
51386 Miz1/ZNF60 鋅指蛋白60抗體 0.2ml
51387 GRK6 G蛋白偶聯(lián)受體激酶6抗體 0.2ml
51388 Lefty/TGF beta 4 轉(zhuǎn)化生長因子β4抗體TGF β4 0.2ml
51389 TCF12/HEB 轉(zhuǎn)錄因子12抗體 0.2ml
51390 SHANK2 富含*突觸相關(guān)蛋白SHANK2抗體 0.2ml
51391 CREB-H/CREB3L3 環(huán)腺苷酸應(yīng)答元件結(jié)合蛋白H抗體 0.2ml
51392 phospho-Tau protein(Ser202) 磷酸化微管相關(guān)蛋白抗體 0.1ml
51393 AP2M1/AP-2? 接頭相關(guān)蛋白復(fù)合體AP-2μ鏈1抗體 0.2ml
51394 Phospho-AP2M1 (Thr156) 磷酸化接頭相關(guān)蛋白復(fù)合體AP-2μ鏈1抗體 0.1ml
51395 Rab17 人肝癌抗原(PHC)ELISA試劑盒RAS癌基因相關(guān)蛋白RAB17抗體 0.2ml
51396 RAB38 G蛋白結(jié)合蛋白RAB38抗體 0.2ml
51397 TM7SF2/DHCR14A 脫氫*還原酶14抗體 0.2ml
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時(shí),請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時(shí)間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機(jī)。
5人肝癌抗原(PHC)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本,才能保證檢測質(zhì)量?,F(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀,這對于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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