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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時間:2017-01-24 20:00:59瀏覽次數(shù):129次
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人黑色素瘤標(biāo)記物(MART/Melan-A)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯(lián)免疫實驗得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人黑色素瘤標(biāo)記物(MART/Melan-A)ELISA試劑盒實驗ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人黑色素瘤標(biāo)記物(MART/Melan-A)ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗質(zhì)量。
51218 PCDH7 原鈣粘蛋白7抗體 0.2ml
51219 JAMC 連接粘附分子C抗體 0.2ml
51220 LRFN2/SALM1 神經(jīng)突觸粘附樣分子1抗體 0.2ml
51221 LRFN3/SALM4 神經(jīng)突觸粘附樣分子4抗體 0.2ml
51222 LRFN4 富含*重復(fù)序列/Ⅲ型纖維連接蛋白4抗體 0.2ml
51223 LRRC4B/NGL3 神經(jīng)突觸蛋白NGL3抗體 0.2ml
51224 LSAMP 大腦邊緣系統(tǒng)相關(guān)膜蛋白抗體 0.2ml
51225 MDGA2 神經(jīng)元膜糖蛋白錨定蛋白2抗體 0.2ml
51226 Myelin PLP 髓磷酯髓鞘蛋白1抗體 0.2ml
51227 NCAM2 神經(jīng)細(xì)胞粘附分子2抗體 0.2ml
51228 MAS1 GTP結(jié)合蛋白MAS1抗體 0.1ml
51229 NEGR1 神經(jīng)生長調(diào)節(jié)蛋白1抗體 0.2ml
51230 NIPAL2 NIPAL2蛋白抗體 0.2ml
51231 NIPAL3 NIPA樣蛋白3抗體 0.2ml
51232 NLGN2 神經(jīng)連接蛋白2抗體 0.2ml
51233 MAS1L G蛋白偶聯(lián)受體MAS相關(guān)蛋白抗體 0.2ml
51234 NLGN4X 神經(jīng)元X連鎖蛋白抗體(兒童自閉癥相關(guān)蛋白) 0.2ml
51235 NLGN4Y 神經(jīng)元Y連鎖蛋白抗體(兒童自閉癥相關(guān)蛋白) 0.2ml
51236 SGPL1 磷酸鞘氨醇裂解酶1抗體 0.1ml
51237 MASH1 神經(jīng)母細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)移因子抗體 0.1ml
51238 GNA12/G protein alpha 12 鳥苷酸調(diào)節(jié)蛋白12抗體 0.1ml
51239 Squalene Epoxidase 鯊烯環(huán)氧酶抗體 0.2ml
51240 MACC1 結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白1抗體 0.2ml
51241 NRXN3 軸突蛋白3抗體 0.1ml
51242 Neprilysin 2 腦啡肽酶2抗體 0.2ml
51243 Netrin G2 軸突生長誘向因子G2抗體 0.2ml
51244 Neurexin 2 軸突蛋白2抗體 0.2ml
51245 Ninjurin 1 神經(jīng)損傷誘導(dǎo)蛋白1抗體 0.2ml
51246 Ninjurin 2 神經(jīng)損傷誘導(dǎo)蛋白2抗體 0.2ml
51247 PCDH11X 原鈣粘附蛋白11X抗體 0.2ml
51248 PCDH11Y 原鈣粘附蛋白11Y抗體 0.2ml
51249 PCDH12 原鈣粘附蛋白12/血管內(nèi)皮鈣粘蛋白2抗體 0.2ml
51250 PCDH17 原鈣粘附蛋白17抗體 0.2ml
51251 PCDH1 原鈣粘附蛋白1抗體 0.2ml
51252 PCDH18 原鈣粘附蛋白18抗體 0.2ml
51253 PCDH20 原鈣粘附蛋白20抗體 0.2ml
51254 ASF1A 細(xì)胞衰老相關(guān)蛋白ASF1A抗體 0.1ml
51255 PCDH8 原鈣粘附蛋白8抗體 0.2ml
51256 PCDHA1 原鈣粘附蛋白α1抗體 0.2ml
51257 PCDHA2 原鈣粘附蛋白α2抗體 0.2ml
51258 PCDHA3 原鈣粘附蛋白α3抗體 0.2ml
51259 PCDHA4 原鈣粘附蛋白α4抗體 0.2ml
51260 PCDHA5 原鈣粘附蛋白α5抗體 0.2ml
51261 PCDHA9 原鈣粘附蛋白α9抗體 0.2ml
51262 phospho-GNA12(Ser68) 磷酸化鳥苷酸調(diào)節(jié)蛋白12抗體 0.1ml
51263 PCDHA7 原鈣粘附蛋白α7抗體 0.2ml
51264 PCDHA8 原鈣粘附蛋白α8抗體 0.2ml
51265 PCDHA10/CNRN8 鈣粘蛋白相關(guān)神經(jīng)受體8抗體 0.2ml
51266 ASIC1/BNaC2 酸敏感離子通道1抗體 0.1ml
51267 PCDHA11 原鈣粘蛋白11抗體 0.2ml
51268 ROM1 視網(wǎng)膜感光細(xì)胞外節(jié)膜蛋白1抗體 0.2ml
51269 PVRL1/CD111/Nectin1 脊髓灰質(zhì)炎受體相關(guān)蛋白1抗體 0.2ml
51270 CD11b/c equivalent CD11B/CD11C抗體 0.2ml
51271 CASPR/Neurexin4 人黑色素瘤標(biāo)記物(MART/Melan-A)ELISA試劑盒 軸突蛋白4/少突膠質(zhì)細(xì)胞抗體 0.2ml
51272 Caspr2 軸突相關(guān)CNTP2蛋白抗體(少突膠質(zhì)細(xì)胞) 0.2ml
51273 VAT1L/KIAA1576 突觸小泡膜蛋白同源樣蛋白1抗體 0.2ml
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人黑色素瘤標(biāo)記物(MART/Melan-A)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本,才能保證檢測質(zhì)量。現(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標(biāo)儀,這對于實現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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