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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時間:2017-02-04 21:41:09瀏覽次數(shù):215次
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人高分子量細(xì)胞角蛋白(CK-HMW)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯(lián)免疫實驗得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人高分子量細(xì)胞角蛋白(CK-HMW)ELISA試劑盒實驗ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人高分子量細(xì)胞角蛋白(CK-HMW)ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗質(zhì)量。
51276 Lamin B2 核纖層蛋白B2抗體 0.2ml
51277 PCDHAC2 原鈣粘蛋白介導(dǎo)的PCDHαC2受體抗體 0.2ml
51278 PCDHB15/PCDHB22 原鈣粘蛋白15抗體 0.2ml
51279 PCDHB16 原鈣粘蛋白16抗體 0.2ml
51280 PCDHB2 原鈣粘蛋白β2抗體 0.2ml
51281 PCDHB4 原鈣粘蛋白β4抗體 0.2ml
51282 PCDHB5 原鈣粘蛋白β5抗體 0.2ml
51283 PCDHB7 原鈣粘蛋白β7抗體 0.2ml
51284 PCDHGA1 原鈣粘蛋白γA1抗體 0.2ml
51285 PCDHGA10 原鈣粘蛋白γ10抗體 0.2ml
51286 PCDHGA4 原鈣粘蛋白γA4抗體 0.2ml
51287 PCDHGA2 原鈣粘蛋白γA2抗體 0.2ml
51288 PCDHGA3 原鈣粘蛋白γA3抗體 0.2ml
51289 PCDHGA5 原鈣粘蛋白γA5抗體 0.2ml
51290 PCDHGA7 原鈣粘蛋白γA7抗體 0.2ml
51291 PCDHGA8 原鈣粘蛋白γA8抗體 0.2ml
51292 PCDHGA9 原鈣粘蛋白γA9抗體 0.2ml
51293 ASPP2/p53BP2 P53凋亡刺激蛋白2抗體 0.1ml
51294 DDIT4/REDD1 DNA損傷誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄蛋白4抗體 0.1ml
51295 PCDHGA11 原鈣粘蛋白γA11抗體 0.2ml
51296 PCDHGA12 原鈣粘蛋白γA12抗體 0.2ml
51297 PCDHB12 原鈣粘蛋白β12抗體 0.2ml
51298 PCDHB3 原鈣粘蛋白β3抗體 0.2ml
51299 PCDHGB1 原鈣粘蛋白γB1抗體 0.2ml
51300 Aspartate Aminotransferase 谷草轉(zhuǎn)氨酶抗體 0.2ml
51301 PCDHGB2 原鈣粘蛋白γB2抗體 0.2ml
51302 PCDHGB4 原鈣粘蛋白γB4抗體 0.2ml
51303 PCDHGB6 原鈣粘蛋白γB6抗體 0.2ml
51304 PCDHGC3/PCDH2 原鈣粘蛋白γC3抗體 0.2ml
51305 PCDHGC4 原鈣粘蛋白γC4抗體 0.2ml
51306 PCDHGC5 原鈣粘蛋白γC5抗體 0.2ml
51307 SPRR1a/Cornifin A 角質(zhì)蛋白α抗體 0.2ml
51308 SPRR3/Cornifin B 角質(zhì)蛋白β抗體 0.2ml
51309 Sidekick 1 細(xì)胞粘附分子伴侶蛋白1抗體 0.2ml
51310 Sidekick 2 細(xì)胞粘附分子伴侶蛋白2抗體 0.2ml
51311 SorLA/LRP9 低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白9抗體 0.2ml
51312 VGLUT1/BNP1 腦特異性鈉依賴無機磷轉(zhuǎn)運蛋白抗體 0.2ml
51313 RASSF5 RASSF5抗體 0.2ml
51314 Cadherin 10 鈣粘附分子10抗體 0.2ml
51315 NXPH1 神經(jīng)外營養(yǎng)蛋白1抗體 0.2ml
51316 NXPH2 神經(jīng)外營養(yǎng)蛋白2抗體 0.2ml
51317 NAP1L2 腦特異性蛋白BPX抗體 0.2ml
51318 NARF 核纖層蛋白A識別因子抗體 0.2ml
51319 KY/Kyphoscoliosis peptidase 脊柱側(cè)后凸畸形肽酶抗體 0.2ml
51320 Lubricin/SZP 淺表層粘膜蛋白多糖抗體 0.2ml
51321 Pregnancy zone protein 妊娠區(qū)帶蛋白PZP抗體 0.2ml
51322 Trypsin Inhibitor/CRISP8 *抑制劑抗體 0.2ml
51323 SPP/Signal Peptide Peptidase 信號肽肽酶SPP抗體 0.2ml
51324 MAdCAM1 粘膜細(xì)胞粘附分子1抗體 0.2ml
51325 ABCA7 三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運蛋白7抗體 0.2ml
51326 Neuroligin 3 突觸細(xì)胞粘附分子3抗體 0.2ml
51327 EMR1 表皮生長因子樣激素受體1 0.2ml
51328 TMPRSS5 跨膜*蛋白酶5抗體 0.2ml
51329 MOBP 少突膠質(zhì)細(xì)胞髓鞘相關(guān)蛋白抗體 0.2ml
51330 CK19/CK17/CK14/CK10/CK42 細(xì)胞角蛋白19,17,14,42,10抗體 0.1ml
51331 CK10/Cytokeratin 10 細(xì)胞角蛋白10抗體 0.1ml
51332 CK42 細(xì)胞角蛋白42 0.1ml
51333 CEBP gamma 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子C/EBPγ抗體 0.1ml
51334 MRCK alpha/CDC42BPA CDC42結(jié)合蛋白激酶α抗體(MRCKα) 0.2ml
51335 C9 補體C9抗體人高分子量細(xì)胞角蛋白(CK-HMW)ELISA試劑盒 0.1ml
51336 MRF/C11orf9 髓鞘基因調(diào)控因子抗體 0.2ml
51337 NG2/CSPG4 黑色素瘤*蛋白多糖4抗體 0.2ml
51338 NSMase2 中性鞘磷脂2抗體 0.2ml
51339 OLIG2 少突膠質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子2抗體 0.2ml
51340 ACL6B/BAF53b 肌動蛋白樣蛋白6B抗體 0.2ml
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人高分子量細(xì)胞角蛋白(CK-HMW)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本,才能保證檢測質(zhì)量。現(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標(biāo)儀,這對于實現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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